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有關(guān)微生物檢驗問題解答匯總 衛(wèi)生學(xué)檢驗： 微生物限度 1. 包裝材料的大腸埃希菌檢查,？ 答：根據(jù)包裝材料的不同，大腸埃希菌的檢查方法大致有兩種,，一種是將浸提液合并后,，取 一部分，接種膽鹽乳糖培養(yǎng)基進行檢查,；另一種是將浸提液合并后,，薄膜過濾，然后按規(guī)定 的方法檢驗,。 2. 抗真菌藥品的微生物限度檢查法 答：這類產(chǎn)品的霉菌和酵母菌計數(shù)方法需要進行調(diào)整,，可以根據(jù)產(chǎn)品劑型的不同，選擇薄膜 過濾法或培養(yǎng)基稀釋法等方法,。 3. 為什么在日常樣品檢測中還需要做陽性對照（國外不需要）,？ 答：為了確保每一次檢測對可能存在的微生物都是有效的。 4. 對于同一個品種,，藥典為什么不規(guī)定統(tǒng)一的檢測方法,？ 答：本版藥典進行過這樣的嘗試，也有某些品種已經(jīng)收載了統(tǒng)一的檢測方法,，如注射用頭孢 類抗生素的無菌檢查,。之所以沒有大量收載，主要是由于檢測方法還沒有經(jīng)過必要的復(fù)核,。 將微生物檢驗的統(tǒng)一方法收載在品種的各論項下,，始終是努力的方向。 5. 梭菌檢查中需置厭氧條件下培養(yǎng)48小時,，是否指在厭氧培養(yǎng)箱中,？ 答：需要在厭氧培養(yǎng)裝置中進行培養(yǎng)，未必一定是厭氧培養(yǎng)箱,。 6. 控制菌檢查方法驗證時,，采用多種方法均未檢出控制菌，如何處理,？ 答：在確保所使用的各種方法都沒有錯誤的情況下,，如果仍無法使試驗菌生長，則應(yīng)該采用 薄膜過濾法進行檢查,。理由是該方法能夠最大程度地去除產(chǎn)品的抑菌作用,。 7. 常規(guī)的監(jiān)督抽樣檢品（包括原料）在進行微生物限度檢查時，是否一定要進行活螨檢查 并在原始記錄與報告書中體現(xiàn),？ 答：需要進行檢查,。可以在原始記錄中體現(xiàn),，報告書上可以不出現(xiàn),，除非當(dāng)發(fā)現(xiàn)有活螨檢出,。 8. 藥包材微生物限度檢查規(guī)定了合格質(zhì)量水平，通常產(chǎn)量下取樣8個,，要求8個瓶子均符 合規(guī)定,，如何進行,？ 答：每個瓶子分別進行實驗,。 9. 大腸埃希菌具體操作規(guī)程？ 答：參見中國藥品檢驗標準操作規(guī)程,。 10. 動物組織及動物類原藥材的提取物入藥,，是否需要檢沙門菌？ 答：需要進行沙門菌檢查,。 11. 關(guān)于中國藥典菌落計數(shù)結(jié)果的判斷還存在疑義,，望能舉例說明。 答：不清楚所指的存在疑義是指哪方面,。2010年版對結(jié)果報告進行了較大篇幅的修訂,，目 前的規(guī)定應(yīng)該比05版更為清晰、明確,。 12. 需做沙門菌檢驗樣品量的確定,？ 答：10g（ml）用于樣品計數(shù)檢驗和其他控制菌檢查，10g（ml）用于沙門菌檢查,，10g（ml） 用于沙門菌檢查的陽性對照,。需要進行沙門菌檢查的樣品，檢驗用量應(yīng)為30g（ml）,。 13. 日常的實驗室裝備能否達到梭菌無氧的培養(yǎng)要求,？ 答：完全可以?？梢圆捎脜捬跖囵B(yǎng)盒（罐）,。 14. 如果一個產(chǎn)品有兩個規(guī)格，是否可以取其中之一做陽性對照,？ 答：每個規(guī)格均需進行陽性對照,。 15. 細菌數(shù)為100g/g的，樣品稀釋級只做1:10,1:100的倍數(shù)就可以了嗎,？ 答：可以,。 16. 培養(yǎng)時間3天，5天,，可理解為72小時,，120小時嗎？ 答：可以,。這樣更為嚴謹,。 17. 中國藥品檢驗標準操作規(guī)范“已做驗證試驗的供試品,，在檢查時刻不必再做陽性對照” 如何理解？ 答：該標準操作規(guī)范中在無菌檢查法中規(guī)定“供試品無菌檢查應(yīng)進行陽性對照試驗”,，表明 不論是否進行了方法驗證,，在產(chǎn)品的每一次檢驗過程中，還必須進行陽性對照,。 在控制菌檢查的大腸埃希菌項下,，指出“已做驗證試驗的供試品，在該供試品檢查時不必再 作陽性對照”,。該規(guī)定僅適用方法驗證與供試品檢查同時開展的情況,。2005年版藥典和2010 年版藥典在控制菌檢查中均對陽性對照試驗有明確規(guī)定，“進行供試品控制菌檢查時,，應(yīng)做 陽性對照試驗,。”產(chǎn)品檢驗中應(yīng)以藥典規(guī)定為準,。 18. 無菌檢查和微生物限度檢查中,，產(chǎn)品中規(guī)定的溶解液是否可以換成其他的溶液？ 答：可以,。 19. 制劑通則中,，沒有微生物檢查項目的，是否可不進行微生物項目檢測,？ 答：可以,。主要是二部制劑通則中口服片劑、膠囊劑,、丸劑和顆粒劑,。 20. 在細菌、霉菌和酵母菌計數(shù)中,，適用性檢查細菌是培養(yǎng)48小時,，霉菌和酵母菌是培養(yǎng) 72小時，供試品檢查中細菌是培養(yǎng)3天,，霉菌和酵母菌是培養(yǎng)5天,，那方法驗證中應(yīng) 參照哪個時間進行培養(yǎng)。 答：應(yīng)按照供試品檢驗時的條件,，即細菌3天,，霉菌和酵母菌5天。 21. 測定純化水微生物限度時,，每張濾膜過濾量是多少合適,？需要先稀釋嗎？過濾完后需不 需要沖洗,？假如我取10ml純化水通過雙杯體封閉式薄膜過濾器過濾,，每張濾膜上的計 數(shù)是以5ml為單位還是10ml為單位,？ 答：過濾量應(yīng)以培養(yǎng)后出現(xiàn)的微生物數(shù)不超過100cfu/膜為標準。一般可不稀釋,。不需要沖 洗,。每張濾膜的過濾量為5ml。 22. 2010藥典中關(guān)于純化水的微生物限度是：細菌,、霉菌及酵母菌總數(shù)每1ml不得過100 個,。這句話的意思是細菌總數(shù)每1ml不得過100個，霉菌及酵母菌總數(shù)不得過100個,， 還是細菌+霉菌+酵母菌總數(shù)每1ml不得過100個,。如果是三者總數(shù)的話，那細菌總數(shù) 限度是多少,？霉菌及酵母菌總數(shù)限度又是多少？ 答：是總數(shù)不得過100個,。沒有必要考慮各自的限度值,。 無菌： 1. 應(yīng)用已驗證合格的滅菌程序?qū)ε囵B(yǎng)基進行滅菌，還需要每批做無菌性檢查嗎,？如何理解 “每批”,？ 答：需要。是指每一個配制批,。 2. 新增0.5%葡糖糖肉湯培養(yǎng)基（用于硫酸鏈霉素等抗生素的無菌檢查）此句應(yīng)如何理解,？ 答：該培養(yǎng)基并不是新增的。專用于檢驗鏈霉素依賴型細菌,。 3. 無菌檢查每片濾膜總沖洗量不能超過1000ml,，是否包括稀釋液？ 答：不包括,。 4. 穩(wěn)定性考察做無菌檢查項時,，留樣量是否同時考慮檢驗損耗和重試數(shù)量？若要重試,，無 菌檢查時限較長,，結(jié)果是否可信？ 答：理論上講需要考慮重試數(shù)量,。真需要重試時,，重試時刻會比穩(wěn)定性考察規(guī)定的時間點略 遲，這種時間差是由于無菌檢查法實驗設(shè)計造成的,，結(jié)果當(dāng)然可信,。 5. 通常無菌檢查在進行樣品檢驗的同時，除進行沉降菌檢測外,，是否一定要同時進行其他 項目的采樣,？ 答：按照2010年版藥典的規(guī)定,，日常檢驗需對環(huán)境進行監(jiān)控。從環(huán)境監(jiān)控的范圍分析,，僅 僅只進行沉降菌監(jiān)控是不夠的,。 6. 在做日常無菌檢查時要求進行環(huán)境監(jiān)控，從哪些方面監(jiān)控,？ 答：主要包括：空氣中的微生物,、表面微生物（包括人體、物品,、儀器設(shè)備,、耗材等）和消 毒劑中的微生物。 7. 在新版的藥典中提出了陽性對照管需生長良好是判斷結(jié)果的前提,，著重強調(diào)了陽性對照 試驗,。陽性對照是每批培養(yǎng)基做一個，還是每次實驗做一個,？藥典方法上說每批無菌檢 查都要做陽性對照,，但我在好多資料上看到只要是同品種、不同批次,，在同一天做的就 可以只做一批的陽性對照,，但這到底可行嗎？ 答：無菌檢查中的陽性對照應(yīng)該是每一批樣品都要進行的,。 方法驗證： 1. 做過驗證的樣品微生物檢驗方法是否都需要按照新的方法進行重新驗證,？ 答：對于微生物限度檢查的產(chǎn)品而言，由于培養(yǎng)時間調(diào)整,，應(yīng)重新進行驗證,。對于無菌檢查 的產(chǎn)品而言，如果方法未作實質(zhì)性調(diào)整,，可以不必重新驗證,。個別產(chǎn)品在各論中收載了新的 無菌檢查方法，對這些品種,，應(yīng)對收載方法的適用性進行驗證,。 2. 以前做過無菌驗證的品種是否需要重新按照新的標準再驗證？ 答：參見問題1,。 3. “新增抗生素供試品應(yīng)選擇低吸附的濾器及濾膜” 比如注射用克林霉素磷酸酯屬于抗 生素,，是否需要重新選取濾膜再驗證？ 答：目前采用的方法如果經(jīng)驗證表明可行,，則可以繼續(xù)使用該方法,。 