教學(xué)研究：有絲分裂的實(shí)驗(yàn)中,，其實(shí)有兩個(gè)實(shí)驗(yàn)要求,，一是永久裝片的觀察，二是臨時(shí)裝片的制作和觀察,。教學(xué)中比較重視臨時(shí)裝片的制作與觀察,，忽視永久裝片的觀察實(shí)驗(yàn)。那么,，永久裝片又是怎么制作的,？以前大學(xué)學(xué)習(xí)時(shí)沒有選修，參考百度文庫,，摘錄常用的石蠟切片的制作方法如下：

第一步：取材

應(yīng)根據(jù)要求選取材料來源及部位,。材料必須新鮮，擱置時(shí)間過久則產(chǎn)生蛋白質(zhì)分解變性,，導(dǎo)致細(xì)胞自溶及細(xì)菌的滋生,，而不能反映組織活體時(shí)的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

第二步：固定

用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)藥液——固定液浸漬切成小塊的新鮮材料,，迅速凝固或沉淀細(xì)胞和組織中的物質(zhì)成分,、終止細(xì)胞的一切代謝過程、防止細(xì)胞自溶或組織變化,，盡可能

保持其活體時(shí)的結(jié)構(gòu),。固定能使組織硬化，有利于切片的進(jìn)行,，而且也有媒浸作用,，有利于組織著色。

第三步：洗滌與脫水

固定后的組織材料需除去留在組織內(nèi)的固定液及其結(jié)晶沉淀,，否則會(huì)影響以后的染色效果,。多數(shù)用流水沖洗；使用含有苦味酸的固定液固定的則需用酒精多次浸洗,；如果組織經(jīng)酒精或酒精混合液固定，則不必洗滌,，可直接進(jìn)行脫水,。

酒精為常用脫水劑，它既能與水相混合,，又能與透明劑相混,，為了減少組織材料的急劇收縮,，應(yīng)使用從低濃度到高濃度遞增的順序進(jìn)行，通常從30%或50%酒精開始,，經(jīng)70%,、85%、95%直至純酒精（無水乙醇）,，每次時(shí)間為1～數(shù)小時(shí),，如不能及時(shí)進(jìn)行各級(jí)脫水，材料可以放在70%酒精中保存,，因高濃度酒精易使組織收縮硬化,，不宜處理過久。

第四步：透明

純酒精不能與石蠟相溶,，還需用能與酒精和石蠟相溶的媒浸液,，替換出組織內(nèi)的酒精。材料塊在這類媒浸液中浸漬,，出現(xiàn)透明狀態(tài),，此液即稱透明劑，透明劑浸漬過程稱透明,。常用的透明劑有二甲苯,、苯、氯仿,、正丁醇等,，各種透明劑均是石蠟的溶劑。

第五步：浸蠟與包埋

用石蠟取代透明劑,，使石蠟浸入組織而起支持作用,。通常先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬1～2小時(shí)，再先后移入2個(gè)熔化的石蠟液中浸漬3小時(shí)左右,，浸蠟應(yīng)在高于石蠟熔點(diǎn)3℃左右的溫箱中進(jìn)行,，以利石蠟浸入組織內(nèi)。浸蠟后的組織材料塊放在裝有蠟液的容器中（擺好在蠟中的位置）,，待蠟液表層凝固即迅速放入冷水中冷卻,，即做成含有組織塊的蠟塊。容器可用光亮且厚的紙折疊成紙盒或金屬包埋框盒,。如果包埋的組織塊數(shù)量多,，應(yīng)進(jìn)行編號(hào)，以免差錯(cuò),。石蠟熔化后應(yīng)在蠟箱內(nèi)過濾后使用,，以免因含雜質(zhì)而影響切片質(zhì)量，且可能損傷切片刀。通常石蠟采用熔點(diǎn)為56～58℃或60～62℃兩種,，可根據(jù)季節(jié)及操作環(huán)境溫度來選用,。

