食品微生物檢測

（一）,、前期做好充足的準備工作：

根據(jù)國家標準，提前準備好要用的平板計數(shù)瓊脂,、平皿,、試管、稀釋液（生理鹽水）,、三角燒瓶等,。

（二）、樣品接受：

收到樣品后,，確認樣品包裝是否完好,，并將其保存在2~8℃冰箱中，然后在能力驗證平臺進行確認,。

（三）,、樣品處理：

按照作業(yè)指導(dǎo)書操作（一定要仔細閱讀作業(yè)指導(dǎo)書）看看是幾個樣品及實驗記錄要求。一般實驗室收到的是干粉樣品或者是固體樣品等,。假如收到的是干粉樣品,，那么第一步就要水化。

樣品水化步驟（建議）：一般能力驗證樣品以國體粉末形式發(fā)放,，以液體（CFU/mL）形式出報告,。樣品水化前一定要認真,、仔細閱讀作業(yè)指導(dǎo)書,，看看用多少稀釋液水化，水化后作為原液還是多大濃度的樣品來記錄,。

（四）,、實驗前準備：

a、能力驗證時最好在超潔凈臺或者生物安全柜里操作，這樣就要把超潔凈臺或者生物安全柜提前清理,、消毒處理,，確保實驗環(huán)境無菌。

b,、提前把要用到的平皿,、試管、稀釋液等放到操作臺上,。

（五）,、實驗操作：

a、稀釋

將樣品從冰箱中取出達到室溫后開啟使用,，在超潔凈臺或者生物安全柜下先用少許稀釋液（選取的生理鹽水）進行水化后吸入無菌瓶或袋中,，再用剩余的稀釋液進行洗滌并全部轉(zhuǎn)入無菌瓶或袋中。（具體公需多少稀釋液要看作業(yè)指導(dǎo)書說明）

洗滌轉(zhuǎn)移時注意樣品瓶蓋的清洗和無菌操作,，將全部的水化液進行均質(zhì)混勻,，一般作為原液立刻進行接種；再取25ml到225ml稀釋液中均質(zhì)混勻,，制成10-1梯度樣品勻液,。

用1ml無菌吸管取1:10的樣液到9ml生理鹽水試管中，制成1:100的樣液,，以此類推,。再將幾個稀釋度的樣液接種到提前做好標記的無菌平皿中。

注意事項：

a.一般能力驗證的樣品添加的菌落濃度都比較高,，檢測過程一定要多做幾個稀釋度，每個稀釋度多做幾個平板平行,。

b.梯度稀釋：是關(guān)鍵步驟,，必須盡可能地減少誤差（新手建議渦旋混勻，渦旋時間不宜過長,，長時間離心力等作用下,，微生物細胞可能死亡）。

c,、傾注用培養(yǎng)基應(yīng)在46℃水浴內(nèi)保溫,，溫度過高會影響細菌生長，過低瓊脂易于凝因而不能與菌液充分混勻,。如無水浴,，應(yīng)以皮膚感受較熱而不燙為宜。

d,、傾注培養(yǎng)基的量規(guī)定不一,，從12~20ml不等，一般以15ml較為適宜,，平板過厚可影響觀察,，太薄又易于干裂。傾注時,，培基底部如有沉淀物,，應(yīng)將底部棄去，以免與菌落混淆而影響計數(shù)觀察,。

e,、傾注過程力度一定掌握好，絕不能把瓊脂濺出來,。

f,、為使菌落能在平板上均勻分布，檢液加入平皿時要盡可能放在中央部位,，然后應(yīng)盡快傾注培養(yǎng)基并旋轉(zhuǎn)混勻,，可正反兩個方向旋轉(zhuǎn)，檢樣從開始稀釋到傾注最后一個平皿所用時間不宜超過20min,，以防止細菌有所死亡或繁殖,。

g、瓊脂瓶放水浴鍋前一定要混合均勻,，以防出現(xiàn)平皿不凝固現(xiàn)象,；拿出傾注時要用噴有75%酒精的抹布擦拭干凈。

h,、冷卻的過程不要著急,，冷卻充分后再倒置放進培養(yǎng)箱培養(yǎng)，放置的時候要盡量避免放到風(fēng)機口處,，每摞不要超過6個平皿,。

i、檢驗結(jié)束后所有的稀釋液樣品一定要放到冰箱里0-5℃冷藏,，以備必須再用（一旦第二天發(fā)現(xiàn)實驗做錯了,，在做一次實驗，死馬當(dāng)活馬醫(yī)）,。