4. 微生物方法學(xué)驗證時，培養(yǎng)時間是否跟樣品日常檢驗所培養(yǎng)時間一致？ 答：應(yīng)該一致,。 5. 微生物限度驗證時,，如果一個方法只有金葡回收率達不到要求，該方法時是否可以用來 做細菌霉菌的檢測方法,？ 答：按藥典的規(guī)定,，一個計數(shù)方法通過驗證，是指所有試驗菌的回收率均達到要求,。如果采 用各種方法以及方法的組合仍無法使金葡回收率達標,，則可以采用使金葡回收率最高的方法 作為計數(shù)方法。 6. 薄膜過濾的沖洗量不能超過1000ml,，我公司的喹諾酮類產(chǎn)品原來的方法是每張膜沖洗 量為1500和2000ml,，請問有沒有合適的方法將沖洗量降至1000，各菌的回收率仍能 符合規(guī)定,？ 答：有幾種辦法可以降低沖洗劑的用量：1）降低接觸濾膜的供試品的濃度,；2）改進沖洗的 方式，如少量多次地沖洗,、降低蠕動泵的轉(zhuǎn)速等,；3）添加中和劑，如高價金屬離子,。 7. 微生物限度檢查法規(guī)定，技術(shù)方法驗證時,，采用上述方法若還存在一株或多株試驗菌的 回收率達不到要求,，那么選擇回收率最接近要求的方法和試驗條件進行供試品檢驗。請 問,，上述方法是指僅通過一種方法還是一定要通過幾種方法聯(lián)用的,？ 答：應(yīng)該要把可能采用的所有方法包括方法聯(lián)用都進行驗證。 8. 供試品不溶于稀釋劑,，同時又有抑菌性,，限度檢查時應(yīng)如何消除抑菌性？ 答：采用低速離心的方式,，盡可能把供試品去除干凈,，取離心后的上層液，進行薄膜過濾,。 9. 不溶于水的固體產(chǎn)品,，加表面活性劑后，如何操作才能在方法驗證中得到較好的回收 率,？ 答：同問題8,。 10. 有些品種2010年藥典與2005年比較檢驗方法變了，是否需要驗證或確認？ 答：同問題1,。 菌種管理： 1. 濃菌液的有效期該如何確定,？ 答：藥典沒有規(guī)定?？梢酝ㄟ^實驗確定有效期,。例如，在不同的時間點測定濃菌液的濃度,， 從而判斷其有效期,。 2. 藥典要求菌液在制備后2小時內(nèi)使用，若保存在2-8℃的菌懸液可在在24小時內(nèi)使用,， 那我們在做驗證或陽性對照是要加一定量的菌就沒有時間進行平板計數(shù)了,，該如何確保 所加菌量準確？ 答：藥典對稀釋菌液的使用期限作出規(guī)定,，并不會影響操作過程中稀釋菌液的加入,。即便不 規(guī)定，也無法在準確知道菌液濃度的情況下加入試驗菌,。菌液稀釋的實驗操作和加入菌液的 實驗操作應(yīng)該是在同一次實驗中完成的,，要使加入的菌量符合藥典的規(guī)定，可以從濃菌液的 制備方法,、菌液稀釋的方法等方面進行規(guī)范,，也可以引入濁度比較的方法。 3. 菌懸液能否在倒平板之前確定菌含量,？ 答：活菌含量是無法確定的,。總菌量可以通過比濁的方式確定,。 4. 具體從哪些方面進行菌種菌株的特性和純度確認,？如何操作？ 答：基層的微生物實驗室進行菌種純度確認可以考慮以下一些方面：1）形態(tài)學(xué)鑒定,，包括 菌落形態(tài)和染色形態(tài),；2）生化鑒定，可以考慮使用API鑒定系統(tǒng),。 5. 黑曲霉凍干菌種如何轉(zhuǎn)種,，傳代？ 答：與其他菌種一樣,，所不同的是使用的培養(yǎng)基應(yīng)改為改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基,。 6. 干粉狀的是否可做第0代使用？ 答：只要是菌種保藏機構(gòu)提供的凍干保藏的菌種,，可以確定為第0代,。 7. 菌種每次傳代都要做純度、特性等的確認嗎？ 答：從外部購入的菌種,，在進入本實驗室的菌種保藏體系時,，需要進行純度和特性的確認。 以后的每次傳代,，可以通過顯色培養(yǎng)基做簡單的確認即可,。 8. 如采用低溫保存菌種，需購買哪些設(shè)備,？能夠到省所進行實際操作培訓(xùn),？ 答：低溫冰箱，應(yīng)能夠提供-70℃的低溫,?？梢缘绞∷鶃砼嘤?xùn)。 9. 做方法驗證時,，工作用菌種能否同時操作,，如何防止交叉污染？ 答：可以同時操作,。避免交叉污染的關(guān)鍵是無菌操作技術(shù),。 10. 是否等菌懸液的含菌數(shù)出結(jié)果后再做適用性等檢查？ 答：沒有必要,?？蓞⒁妴栴}2。 11. 菌液制備中菌液是否都要驗證儲存期,？ 答：稀釋菌液可參考藥典規(guī)定,。如要保存濃菌液，則需要驗證有效期,。 12. 菌種CMCC是否可以用ATCC替代，從省所或中檢所購買的菌種是否每次都可以出具 規(guī)范的COA? 答：中國藥典使用CMCC的菌種,，并沒有規(guī)定可以使用其他等效的菌種,。省所提供的菌種 嚴格講屬于標準貯備菌種，無法提供ATCC這樣的COA,。CMCC至今也無法提供這類證明,。 13. 銅綠假單胞如何保藏？ 答：可以使用低溫冷凍保存的方法,。 14. 工作用菌液是否屬于亞培養(yǎng)或傳代一次,？ 答：工作用菌液應(yīng)屬于一次傳代。 培養(yǎng)基質(zhì)控： 1. 計數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查是否只驗證營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基,？使用的 干燥成品培養(yǎng)基（脫水培養(yǎng)基）的驗證是否有培養(yǎng)基廠家在做,？培養(yǎng)基的驗證時按批號 分批驗證嗎？ 答：計數(shù)培養(yǎng)基不僅僅只有這兩個培養(yǎng)基，還包括酵母菌計數(shù)用培養(yǎng)基,。培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家在 出廠檢驗時,，會進行質(zhì)量檢驗，但并不一定符合藥典的要求,。對實驗室使用的培養(yǎng)基進行質(zhì) 量控制,，可參見藥品微生物實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則的有關(guān)規(guī)定。該指導(dǎo)原則指出,，當(dāng)培養(yǎng)基的 配制方法和滅菌方法都進行過驗證并嚴格按驗證的方法執(zhí)行時,，培養(yǎng)基的質(zhì)量控制對每一批 干燥培養(yǎng)基而言只需進行一次?！俺幍涓戒浟碛幸?guī)定外,，在實驗室中，若采用已驗證的配 制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控,，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗可只進行一 次,。” 2. 對照培養(yǎng)基在哪里購買,？ 答：中檢所,。 3. 如何準確方便的控制培養(yǎng)基的PH值？ 答：在滅菌前測定和調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值,。 4. 由三藥生產(chǎn),，中檢所監(jiān)制的培養(yǎng)基是否還需要做培養(yǎng)基適用性檢查？ 培養(yǎng)基（已滅菌）在冰箱儲存期有多久,？二星期內(nèi)用可以嗎/ 答：不論是何企業(yè)生產(chǎn)的培養(yǎng)基,，必須進行適用性檢查。指導(dǎo)原則建議的保存期：“培養(yǎng)基 滅菌后若儲藏在高壓滅菌器中,，質(zhì)量可能會受影響,，一般不提倡這種存放法。瓊脂培養(yǎng)基不 得在0℃或0℃以下存放,，因為冷凍可能破壞凝膠特性,。培養(yǎng)基應(yīng)避光保存，若要長期保存,， 應(yīng)置于密閉容器中以防止水分流失,。瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存,，一般不超過一 周,，且應(yīng)密閉包裝，若延長保存,，保存期需經(jīng)驗證確定,?！?nbsp; 5. 培養(yǎng)基在滅菌后測其PH值，像營養(yǎng)瓊脂在冷卻到室溫25℃時已經(jīng)凝結(jié),，該如何測定,？ 答：在滅菌前測定何調(diào)節(jié)pH值。 6. 培養(yǎng)基適用性檢查中,，五種菌液是否都要制備使用,？ 答：計數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查五種試驗菌均應(yīng)使用。 7. 廠家已做過適用性檢查的,，是否還需進行適用性檢查,？ 答：廠家的適用性檢查不能代表某個特定的實驗室，實驗室在購入培養(yǎng)基后,，應(yīng)根據(jù)本實驗 室的配制和滅菌方法進行適用性檢查,。 8. 培養(yǎng)基的有效期一般可以控制在多長時間？ 答：無菌檢查的培養(yǎng)基貯存期限可參見藥典規(guī)定,。微生物限度檢查的培養(yǎng)基,，應(yīng)對保存期進 行驗證。 9. 控制菌檢查用培養(yǎng)基要做促生產(chǎn)能力,，控制能力及指示能力檢查,，細菌、霉菌及酵母菌 計數(shù)用的培養(yǎng)基是否也要做這類檢查? 