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石蠟切片不僅用于觀察正常細胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu),，也是病理學(xué)和法醫(yī)學(xué)等學(xué)科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態(tài)變化的主要方法,，而且也已相當廣泛地用于其他許多學(xué)科領(lǐng)域的研究中,。 石蠟切片 1. 固定： 將新鮮組織切成小塊，固定于4%多聚甲醛過夜,。凝固組織中的物質(zhì)成分,，盡可能保持其活體時的結(jié)構(gòu)。同時能使組織硬化,，有利于切片的進行,。 2.脫水： 為了減少組織材料的急劇收縮，應(yīng)使用從低濃度到高濃度遞增的順序進行經(jīng)70%,、85%,、95%直至純酒精（無水乙醇），每次時間為1小時,。固定后的組織材料需除去留在組織內(nèi)的固定液及其結(jié)晶沉淀,，否則會影響后期的染色效果。 3.透明： 常用的透明劑有二甲苯,，二甲苯是石蠟的溶劑,。純酒精不能與石蠟相溶，還需用能與酒精和石蠟相溶的溶劑,，替換出組織內(nèi)的酒精。材料塊在透明劑浸漬過程稱透明,。 4.浸蠟： 先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬1小時,。先后移入2個熔化的石蠟液中浸漬1小時左右。 5.包埋： 以少許熱蠟液將其底部迅速貼附于包埋盒內(nèi)上,，然后置于速凍臺,，讓石蠟固定。 6.切片： 切片刀的銳利與否,、蠟塊硬度是否適當都直接影響切片質(zhì)量,，可將蠟塊至于冷水中改變蠟塊硬度。通常切片厚度為3-5um,，用毛筆輕托輕放在37度水浴中展片,。 7.貼片與烤片： 一般使用恒溫水浴鍋，溫度控制在37-40℃左右,，有利于石蠟切片的展開,，貼好的切片置于60℃恒溫箱內(nèi)干燥2小時,，蛋白質(zhì)凝固后即可染色。 8.切片脫蠟及水化： 干燥后的切片置于二甲苯中進行脫蠟,，然后依次使用從高濃度到低濃度遞減的順序進行經(jīng)純酒精,、95%、85%,、70%進行水化,。 9.染色： 經(jīng)典的蘇木精和伊紅：細胞核被蘇木精染成紫藍色，多數(shù)細胞質(zhì)及非細胞成分被伊紅染成粉紅色,。實驗操作簡單,。 免疫組化：指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)。 |
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