免疫熒光技術是以抗原抗體反應為基礎，結合熒光標記示蹤,，對細胞或組織內的特定物質進行定性或定位的一種檢測技術,，兼具高特異性和高靈敏度的優(yōu)點。免疫熒光技術既可以應用于細胞,，也可以應用于組織樣本,。基于抗原抗體反應具有的高度特異性,，將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上,，熒光素標記抗體與組織細胞抗原反應，洗滌分離后用熒光顯微鏡觀察呈特異熒光的抗原抗體復合物及其部位,，對組織細胞抗原進行定性和定位檢測,，或對自身抗體進行定性和滴度測定。用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法,；用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法稱熒光抗原法,。

用于免疫熒光標記的熒光物質要求能夠與抗體穩(wěn)定結合，易于保存,，標記抗體的同時既不影響抗體原有的高特異性,、高親和力，熒光物質自身也保持較高的熒光效率,。免疫熒光常用染料有異硫氰酸熒光素FITC,、藻紅蛋白類PE、羅丹明等,。根據(jù)熒光素標記的抗體的不同可分為直接法和間接法,。直接法是將標記的特異性熒光抗體，直接加在抗原標本上,，經(jīng)一定的溫度和時間的染色,，用水洗去未參加反應的多余熒光抗體，室溫下干燥后封片、鏡檢,。間接法先用已知未標記的特異抗體（第一抗體）與抗原標本進行反應,，用水洗去未反應的抗體，再用熒光標記的抗抗體（第二抗體）與一抗反應,，使之形成抗原-抗體-二抗復合物,，再用水洗去未反應的標記抗體，干燥,、封片后鏡檢,。相較于間接法，直接法特異性好,，操作簡便,，速度更快。^[1]區(qū)別于免疫組化酶底物染色方法,，熒光示蹤不需要顯色反應的步驟直接在特定波長發(fā)光,，在特異性及靈敏度上更優(yōu)，同時有需要的話也更方便進行多重染色,。冰凍切片用于免疫熒光,，操作快速步驟簡單，抗原表位處于較天然的狀態(tài),，能夠較好地保存組織的抗原免疫活性,。^[2]

免疫熒光技術廣泛應用于腎小球疾病和某些皮膚疾病的診斷中。腎組織冰凍切片的免疫熒光染色法特異性強,、敏感度高,，對熒光標記物的分布部位、分布型式和熒光強度顯示極為明確,，因此為國際上公認的較好觀察方法,。^[3]某些皮膚疾病的免疫球蛋白的沉積模式具有特征性，免疫熒光檢測在大皰性皮損,、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和血管炎中尤其有用,。

免疫熒光法是評估腎臟活檢的金標準。它是一種一步式技術,，方法相對簡單,，靈敏度高，特異性強,并且是大多數(shù)組織病理學家的首選,。該方法利用熒光素標記的抗體檢測腎臟冰凍切片上的免疫球蛋白IgA,、IgG、IgM,、kappa,、lambda,、C3,、C1q和纖維蛋白,，用于腎臟疾病的診斷。^[4]我國腎病專業(yè)醫(yī)療控制指標指出IgA腎病病理切片染色至少包括光鏡染色（HE,、PAS,、Masson、PASM）和免疫熒光染色（IgG,、IgA,、IgM、C3,、C4或 C1q,、Fib）。^[5]腎小球腎炎的發(fā)病機制為Ⅲ型變態(tài)反應,。引起變態(tài)反應的抗原在體內誘導機體產(chǎn)生抗體,，即免疫球蛋白，主要為IgG,、IgA和IgM,。免疫球蛋白與抗原形成循環(huán)免疫復合物沉積于腎小球或直接在腎小球形成原位免疫復合物，導致腎小球腎炎的發(fā)生,?？梢耘c免疫球蛋白IgA的α鏈反應，用于腎小球腎炎的免疫復合物種類檢測,，有助于對腎小球腎炎的功能性分類,。人體內免疫復合物可通過經(jīng)典途徑和旁路途徑激活補體從而引起變態(tài)反應造成腎小球組織的損傷。在腎小球疾病中,，補體多數(shù)通過旁路途徑激活,，少數(shù)經(jīng)經(jīng)典途徑激活。腎活檢中常用的補體抗體為C3,、C4,、C1q及備解素。