答：按照藥典規(guī)定進行,。計數(shù)培養(yǎng)基有其特定的檢查方法,，采用回收率比較的方法進行評價。 10. 環(huán)境監(jiān)控所用培養(yǎng)基均進行預(yù)培養(yǎng),，培養(yǎng)時間如何確定,？ 答：沒有統(tǒng)一的規(guī)定。 11. 控制菌用培養(yǎng)基都需要進行適用性檢查嗎,？ 答：需要進行適用性檢查,。 效價、抑菌效力： 1. 阿奇霉素用高效液相法測定,，而成品注射用阿奇霉素枸櫞酸二氫鈉為什么還用效價法測 定,？ 答：阿奇霉素在2010年版藥典中，含量測定的方法修改為HPLC法,，但是許多注冊標準沒 有及時提出修訂，就存在部分制劑還在執(zhí)行注冊標準中的含量測定方法－效價測定,。建議這 部分企業(yè)盡快根據(jù)原料標準的變化情況,，開展相關(guān)制劑含量和有關(guān)物質(zhì)檢查的方法學(xué)研究工 作，并及時提出標準修訂的補充申請,。 2. 老產(chǎn)品是否也需要做抑菌劑效力檢查,？ 答：藥典凡例,、制劑通則和各論中都還沒有規(guī)定必須進行抑菌劑效力檢查。 3. 效價的平均可信限率PT的FL%〈5%達不到,。 答：藥典規(guī)定的就必須要達到,。應(yīng)該分析原因，改進操作技術(shù),。某些產(chǎn)品特別是氨基糖苷類 抗生素,，可信限率的確很難達到，藥典對個別產(chǎn)品是允許提高到7％的,。 實驗室驗證體系： 1. 藥典要求（培養(yǎng)基）配制后應(yīng)采用驗證合格的滅菌程序滅菌,，是否可以按照培養(yǎng)基說明 說書上的方式進行滅菌而不用進行驗證？如需驗證,，是否每種培養(yǎng)基都至少要做三批,？ 高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)的驗證該怎么做？ 答：培養(yǎng)基說明書上的滅菌方法僅僅只是供應(yīng)商推薦的方法,，不同的實驗室應(yīng)對選定的滅菌 程序經(jīng)過驗證,。每種培養(yǎng)基至少要做多少批沒有明確的規(guī)定。蒸汽循環(huán)系統(tǒng)的驗證應(yīng)考慮熱 分布,、熱穿透和生物挑戰(zhàn)性實驗結(jié)果,。 2. 消毒液有效期的驗證等微生物實驗室的支持驗證體系能否詳細的講解一下？ 答：消毒液有效期驗證可參見消毒技術(shù)規(guī)范（2008）,。其他微生物實驗室支持系統(tǒng)的驗證涉 及的內(nèi)容較多,，擬考慮設(shè)專題討論。 3. 表面微生物驗證方法,？ 答：擬考慮設(shè)專題討論,。 1、微 生物方法驗證,，要求菌株回收率≧70%,，是否有上限要求？（如不得高于100%或者 110%）,。 答：沒有上限,。但一般不會高于100%，因為加進去的菌量是一樣的,，如果超過100%可看 成是操作上的誤差,。按微生物的特性，如果不超過太多,，是可以接受的,，但沒有具體上限。 （本所控制在110%以內(nèi)）,。 2,、在微生物方法驗證時,，霉菌、酵母菌計數(shù)驗證只用黑曲霉及白色念珠菌做方法學(xué)驗證,， 在操作培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)：在玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)生長的白色念珠菌的形態(tài)太小與營養(yǎng)瓊脂上培 養(yǎng)的細菌的某些形態(tài)大小相同,，這樣如何判斷營養(yǎng)瓊脂上生長的菌落是否是白色念珠菌？為 何這兩種菌落形態(tài)相似,？ 答：菌落形態(tài)相似不等于就是同一種菌,。在驗證時，營養(yǎng)瓊脂的驗證菌株為大腸埃希菌,、金 黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌,，如果本底菌為0，則營養(yǎng)瓊脂上長的菌應(yīng)該不是白色念珠菌,。 要判斷是否為白色念珠菌,，應(yīng)進行白色念珠菌的相應(yīng)鑒定方法后才能確定。任何微生物都不 可能只是從菌落就可以進行判斷,，只能判斷為疑似,，然后再做一系列相應(yīng)的鑒定實驗后才能 進行判斷。 3,、生孢梭菌的適宜計數(shù)用培養(yǎng)基,？（很多驗證需對生孢梭菌進行計數(shù)） 答：最簡便的方法是用硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基上層為含氧層,，適宜需氧菌生長,， 下層為厭氧層（下層高度最好7cm以上），適宜厭氧菌生長,。在培養(yǎng)16~18小時這個時間進 行觀察,，計數(shù)，超過20小時,由于繁殖量大,，培養(yǎng)基將混濁,，點計不清?；蛘呤怯酶鐐惐葋?/p> 瓊脂培養(yǎng)基,，澆注后，置厭氧罐（袋）里,，再置培養(yǎng)箱培養(yǎng),，計數(shù)。 4,、微生物限度檢查法中所用的培養(yǎng)基要進行適用性檢查試驗,，請問這些培養(yǎng)基還需要做無 菌檢查試驗嗎？ 答：微生物限度檢查,，藥典上沒有特別說明對培養(yǎng)基作無菌性檢查,，但每次都要做陰性對照 實驗，陰性對照是檢查整個檢驗系統(tǒng)是否被微生物污染,，實際上也包括了培養(yǎng)基的無菌性檢 查,。 5、微生物限度檢查法中所用的培養(yǎng)基如：營養(yǎng)瓊脂,、EMB,、Macl等培養(yǎng)基其分裝容器需要 預(yù)先滅菌嗎？ 答：不用,。只要是潔凈的就行,，因為分裝后還要滅菌。 6,、具有抑菌性的供試品,，細菌、霉菌,、都是用薄膜過濾法來檢查的,，那么沙門菌可以用常 規(guī)法來檢查嗎？就是可以不經(jīng)過過濾直接接種到營養(yǎng)肉湯中嗎,？ 答：這要看你驗證的結(jié)果,。如果通過驗證，你的品種是對沙門菌有抑制作用,，且用培養(yǎng)基稀 釋法不能消除其抑菌性,，則就必需考慮用薄膜過濾法。 7,、微生物限度檢查中,，稀釋劑對照組，是在稀釋液中加入50~100cfu的菌,，還是把稀釋液 制成含量50~100cfu的濃度呢,？ 答：是把稀釋液制成含50~100cfu/ml菌的濃度。（在這里,，我對上次講課時關(guān)于稀釋劑對照 組操作的PPT進行糾正,，對于離心+薄膜過濾法的稀釋劑對照組的操作應(yīng)該是：含 50~100cfu/ml菌的稀釋液 離心 取稀釋液（與試驗組同樣取上層液） 過濾、沖 洗 貼平板） 8,、稀釋級對照組:含50~100cfu/ml菌稀釋液→離心→取供試液+稀釋液 過濾,、沖洗→貼平板。 這里需要加供試液嗎,？是否應(yīng)為上述離心后的菌液,？答：不需要取供試液，只取“上述離心 后的菌液”,。關(guān)于這一情況,，我在第7題里已經(jīng)作了說明,。 9、當(dāng)要做稀釋劑對照組時,，是否就是從制備供試品時就同時做一份不含供試品而是含菌 50~100cfu的樣品,？等于按同一個方法制備一個供試品，五個含菌稀釋液對照組,？ 答：是的,。 10、菌落計數(shù)是否需要將每天計數(shù)的數(shù)據(jù)登記在記錄本上,，是否可以只記錄最終的數(shù)據(jù),？ 答：可以。每天計數(shù)的目的是預(yù)防菌落彌漫互相覆蓋,，干擾最終的點計,。你可以用油性筆將 每天點計的數(shù)記錄在培養(yǎng)皿上，發(fā)報告時只要最終菌落數(shù)就行了,。 11,、若樣品中有不溶物（如片劑中的輔料顆粒），經(jīng)常會影響培養(yǎng)前期的結(jié)果,，藥典要求逐 日計數(shù),，所以報告中會出現(xiàn)第二、三日菌落數(shù)小于第一日的現(xiàn)象,，請問該如何向客戶或監(jiān)檢 機構(gòu)解釋這種結(jié)果,？或者是否可以不計第一、二日菌落數(shù),，待輔料顆粒與菌落可以區(qū)分后再 計數(shù),？ 答：報告書不需要顯示第一、第二天的結(jié)果,，只需報告最終結(jié)果,。理由請見第9題答復(fù)?；?/p> 者是在營養(yǎng)瓊脂中加入TTC試劑（每100ml加入0.1%） 12,、由于微生物檢驗的特殊性，對于樣品的微生物限度檢查計數(shù)數(shù)據(jù)是否可登記在表格內(nèi)（此 表格僅含樣品名稱,、批號及檢查結(jié)果）,。之后再將檢測結(jié)果移至詳細記錄中？ 答：原始記錄應(yīng)該只有1份,。如果你說的詳細記錄是屬于一般記錄,，是沒有必要的，如果是 指報告書，就應(yīng)該沒問題,。這要看你自己訂的SOP,。 13、直接接種法培養(yǎng)后的菌落報告：原液230cfu,稀釋10倍后 40cfu,請問按2010版藥典的 菌落數(shù)報告規(guī)則如何報告菌落數(shù),？ 答：報告菌落數(shù)為40×10=400cfu,。應(yīng)以菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)后的最大值作為報告結(jié)果。 