第六步：切片

包埋好的蠟塊用刀片修成規(guī)整的方形或長(zhǎng)方形，以少許熱蠟液將其底部迅速貼附于小木塊上,，夾在輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)的蠟塊鉗內(nèi),，使蠟塊切面與切片刀刃平行，旋緊,。切片刀的銳利與否,、蠟塊硬度適當(dāng)都直接影響切片質(zhì)量，可用熱水或冷水等方法適當(dāng)改變蠟塊硬度,。通常切片厚度為4～7微米,，切出一片一片的蠟帶。

第七步：貼片與烤片

用粘附劑將展平的蠟片牢附于載玻片上,，以免在以后的脫蠟,、水化及染色等步驟中二者滑脫開。粘附劑是明膠,。首先在潔凈的載玻片上涂抹薄層明膠,，再將一定長(zhǎng)度蠟帶（連續(xù)切片）或用刀片斷開成單個(gè)蠟片于溫水（45℃左右）中展平后，撈至玻片上鋪正,，或直接滴兩滴蒸餾水于載玻片上,，再把蠟片放于水滴上，略加溫使蠟片鋪展,，最后用濾紙吸除多余水分,，將載玻片放入45℃溫箱中干燥，也可在37℃溫箱中干燥,，但需適當(dāng)延長(zhǎng)時(shí)間,。

第八步：切片脫蠟及水化

干燥后的切片需脫蠟及水化才能在水溶性染液中進(jìn)行染色。用二甲苯脫蠟,，再逐級(jí)經(jīng)純酒精及梯度酒精直至蒸餾水,。如果染料配制于酒精中，則將切片移至與酒精近似濃度時(shí),，即可染色,。

第九步：染色

染色劑種類繁多，應(yīng)根據(jù)觀察要求及研究?jī)?nèi)容采用不同的染色劑及染色方法,，還要注意選用適宜的固定劑才能取得滿意的結(jié)果,。經(jīng)典的蘇木精和伊紅染色法是組織學(xué)標(biāo)本及病理切片標(biāo)本的常規(guī)染色，簡(jiǎn)稱HE染色,。經(jīng)HE染色后,，細(xì)胞核被蘇木精染成紫藍(lán)色,，多數(shù)細(xì)胞質(zhì)及非細(xì)胞成分被伊紅染成粉紅色,。由于蘇木精是帶陽離子的染料,，染液呈堿性，核內(nèi)染色質(zhì)及胞質(zhì)內(nèi)核糖體等物質(zhì)對(duì)這種染料有親和性,，稱嗜堿性,；而帶陰離子的染料伊紅配制的染液呈酸性，對(duì)這種染料的親和性,，稱嗜酸性,。有時(shí)不同的組織結(jié)構(gòu)還需要用特殊的染料及染色方法加以顯示，稱特殊染色,。有些細(xì)胞組織經(jīng)硝酸銀浸潤(rùn)后,，可使溶液中銀離子還原成金屬銀或銀粒附著在細(xì)胞組織上，呈棕黑色,，這種性質(zhì)稱親銀性,，而有些細(xì)胞組織本身不能使硝酸銀的銀離子還原成金屬銀，還需加還原劑才能將銀離子還原,，稱嗜銀性,。

第十步：切片脫水、透明和封片

染色后的切片尚不能在顯微鏡下觀察,，需經(jīng)梯度酒精脫水,，在95%及純酒精中的時(shí)間可適當(dāng)加長(zhǎng)以保證脫水徹底；如染液為酒精配制,，則應(yīng)縮短在酒精中的時(shí)間,，以免脫色。二甲苯透明后,，迅速擦去材料周圍多余液體,，滴加適量（1～2滴）中性樹膠，再將潔凈蓋玻片傾斜放下,，以免出現(xiàn)氣泡,，封片后即制成永久性玻片標(biāo)本，在光鏡下可長(zhǎng)期反復(fù)觀察,。