14,、05版藥典供試品離心5分鐘，而10版藥典改用離心3分鐘,，原來按5分鐘驗證的產(chǎn)品 是否需要重新驗證,？ 答：是的。需要再確認一下,。 15,、10版藥典附錄微生物限度檢查法中結(jié)果判斷的菌落計數(shù)單位是以“cfu”表示，但正文 品種項下是以“個”表示,，最終應(yīng)以哪位為準呢,？ 答：應(yīng)該是以cfu為單位。正文是由于印刷時沒統(tǒng)一修改過來,，關(guān)于這個問題,，在增補本上 修訂過來,。（在增補本沒出來之前,，正文品種還是以個為單位） 16、為何控制菌液的濃度為50-100cfu/ml,。 答：50-100cfu在平板上比較好點計,，菌落不容易重疊。少于50,，則實驗誤差會增大,，重現(xiàn) 性不好，大于100則容易造成菌落太密或重疊不好計數(shù),。 17,、藥典上控制菌檢查的方法驗證，只是說把菌加至增菌培養(yǎng)基中檢出即可,，那我們實際做 驗證與記錄時,，是否要做增菌以后的步驟呢？ 答：要,。不然你怎么知道檢出來的菌是你加進去的試驗菌呢,？ 18、采用薄膜過濾法檢驗，陽性菌,，計數(shù)是否也用此方法計數(shù),？ 答：是的。 19,、對于10版藥典延長培養(yǎng)時間,，控制菌35-37℃改為30-35℃培養(yǎng)溫度，一些已經(jīng)驗證（按 05版藥典）檢品是否需要重新驗證,？是否有必要進行延長時間前后菌生長情況變化的驗證 試驗,？ 答：目前沒有相關(guān)性規(guī)定，我們認為可按原來已經(jīng)驗證的方法,，用2010年版的培養(yǎng)時間和 溫度再確認一下,，如果結(jié)果符合藥典要求，則可用,。如果不可行,，則調(diào)整后再進行驗證。 20,、若無需都重新驗證,，那么參照標準為05版藥典，又可以通過什么文件來更改為參照10 版藥典,？ 答：請看上一題,。 21、檢驗控制菌用培養(yǎng)基促生長能力的檢查,，也需要對照培養(yǎng)基嗎,？例如：大腸埃希菌用的 BL增菌液。 答：是的,。請看附錄“微生物限度檢查法”中的表2,。 22、10版藥典增加貼膏劑的檢查,，狗皮貼膏藥屬于貼膏劑嗎,？ 答：應(yīng)該是的。請對照《中國藥典》一部附錄P8進行確定,。 23,、請問若試驗條件限制未能使用勻漿儀制備非規(guī)定滅菌制劑是否可采用溫?zé)幔ú怀^45 ℃）的稀釋液？ 答：如果能夠充分分散樣品,，可以的,。 24、請問若采用薄膜過濾法進行驗證,，由于過濾難度大,，是否可以每膜過濾相當(dāng)于供試品 0.1g,，報告以結(jié)果乘以10？ 答：驗證計數(shù)時可以的,，驗證控制菌時檢驗總量應(yīng)達到藥典要求,，如果一張膜檢驗量達不到， 可分幾個膜,。 25,、請問采用靜置分層取上清液薄膜過濾，是否需要加稀釋劑對照組,？ 答：個人觀點可以不用,但未經(jīng)驗證,。 26、供試品靜置分層取上清液進行試驗,，靜置3~5分鐘,，是否經(jīng)過驗證供試品的本底菌不會 沉到底部？ 答：未經(jīng)驗證,。 27、培養(yǎng)基適用性檢查,，抑制能力檢查用菌種是哪些,？ 答：控制菌的培養(yǎng)基適用性檢查,請看藥典“微生物限度檢查法”中表2，計數(shù)用培養(yǎng)基請看 “計數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查”,。 28,、投料中有神曲提取物，限度應(yīng)界定為多少,？ 答：不是藥材原粉投料,，標準均按“不含藥材原粉的制劑”執(zhí)行。 29,、微生物限度檢查里有關(guān)經(jīng)驗類的東西都必須經(jīng)過驗證才可以使用,那么驗證的內(nèi)容包括 哪些數(shù)據(jù)應(yīng)記錄,，是否也應(yīng)該有文件與記錄？ 答：參照藥典,，你是作什么樣的檢驗,，就作什么樣的驗證，有驗證就應(yīng)該有記錄,。 30,、比如10倍稀釋級菌落數(shù)為0，100倍稀釋級菌落數(shù)為2,，按2005年版藥典應(yīng)以低稀釋 級菌落數(shù)報告為＜10,，還是按最高平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告為200個/g，是否理解正確,？ 答：按《中國藥典》2005年版報告應(yīng)為＜10個/g（或ml）,，按《中國藥典》2010年版報告 應(yīng)為200cfu/g（或ml）。 31、計數(shù)方法的驗證：執(zhí)行新版藥典是否就延長培養(yǎng)時間做方法驗證,？ 答：是,。 32、平皿法中提到“每個稀釋級每種培養(yǎng)基至少檢驗2ml供試液”,，是每皿注2ml還是每皿 注1ml,？如要做0.5ml或0.2ml，本級是否還需做1ml?答：常規(guī)平皿法時每皿注1ml,，做2 個皿,；培養(yǎng)基稀釋法（即每皿0.5ml或0.2ml）時，供試液總量也應(yīng)是2ml,，每1ml菌落數(shù) 合計后,，2ml的菌落數(shù)再平均；本級就不需做1ml了,，但下一級就只做1ml/皿就行了,。 33、在細菌霉菌計數(shù)檢查中,，老師提到的每個稀釋級每種培養(yǎng)基至少檢驗2ml供試液,，但 2010版藥典上并沒有要求要這樣做，那應(yīng)以哪個做法為準,？ 答：藥典中對平皿法的描述：平皿法“取供試液1ml,，置直徑90mm 的無菌平皿中，注入 15～20ml 溫度不超過45℃的溶化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉 胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基,，混勻,，凝固，倒置培養(yǎng),。每稀釋級每種培養(yǎng)基至少制備2 個平板,。” 這里的描述是以常規(guī)平皿法進行描述的,，所以“每稀釋級每種培養(yǎng)基至少制備2 個平板”,， 也就是2ml的量。對于培養(yǎng)基稀釋法,，請看藥典供試液的制備中3. (6) ①,。 34、10版藥典要求檢查沙門菌的供試品,，其檢驗量應(yīng)增加20g或20ml,，（其中10g或10ml 用于陽性對照試驗）是否指20g或20ml樣品中10g或10ml直接用于沙門菌控制檢查，另 10g或10ml加pH7.0的緩沖液100ml作為1：10的供試品溶液作為細菌,，霉菌,，酵母菌的 檢驗嗎,？還是指20g都用于沙門菌檢查？ 答：20g都是用于沙門菌檢查,。沙門菌的檢查法是：取3份200ml營養(yǎng)肉湯,，其中2份分別 加入10g或10ml樣品，取其中1份加入10~100cfu菌液作陽性對照,。第3份加入10ml稀釋 劑作陰性對照進行檢查,，所以。細菌,，霉菌,，酵母菌檢驗的樣品不包括在這里。 35,、沙門菌檢查為10g或10ml,，為何一次檢查量又為20g或20ml？（P130）答：其中10g （或10ml）是檢驗用的,，另10g（或10ml）是用于陽性對照試驗的,。請看上一題目解釋。 36,、采用薄膜過濾法時,，濾膜采用何種方法滅菌最好？ 答：據(jù)我們經(jīng)驗，最好采用一次性過濾器。如果用多次使用的過濾器,，則濾膜用濕熱滅菌比 較好,，因為干熱滅菌后，濾膜較脆,，試驗時不容易保證濾膜完整,。 37、方法學(xué)驗證時,，采用平皿法稀釋級計數(shù),，是否要做稀釋級對照組？ 答：稀釋級對照組,？是指本底菌組嗎,？如果是，那就要,。因為要平行試驗,，才能知道同一稀 釋級的本底菌是多少。如果是指稀釋劑對照組,，就不用,，因為所用的稀釋劑是藥典規(guī)定的,， 是無毒性的稀釋劑。 38,、方法驗證的培養(yǎng)基稀釋法驗證（樣品0.2ml）只做2個平皿,，每個平皿的加菌量是多少？ 如果同步加0.2ml菌,，其加菌量就達不到50~100cfu,。 答：不管每皿加的供試液的量是多少，每皿加菌液的量都是1ml ,即都是50~100cfu,。 39,、平皿法（稀釋法）計數(shù)驗證時，取最低稀釋供試液如0.5ml和50~100cfu試驗菌,，那 50~100cfu的試驗菌是指50~100cfu還是50~100cfu∕0.5ml,？我們是要加1ml還是0.5ml的 試驗菌？ 答：平皿法（稀釋法）計數(shù)驗證時,，每皿要加的菌液是50~100cfu,，一般我們配制的菌液濃 度是50~100cfu/ml，所以就加1ml,。如果你配制的菌液不是這個濃度,，你可以折算，只要加 的菌數(shù)是50~100cfu/皿就行了,。 40,、細菌霉菌方法驗證，同時做1ml,，0.5ml,，0.2ml供試品組及供試品驗證組時，菌液是否 也按1ml,，0.5ml,，0.2ml分別加入？此時1ml,，0.5ml,，0.2ml供試品驗證組中的菌數(shù)能否也 達到50~100cfu？ 答：驗證時,，不論是1ml,，0.5ml，0.2ml的供試液,，每皿的加菌量都是50~100cfu,，即1ml（如果你配制的菌液濃度是50~100cfu/ml）。 41,、培養(yǎng)基稀釋方法驗證,，每皿0.2ml,，加菌液0.2ml，那么0.2ml的菌液計數(shù)是否在50~100cfu∕0.2ml,。 答：請看上一題的解釋,。 42、微生物限度檢查霉菌,、酵母菌要求不超過100的情況下,，這兩種菌是不是要分開來檢， 用不同培養(yǎng)基檢測,？目前只用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基檢測這兩種菌,，有沒有必要修改？ 答：按藥典規(guī)定,，一般品種是用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基檢測這兩種菌,；含蜂蜜、王漿的液體制 劑,，用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基測定霉菌數(shù),，用酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基測定酵母菌數(shù)， 合并計數(shù),。 43,、測表面微生物時，直接接觸藥品與間接接觸藥品的限度（≤25）一致,，是否有不妥,，如 果有不同意見，可否提供其計數(shù)方法,？另外,，如果檢測到菌落數(shù)超過100以上，那么報告規(guī) 則的菌數(shù)也是取兩位有效數(shù)字嗎,？ 答：“測表面微生物”？這應(yīng)該是藥包材的檢測標準吧,？由于我們尚未開展這項業(yè)務(wù),，所以 對其標準情況不了解，但既然已經(jīng)成為標準,，就肯定有其合理性,，如有不同意見，可向標準 制訂部門反映,，并提出你認為合理的解決辦法,。微生物的報告規(guī)則一般都是取兩位有效數(shù)字。 44,、內(nèi)包裝材料PVC硬片,，鋁箔等樣品的微生物檢驗（限度）方法,？ 答：是藥包材的檢驗？應(yīng)該有相應(yīng)的檢驗方法吧,！ 45,、控制菌檢查，大腸埃希菌IMViC試驗,，結(jié)果顯示未檢出,，有沒有硬性規(guī)定必須要進一 步鑒定？ 答：對于大腸埃希菌檢查,，IMViC試驗已經(jīng)是鑒定試驗了,，如果IMViC試驗結(jié)果顯示未檢 出，那么就可以報告未檢出大腸埃希菌,。 46,、菌數(shù)報告按兩位有效數(shù)字報告，是按數(shù)字修約方法進行數(shù)據(jù)修約,，還是只用保留兩位有 效數(shù)字,，如菌數(shù)為364報告菌數(shù)為360，還是370,；若菌數(shù)為3670報告菌數(shù)應(yīng)為多少,？ 答：修約原則是4舍6入5留雙。即菌數(shù)為364報告菌數(shù)為360,；若菌數(shù)為3670報告菌數(shù) 應(yīng)為3700,；如果是3650，則報告菌數(shù)應(yīng)為3600,。 47,、在日常檢驗中控制菌檢驗方法通過驗證的控制菌檢驗可否不做陽性對照？理解：在驗證 時已做過控制菌+供試液,，驗證時供試液對控制菌無抑菌性,，若只是做控制菌（不加供試液） 則在培養(yǎng)基適用性時已證明培養(yǎng)基的質(zhì)量，那么每次試驗做陽性對照的意義是什么,？或者陽 性對照試驗怎么做,？ 答：從理論上來說是可以的，驗證試驗實際上就是檢驗時的陽性對照試驗,。但藥典要求控制 菌檢查時必需同時從陽性對照和陰性對照,，這應(yīng)該是考慮到檢驗過程的檢驗系統(tǒng)的誤差吧。 本人認為,，生產(chǎn)廠家對自己的產(chǎn)品在經(jīng)驗證后,，檢驗時如果每天同一產(chǎn)品批量很大，可以只 做一個陽性對照,，但對于藥檢所則必須每批都做,，因為對于同一品種,，不同廠家其生產(chǎn)工藝 不盡相同，在檢驗過程中對被檢微生物的干擾也不同,。因此,，藥檢所應(yīng)每批都做。 48,、取樣量藥典要求“從2個以上最小包裝單位中抽取供試品”,，是否包括2個？ 答：包括,。 49,、請問藥廠自行做的微生物方法驗證是否需要經(jīng)過藥檢所的審核？若產(chǎn)品更改為輔料,，重 新做方法驗證,，是否需要到藥檢所備案或需要藥檢所審核？ 答：藥廠自行做的微生物方法驗證不需要經(jīng)過藥檢所的審核,。同樣,，重新驗證后也不需要。 但如果你的檢品需要報注冊檢驗,，則你必需提供你的整個驗證資料,，藥檢所將根據(jù)情況對你 的方法進行確認，看方法是否可行,。 50,、是否每次做培養(yǎng)基適用性都必須與對照培養(yǎng)基進行比較？如果第一批培養(yǎng)基與對照培養(yǎng) 基比較回收率為90%,，那么第二批培養(yǎng)基與第一批培養(yǎng)基比較回收率為80%,，則折算為第 二批培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基比較回收率為72%，之后購買的培養(yǎng)基與前一批比較,，而不用每 次培養(yǎng)基適用性都與對照培養(yǎng)基比較,，這樣可不可行？ 答：請按藥典要求做,，至于內(nèi)部控制則要自己掌握,。但你要保證第一批培養(yǎng)基在你用于與第 二、第三批比較時,，質(zhì)量保持其與對照培養(yǎng)基比較時一樣,，因為隨著時間的推移,，培養(yǎng)基的 質(zhì)量肯定有所下降,。 51、微生物檢驗驗證時,，如我用一瓶普通脫水培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基測定菌落數(shù),，如普通脫水 培養(yǎng)基符合適用性檢查,，那么該瓶普通脫水培養(yǎng)基能否作為以后工作中的對照培養(yǎng)基來用？ 答：請看上一題的解釋,。 52,、培養(yǎng)時間有要求24~48h，也有要求24~72h的,，像這種時間要求范圍比較大的情況,，如 果在最短的時間內(nèi)（如：24h）就已經(jīng)長菌，但需進行后續(xù)實驗判斷該菌是否為控制菌,，那 么,，是否需要培養(yǎng)到最長時間（如：48h或72h）再進行后續(xù)實驗？ 答：長勢好的話可以進行后續(xù)實驗不用等到最長時間,。 53,、操作結(jié)果的RSD%的范圍比較寬裕，是否可信,？（eg：黑曲霉若＞20cfu∕皿時,，菌落 將擴散至難以分離，所以回收率精確度較低） 答：這個問題要具體問題具體分析,。菌落漫延,，這是要求逐日觀察的主要原因之一，應(yīng)在菌 落能分辨的時候點計菌落數(shù),。加菌量太少,，容易出現(xiàn)誤差大，重現(xiàn)性差,，所以要求加的菌數(shù) 在50~100cfu,。 54、含藥材細粉的膠囊如何制備供試液,？ 答：按固體制劑供試液的制備方法制備,，可用45℃水浴軟化溶解膠囊殼。 55,、大腸菌群檢查,，需陽性對照嗎？ 答：要的,。陽性對照菌為大腸埃希菌,。 56、菌液涂布時,，用接種棒還是涂布棒涂,？ 答：用L型涂布棒，也可用玻棒自制。 57,、控制菌的培養(yǎng)基促生長能力檢查,，對照菌加于固體培養(yǎng)基如何涂布，用什么工具來涂布,？ 答：請看上一題,。 58、三部藥典中有些產(chǎn)品細菌數(shù),、霉菌和酵母菌數(shù)用每g多少cfu,，但有些為每g多少個， 應(yīng)怎樣記錄,？ 答：應(yīng)該是cfu才對的,，這些應(yīng)該是在轉(zhuǎn)版時沒轉(zhuǎn)過來吧，在增補本應(yīng)該會轉(zhuǎn)過來,。但是在 沒轉(zhuǎn)過來之前,，它還是法定的，必需按藥典上的寫法來執(zhí)行,。 59,、如樣品的控制菌為大腸埃希菌沒檢出，但檢出其它種菌,，結(jié)果該怎樣判定,？ 答：如果是其他致病菌，請看微生物限度檢查法的結(jié)果判斷第一句,。 60,、我們是做糖衣片的，微生物限度檢查吸取供試液時,，吸管有時會被粉末塞住,，那能不能 讓供試液沉淀后取其上清液呢？這樣操作結(jié)果可靠嗎,？ 答：請將藥片盡可能打碎,，如果還不能解決問題，我們的經(jīng)驗是：可讓大藥渣沉降后取上層 液進行試驗,，但沉降時間盡可能短(在3-5分鐘內(nèi)),，這樣做對結(jié)果會有一定影響，但應(yīng)該在 可接受范圍內(nèi),。 61,、微生物限度檢查控制菌檢查時，如供試液的增菌后無菌生長,，可否直接發(fā)供試液的未檢 出控制菌,，此時,，陽性對照試驗還需繼續(xù)做下去嗎？ 答：只要能判定供試液增菌后無菌生長,，陽性對照試驗菌長出，就可發(fā)未檢出控制菌,。 62,、如何理解“菌落蔓延成片不以計數(shù)”？如10-1級有1個皿的菌落成片是否用10-2級來 計數(shù),？ 答：是的,。 63、如何避免菌落成片,？ 答：1,、培養(yǎng)基傾注時溫度不宜過高，可減少傾注后培養(yǎng)皿里的水蒸汽太多而造成菌落容易 漫延,，或者加蓋“陶瓦蓋”吸收水蒸汽,；2、細菌計數(shù)時,，在每100ml營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中加 入滅菌的1%氯化四氮唑0.1ml,，可使生成的菌落變紅色，容易點計,，也可在一定程度上抑 制菌落漫延,。 64、請問一下對于生長速度快,、易蔓延的菌有什么好的方法控制,，該如何計數(shù)，如采用陶瓦 蓋培養(yǎng)時間要不要延長,？ 答：請看上一題的說明,。如用陶瓦蓋，培養(yǎng)時間不需要延長,。 65,、請問若細菌、酵母菌平均菌落數(shù)不在其宜選取的范圍內(nèi),，即大于300及100cfu時,，該 如何報告菌數(shù)？另05版藥典的規(guī)定范圍是30~300/30~100,，倘若當(dāng)菌落數(shù)大于300及100,， 如何報告？ 答：應(yīng)該重新試驗,，將稀釋級再往高級進一步稀釋,，直到能有可報告的稀釋級,。可在工作中 以對產(chǎn)品的認識將稀釋級調(diào)整到可報告的級別進行檢驗,。 66,、請問對于抑菌性難以消除的粉末狀樣品，采用最好的消除抑菌性的方法是什么,？ 答：如果能溶于水,，目前來說，最好的除菌方法是薄膜過濾法,；其次是找到相應(yīng)的中和劑,。 67、我們生產(chǎn)的產(chǎn)品為外用搽劑非無菌產(chǎn)品,，需要對所有原輔料做微生物限度檢查嗎,？ 答：生產(chǎn)企業(yè)對原輔料的微生物限度檢查，應(yīng)根據(jù)自己的情況進行控制,。參見一部附錄P88（或二部附錄P116）,，微生物限度標準 第7點。（個人意見：如果所用的原輔料直接投料,， 就要控制,，如果還要進一步提取等，則可通過控制中間產(chǎn)品的微生物限度來控制,。） 68,、原輔料是否要單獨做方法驗證？ 答：所有要檢查微生物限度的品種（當(dāng)然包括原輔料）,，都要做方法驗證,。 69、中藥材的微生物限度如何檢測,？如超標應(yīng)如何控制,？ 答：1.中藥材的微生物限度檢查，參照固體制劑的供試液制備,，并根據(jù)給藥途徑執(zhí)行標準,， 如用于直接投料至口服制劑的，還應(yīng)檢大腸菌群,。2.如超標,，具體問題具體分析。 70,、中間產(chǎn)品可否不做微生物檢測,？ 答：中間產(chǎn)品應(yīng)該控制微生物限度，各企業(yè)應(yīng)內(nèi)部質(zhì)控相關(guān)的具體要求,。 71,、廠家用10-2稀釋級作驗證,，那我們藥檢所作檢查時是否從10-2稀釋級開始做？ 答：是的,。 72,、省所做微生物限度時，廠家沒有做驗證,，那省所是自己做驗證,，還是退回去？又或者廠 家的控制菌驗證沒有做全（例如漏了沙門菌沒做）,，那省所怎么處理？ 答：1,、如果是注冊檢驗,，廠家沒有做驗證，我們是不會接收樣品的,，也就是說,，沒做驗證 或驗證不全，肯定退回去,。 2,、如果是委托檢驗，由于是協(xié)議性質(zhì),，我們就按協(xié)議進行檢驗,。 73、微生物限度檢查時,，只有細菌數(shù)不合格,，那么復(fù)試是否可以只做細菌數(shù)檢查就行了？ 答：可以,。 74,、樣品制備中，如羧甲淀粉鈉等崩解劑遇水膨脹,，經(jīng)試驗1g∕100ml仍為膠體漿糊狀,， 無法過濾且難與培養(yǎng)基融合，再加大稀釋倍數(shù),，則代表量太少,，請問這種輔料采用何種方法 進行微生物限度檢查？ 答：羧甲淀粉鈉應(yīng)該沒有抑菌作用,，無法過濾可用平皿法進行檢查,，且供試液制備時，稀釋 劑的溫度適當(dāng)調(diào)低些,。 75,、若樣品對微生物生長有促進性,，采用薄膜過濾法應(yīng)如何消除此影響，或者有什么其他方 法可以消除促進性以獲得更準確結(jié)果,？ 答：采用薄膜過濾法就是很好的消除影響的方法,；藥典上規(guī)定“供試液從制備到加入檢驗用 培養(yǎng)基不得超過1個小時”，就是考慮到樣品對微生物存在促進或者抑制作用的影響,。因此 要獲得更準確的結(jié)果,，就必需盡量縮短從供試液的制備到加入培養(yǎng)基的時間。另外,，也可根 據(jù)樣品的特性有針對性的加入中和劑等,。 76、控制菌檢查對于大腸的檢查,，MUG試驗中顯陽性或難以判斷時,，“將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接到 EMB”，這里的培養(yǎng)液是指MUG還是之前擴增的BL,？ 答：藥典上并沒有“將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接到EMB”這一描述,。但對于MUG和靛基質(zhì)試驗結(jié)果不 一致時，是這么規(guī)定的：“如MUG 陽性,、靛基質(zhì)陰性,，或MUG 陰性、靛基質(zhì)陽性,，則應(yīng) 取膽鹽乳糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)物劃線接種于曙紅亞甲藍瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板 上,，培養(yǎng)18～24 小時?！?nbsp; 77,、膽香鼻炎含有豬膽汁膏，毛雞藥酒含有毛雞浸出夜,，霍膽丸含豬膽粉,，這三個產(chǎn)品需要 檢沙門菌嗎？ 答：是的,。（因含豬膽汁膏,、毛雞、豬膽粉）,。 78,、微生物檢驗時，勻漿機應(yīng)把轉(zhuǎn)速調(diào)到多少才不會對微生物有損傷,？ 答：沒有相關(guān)的規(guī)定,，目前一般使用轉(zhuǎn)速為3000-4000轉(zhuǎn)/分鐘。 79,、如果使用藥典以外的培養(yǎng)基進行微生物限度檢查（比如TSA）,，怎么進行培養(yǎng)基適用性 檢查,，是否有合適的對照培養(yǎng)基？ 答：可以參照“藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則”對所用培養(yǎng)基的質(zhì)量進行控制,。至 于是否有相應(yīng)的對照培養(yǎng)基,，要看中檢所是否來得及研制。 80,、微生物限度檢查的方法驗證,，至少應(yīng)進行3次獨立平行試驗，每個獨立平行試驗可否使 用不同批號的樣品,？ 答：可以,，且最好是用3個不同批號樣品進行驗證。 81,、每個獨立的平行試驗是否有必要用3個不同批號的樣品進行驗證,？ 答：用3個不同批號的樣品進行驗證，可以增加驗證結(jié)果的重現(xiàn)性,。 82,、微生物限度檢查中,，培養(yǎng)基的適用性檢查時對每個批號的培養(yǎng)基進行還是對每次制備好 的培養(yǎng)基進行,？ 答：請看《藥品微生物實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則》中，關(guān)于培養(yǎng)基第3點,，質(zhì)量控制試驗的描述： “除藥典附錄另有規(guī)定外,，在實驗室中，若采用已驗證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程 受控,，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗可只進行一次,。如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng) 驗證，那么每一批培養(yǎng)基均要進行適用性檢查試驗,，試驗的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關(guān) 附錄中進行選擇,，也可增加從生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株?！?nbsp; 83,、能否舉例說明哪些培養(yǎng)基是指示能力檢查培養(yǎng)基？ 答：請看“微生物限度檢查法”中表2,。 84,、05版SOP中有說經(jīng)驗證后控制菌可以不用做陽性對照，10版是否有相同的說法,？已建 立控制菌方法是否還需作陽性對照,？ 答：藥典規(guī)定，控制菌檢查必需同時檢查陽性對照和陰性對照,。05版SOP《中國藥品檢驗 標準操作》中并沒有說經(jīng)驗證后控制菌可以不用做陽性對照,，不知你所說的是那個SOP,？ 85、請問化藥軟膠囊還需要檢沙門菌嗎,？ 答：如果是口服制劑,、有動物藥投料就必需檢查。 86,、微生物方法驗證過程中,，供試液的制備，檢細菌與霉菌及酵母菌處理不一樣,，這樣方法 是否能成立,？ 答：完全有可能。檢查方法是經(jīng)驗證的,，對于有抑菌作用的品種,，經(jīng)驗證后細菌計數(shù)方法與 霉菌及酵母菌的檢查方法不一樣，這很正常,，只要方法是經(jīng)驗證,，符合藥典要求就可以。 87,、2010版藥典控制菌培養(yǎng)溫度降低到30~35℃,，那么以2005版藥典驗證過程控制菌檢驗 方法，2010版藥典還需要再驗證嗎,？ 答：是的,。 88、檢大腸埃希菌時,，MUG觀察一定要5小時觀察,，是否可以只在24h觀察？ 答：可以,。 89,、培養(yǎng)基適用性檢查涂布時如何考慮（或消除）涂布棒上沾到菌落的影響？ 答：涂布時,，試驗用培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基都同樣操作,，所以這個影響是同等的，可不需考慮,。 90,、純化水要多少ml過濾，是不是原液要不要沖洗液沖洗,？要不要陰性對照,？ 答：過濾多少ml可根據(jù)樣品微生物污染的程度來決定，只要最終每膜上的菌落不超過點計 要求（即100cfu）就行了，結(jié)果報告時將菌落數(shù)除以ml數(shù)即可,?？梢圆挥脹_洗。必需做陰 性對照,。 91,、用稀釋法檢驗控制菌的時候，金黃色葡萄球菌是10ml（相當(dāng)1g,，1ml）至500ml肉湯,， 能否用2ml至100肉湯？ 答：可以,，但應(yīng)該同時做5份,，使檢驗用的樣品總量達到1g（或1ml）。 92,、保留2倍有效數(shù)字（細菌,，霉菌報告數(shù)）如果檢出細菌是1160cfu/g，是否報告數(shù)必須 寫成1.1*103cfu/g,，還是直接寫1/100（不過這樣好像不是2倍有效數(shù)字）,。 答：報告數(shù)應(yīng)該寫成1.2Χ103cfu/g或1200cfu/g。 93,、怎么證明微生物限度中加入的表面活性劑,，中和劑或滅活劑的生長和存活無毒性？是在 驗證中做稀釋劑對照組就可證明是否其無毒性了嗎,？還是,？ 答：是的,，在驗證中做稀釋劑對照組就可證明是否其無毒性,。 94、平皿稀釋法時,，若每一個平皿加入0.5ml供試液,，那么，陰性也是加0.5ml嗎,？還是陰 性加1ml,？ 答：陰性是檢驗檢測系統(tǒng)是否受微生物污染的試驗，應(yīng)該是取1ml稀釋液,。 95,、輔料中的香精（如楊梅香精），滑石粉是否按非水溶性制劑供試品處理,？氫氧化鈉又如 何處理呢,？ 答：香精和滑石粉，如果能分散于水中,，或者加表面活性劑后能分散于水中就可以,，不一定 非要按非水溶性制劑制備供試液,。氫氧化鈉可溶于水，可按普通檢品檢驗進行驗證處理,。 96,、有兩種制劑形式的原料藥該如何制定衛(wèi)生學(xué)指標呢？如一種原料藥可用于口服制劑以及 外用制劑,？ 答：可以按要投料的劑型進行控制,，或者直接按要求嚴格的一種來要求。 其他匯總： 1. 含瓊脂培養(yǎng)基冷卻至25℃后已凝固,，如何測定其ph,？ 答：有專門的固體培養(yǎng)基pH計，如Radiometer A /S, DK22400 Copen2 hagen NV, Denmark 或 者Microelectrodes Inc1, NH 03053,U1S1A1 ,。". 8.PH計測培養(yǎng)基的PH好像有比較大的差別,，應(yīng)如何選擇PH計？（效價7.8的培養(yǎng)基我用 普通理化室的PH計測定只有7.0左右,，不知道是否因為在高溫下測定（含瓊脂） 答：培養(yǎng)基應(yīng)冷卻到20℃～25℃才可測量,，另外PH計應(yīng)按時校準。 9.生物指示劑對滅菌設(shè)備的性能,，滅菌程序的驗證是只驗證一次呢,，而后進行定期驗證，如 果生物指示劑換批號,，是否要重新驗證,？ 答：應(yīng)定期或不定期驗證一次，確保滅菌設(shè)備正常,。生物指示劑更換批號,，不需重新驗證。 10. 紫外線滅菌后,，需要多久進去操作,？ 答：打開通風(fēng)凈化設(shè)備，半小時后可入內(nèi)操作,。 11. 孟加拉培養(yǎng)基是否可以取代玫瑰紅鈉瓊脂進行培養(yǎng)霉菌和酵母菌,？ 答：根據(jù)中國藥典，采用玫瑰紅鈉瓊脂,。 12.配制PH值7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液時有時因為高壓滅菌器滅菌過程溫度過高而導(dǎo)致培 養(yǎng)基混濁了,，這種情況緩沖液還能用嗎？ 答：建議按正常溫度滅菌,，混濁培養(yǎng)基建議不要使用,。 13.培養(yǎng)基在冷藏中形成結(jié)晶怎么處理？①銷毀 ②加熱再用 ③待冷卻完用 答：建議不要使用 14.融化的培養(yǎng)基為什么不能再冷水中冷卻？ 答：防止受熱不均引起結(jié)塊 15. 取菌后測PH：（25℃）培養(yǎng)基配制好測PH,，取其中一瓶測PH,，那這一瓶測完就不能 用了，污染了,。 答：也可在無菌條件下取出適量測ph. 16. 配制分裝過程中能否使用不銹鋼鍋,？ 答：我實驗室使用不銹鋼鍋，目前未發(fā)現(xiàn)異常,。 17. 對新購進無菌0.9%氯化鈉（500ml）能否再次滅菌,？ 答：能。但包裝完好,，購入時間較短的無需滅菌,。 18. “要定期對壓力表進行檢定（消毒鍋），檢定周期一般為半年”,，這句話怎樣理解,，是廠 家應(yīng)半年自己檢一次，還是有計量部門執(zhí)行,？ 答：由計量部門計量,，計量后應(yīng)發(fā)有檢定證書。 19. 滅菌后,，滅菌鍋需自然冷卻降壓才可以打開,，這段時間是否會造成過度滅菌。 答：自然冷卻過程已經(jīng)計算在正常滅菌時間內(nèi)了,，不會造成過度滅菌,。 20. 培養(yǎng)基常規(guī)質(zhì)控有無強制檢定項目？目前我們所做項目有：ph,、無菌檢查,、生長檢查、 是否符合藥典規(guī)定,？ 答：培養(yǎng)基應(yīng)按2010版藥典檢查,。 21. 培養(yǎng)基所用器具若使用濕熱滅菌,，是否必須待干燥后才可以使用,？若烘干或其它方法， 中間過程怎樣防止微生物污染,？ 答：答：如果是馬上使用且不是用于非水溶性供試液的制備及實驗,，不一定要烘干；否則,， 應(yīng)干燥后使用,，滅菌及干燥盡量在同一鍋里進行，或用紗布和牛皮紙包扎緊密。 22. 培養(yǎng)基的避光儲存,，是否配置好的培養(yǎng)基其全部放避光儲存,？ 答：最好都避光保存。無條件時,，光敏感的培養(yǎng)基一定要,。 23. 商品培養(yǎng)基干粉說是加蒸餾水溶解，實際操作是否可以用純化水或注射用水,？ 答：只要不含有任何可能抑制或影響微生物生長的物質(zhì)的水均可,。 24. 滅菌后的培養(yǎng)基是否都要測ph值？如何測定ph值,？ 答：每個制備批次的培養(yǎng)基都應(yīng)測定ph,，可采用ph試紙或ph計測量。 25. 培養(yǎng)基及器具滅菌可否同一設(shè)備同滅菌時間進行滅菌,？答：最好分開滅菌,，條件不允許 時可同爐滅菌，前提是都是潔凈無污染的,。 26. 培養(yǎng)基的保溫能否用60℃的培養(yǎng)箱,，它與45℃—55℃水浴鍋保溫方法有何不同？ 答：不建議,，因為溫度不同,，長時間高溫影響培養(yǎng)基質(zhì)量。 27. 培養(yǎng)基的貯存是否需要放置于2—10℃冰箱內(nèi),？ 答：需冷藏保存的培養(yǎng)基外包裝上會寫明,。 28. 培養(yǎng)基滅菌后成份會有所蒸發(fā)減少，如何處理這個問題,？答：正常情況下蒸發(fā)量較少,， 可忽略不計。 29. 培養(yǎng)基融化后出現(xiàn)渾濁是有哪些方面的原因引起的,？應(yīng)如何避免,？ 答：可能的情況有1培養(yǎng)基配置用水不符合規(guī)定；2滅菌過程溫度升溫慢或降溫慢,；3培養(yǎng) 基儲存不當(dāng),；4融化時沸騰時間較長等。 30. 準備好的培養(yǎng)基有效期如何驗證,？ 答：定期取出培養(yǎng)基驗證其無菌性,，促生長能力等方面。 31. 某些培養(yǎng)基無pH變化范圍,，應(yīng)該怎么確定該培養(yǎng)基的pH范圍呢,？ 答：向培養(yǎng)基供應(yīng)商索取,。 32. 用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)時間如何確定？ 答：與正常實驗的培養(yǎng)時間應(yīng)一樣,。 33. 培養(yǎng)基加熱的溫度一般超過100℃,，是否符合要求？有無時間限制,？ 答：答：是指哪個環(huán)節(jié),？培養(yǎng)基滅菌溫度規(guī)定是超過100℃，有具體的時間要求,，如果是指 固體培養(yǎng)基使用前的加熱熔化,，則完全融化即可，避免長時間高溫加熱,。 34. "培養(yǎng)基瓶的裝量,例：瓶裝量是500ml/瓶,，裝量超過500ml/每瓶是否可行？ 答：培養(yǎng)基的分裝量不得超過容器的2/3,。" 35. 同一批培養(yǎng)基代表同一批號生產(chǎn)的培養(yǎng)基嗎,？ 答：是。 36. 培養(yǎng)基配制好滅菌后,，在高壓容器中保溫降至50℃左右,，可不可行？ 答：建議最好不要,，避免過度受熱,。 37. 脫水培養(yǎng)基對濕度是否有要求？多少適宜,？ 答：按要求陰涼干燥環(huán)境儲存即可,。 38. 對照培養(yǎng)基何時能購買？ 答：已經(jīng)陸續(xù)開始銷售,。 39. 培養(yǎng)基pH值測定溫度在25℃,，這個溫度應(yīng)怎么控制？比如固體培養(yǎng)基,，固體培養(yǎng)基使 用過程中還能調(diào)節(jié)pH值嗎,？ 答：可水浴控制培養(yǎng)基溫度。 40. 配制培養(yǎng)基過程中,，按說明書稱定量,，加規(guī)定的純化水，煮沸溶解,，為了避免煮沸過程 總減少水分,，是否要在配制過程適當(dāng)增加水?比如陪硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基. 答：可適量增加，自己掌握,。 41. 商品培養(yǎng)基可否按照使用者驗證的參數(shù)滅菌,？ 答：理論上可以，請自行掌握,。 42. 商品培養(yǎng)基一定要當(dāng)天配當(dāng)天用嗎,？可否在一周內(nèi)用完？ 答：不是即配即用的培養(yǎng)基的話,，儲存的當(dāng),，可以使用。 43. 稱量培養(yǎng)基時,，注意不要吸入粉末,，這粉末是指何物？ 答：就是你所稱量的干粉培養(yǎng)基 44. 從中檢所購買的培養(yǎng)基還需要做適用性檢查嗎,？ 答：因為也是大批量生產(chǎn)的商業(yè)化培養(yǎng)基,，應(yīng)該做適用性檢查。 45. 若商品化的脫水培養(yǎng)基說明書上的處方與藥典上的標示的處方不符的,，不能用嗎,？ 答：不能。 46. 用于調(diào)pH值用的酸,、堿溶液經(jīng)滅菌后會對Hcl溶液,，NaOH溶液發(fā)生物理、化學(xué)變化 嗎,？如果有變化影響,，會影響到所調(diào)培養(yǎng)基的質(zhì)量嗎？ 答：理論上會,，但未經(jīng)試驗證實,。 47. 如果購買的預(yù)灌裝培養(yǎng)基，是否需要做培養(yǎng)基靈敏度,？答：需要,。 48. 購買回來的培養(yǎng)基有幾個批號，那么適用性檢查是只需做一次,？還是每個批號都需做? 答：每批都需做 49. 如果不同次買回來的培養(yǎng)基是同一批號,，是否后面買回來的培養(yǎng)基不需要做適用性檢 查? 答：最好做 50. 如果配制和滅菌過程沒有驗證，是否每一次配制培養(yǎng)基均應(yīng)進行適用性檢查,？ 答：是,。 51. 生物指示劑菌片濃度液如何進行復(fù)核？才可確認所購買生物指示劑菌片濃度符合要求. 答：我所未使用該產(chǎn)品,，無此方面經(jīng)驗,。 52. 紫外燈的使用期限，怎么規(guī)定,，通常多長時間更換紫外燈,？ 答：每種型號的使用壽命不相同,，有1000小時、1500小時,、2000小時等,，買來時應(yīng)仔細閱 讀說明書。 53. 培養(yǎng)基滅菌,，若規(guī)定為121℃15分鐘,，實際操作為（121+2）℃，（15+3）分鐘,，這樣 可取嗎,？是否只能按照培養(yǎng)基配制121℃15分鐘說明來配制？ 答：建議按照規(guī)定時間進行滅菌,。 54. 培養(yǎng)基的滅菌程序如何驗證,？ 答：可采用生物指示劑進行驗證。 55. 煮培養(yǎng)基,，用不銹鋼鍋在電磁爐上煮可行,？硫乙醇培養(yǎng)基是否要煮沸？如何煮沸,？用不 銹鋼鍋在電磁爐上煮沸可行嗎,？可不可以水浴煮沸呢？ 答：硫乙醇應(yīng)煮沸,，量大時,，我實驗室用不銹鋼鍋在電磁爐上煮沸。 56. 從中檢所購買的培養(yǎng)基還需要做適用性檢查嗎,？ 答：因為也是大批量生產(chǎn)的商業(yè)化培養(yǎng)基,，必須做。 57. 在滅菌條的效力驗證時選取微生物指示劑,，由于我公司產(chǎn)品品種多,，同一種微生物指示 劑又存在著在不同介質(zhì)中耐熱性（D值）不同，那應(yīng)如何測定某微生物指示劑在某一介質(zhì)耐 熱性（D值）呢,？應(yīng)如何選取最適宜的微生物指示劑呢,？答：選擇生物指示劑，應(yīng)以所選用 的滅菌方法向?qū)?yīng),。 58. 各種成品培養(yǎng)基要求的滅菌溫度與時間不一樣,，做滅菌鍋的驗證應(yīng)該如何確定溫度和時 間？ 答：我們未遇此種情況,，但認為應(yīng)按照最低溫度和最短時間進行驗證,。 59. 瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，但現(xiàn)有規(guī)定要求培養(yǎng)基需要經(jīng)適用性檢查后才可使用,，時間上 的沖突如何解決,？ 答：一個批次的培養(yǎng)基做一次適用性檢查即可,，以后再使用時可現(xiàn)配現(xiàn)用。 60. 培養(yǎng)基（微生物限度用）是否需作無菌性檢查,？若培養(yǎng)基還需作陽性生長試驗,，那么無 菌檢查與陽性檢查是否應(yīng)分區(qū)域進行,？ 答：按藥典規(guī)定進行驗證,。陽性應(yīng)在專門區(qū)域內(nèi)進行。 61. 是不是有一種1ml的沙土培養(yǎng)管（用來傳代接種）,，在哪里可以買到,？ 答：我們未用過，不清楚如何購買,。 62. 固體培養(yǎng)基能存多久,？（已滅菌的）融化的培養(yǎng)基在水浴中不超8小時，而它呢,？ 答：視培養(yǎng)基種類而定,，不可一概而論。 63. 可否使用紫外線強度指示卡來檢測紫外燈是否需要更換,？ 答：我們未用過紫外線強度指示卡,，我們了解有一種紫外線強度檢測儀大概可以滿足你們的 要求。 64. 如培養(yǎng)基在高壓滅菌器中溫度需自然下降20度才開蓋嗎,？ 答：高溫滅菌器有安全閥,，溫度下降到安全閥可打開時將培養(yǎng)基取出室溫冷卻，各型號滅菌 器安全開蓋溫度不盡相同,。 65. 稀釋液滅菌后ph值是否有變化,？有何影響？（如ph7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液,，ph6.8 無菌磷酸鹽緩沖液） 答：一般pH有下降現(xiàn)象,，約0.2左右，不同培養(yǎng)基pH變化可能不同,。 66. 省所能否幫企業(yè)代購“對照培養(yǎng)基”,？如能，如何聯(lián)系,？ 67. 對照培養(yǎng)基在省所可以買到嗎,？ 答：中檢所已經(jīng)陸續(xù)開售，請與我所業(yè)務(wù)科直接聯(lián)系（020-81854392）,。 68. 按要求每批培養(yǎng)基要做系統(tǒng)適用性驗證,，下面分所或廠家如直接從省所購買，省所買回 來的時候肯定每批已已驗證了,，那下面分所還要做驗證的話,，那不就大大的浪費人力,、財力、 物力,?？煞袷∷忂M的不驗證或提供驗證報告？ 答：各實驗室配制培養(yǎng)基的程序不同,，必須自己做驗證,。 69. 有些培養(yǎng)基要用到梭菌等，下面所可能一兩年也沒檢測陰道內(nèi)用藥,，也很少用到這個菌,， 按驗證要求，就得把各種菌買回去,，還得花很多時間去維護,、保管、傳代等,，下面有些藥廠 這方面的人才就更加稀缺,，這就逼得很多廠家為了應(yīng)付檢查做更多的假記錄或買N支菌回 來這只是為了應(yīng)付檢查。答：這種情況我們能理解,，但是還請按照藥典規(guī)定處理吧,。 70. 配好的MUG有沒有要求多長時間內(nèi)要使用完？可以一次過配很多,，用上幾個星期,？ 答：請按藥典中對培養(yǎng)基的一般要求操作。 71. 配好的靛基質(zhì)有沒有要求多長時間內(nèi)要使用完,？可以一次過配很多,，用上幾個星期？ 答：請放冰箱保存,，我們的經(jīng)驗可使用一到兩個月,。 72. 對照培養(yǎng)基中檢所還是沒有賣，在10月1日未買到對照培養(yǎng)基之前,，可否沿用05版藥 典來確認培養(yǎng)基適用性,？ 答：在未買到之前，請盡量購買有資質(zhì)的品牌培養(yǎng)基,。盡快按10版執(zhí)行,。 73. 大腸埃希菌檢查時，MUG培養(yǎng)基必須在5小時和24小時,，兩個時間段做觀察,？還是 選其中一個適應(yīng)的時間點作觀察好？ 答：如5小時可以明顯觀察到結(jié)果，就可做進一步檢查,。 74. 我公司是生產(chǎn)大容量注射液的,，由于國家對滅菌效力F0值的要求不斷提高，結(jié)合我公 司現(xiàn)行滅菌條件所達到的F0值不高,，故必須進行滅菌工藝變更,，在滅菌工藝變更中，需做 滅菌效力驗證,，需選取適宜的微生物指示劑,。但由于我公司品種較多，同一微生物指示劑在 不同品種藥液中會有不同的耐熱性（D值）,，這影響到我公司對微生物指示劑的選取,，請問 國內(nèi)對耐熱性較高的微生物指示劑的耐熱性測定是怎樣的辦法,？ 答：我們未做過此類研究,，請咨詢相關(guān)產(chǎn)品公司。 暫不能解決的問題如下： 1.培養(yǎng)基PH測定：如做效價用的培養(yǎng)基會有瓊脂,，25℃時已凝固,，應(yīng)怎樣測？ 2. 培養(yǎng)基ph測定時,，因營養(yǎng)瓊脂,、玫瑰紅鈉瓊脂在25℃時才會凝結(jié)成塊，如何采用ph 計測定,？ 3. 滅菌后培養(yǎng)基冷卻至室溫25℃時,，含有瓊脂的培養(yǎng)基已凝固，請問此時如何測定其pH 值,？如何防止其受污染,？ 4. 含有瓊脂的培養(yǎng)基滅菌后的pH值如何測定？ 5. 培養(yǎng)基滅菌后,，25℃時有些會是固態(tài),，如何測定pH值？ 6. 培養(yǎng)基測定pH值,，如果是營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基在25℃是凝固,，怎么測定？ |
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