切片

　　包埋好的蠟塊用刀片修成規(guī)整的四棱臺,，以少許熱蠟液將其底部迅速貼附于小木塊上，夾在輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)的蠟塊鉗內(nèi),，使蠟塊切面與切片刀刃平行,，旋緊。

　　切片刀的銳利與否,、蠟塊硬度適當(dāng)都直接影響切片質(zhì)量,，可用熱水或冷水等方法適當(dāng)改變蠟塊硬度。通常切片厚度為4～7微米,，切出一片接一片的蠟帶,，用毛筆輕托輕放在紙上。

貼片與烤片

　　用粘附劑將展平的蠟片牢附于載玻片上,，以免在以后的脫蠟,、水化及染色等步驟中二者滑脫開。粘附劑是蛋白甘油,。首先在潔凈的載玻片上涂抹薄層蛋白甘油,，再將一定長度蠟帶（連續(xù)切片）或用刀片斷開成單個蠟片于溫水（45℃左右）中展平后，撈至玻片上鋪正,，或直接滴兩滴蒸餾水于載玻片上,，再把蠟片放于水滴上，略加溫使蠟片鋪展,，最后用濾紙吸除多余水分,，將載玻片放入45℃溫箱中干燥,，也可在37℃溫箱中干燥，但需適當(dāng)延長時間,。

切片脫蠟及水化

　　干燥后的切片需脫蠟及水化才能在水溶性染液中進(jìn)行染色,。用二甲苯脫蠟，再逐級經(jīng)純酒精及梯度酒精直至蒸餾水,。如果染料配制于酒精中,，則將切片移至與酒精近似濃度時，即可染色,。

染色

　　染色的目的是使細(xì)胞組織內(nèi)的不同結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)不同的顏色以便于觀察,。未經(jīng)染色的細(xì)胞組織其折光率相似，不易辨認(rèn),。經(jīng)染色可顯示細(xì)胞內(nèi)不同的細(xì)胞器及內(nèi)含物以及不同類型的細(xì)胞組織,。染色劑種類繁多，應(yīng)根據(jù)觀察要求及研究內(nèi)容采用不同的染色劑及染色方法,，還要注意選用適宜的固定劑才能取得滿意的結(jié)果,。

　　經(jīng)典的蘇木精（Hematoxylin）和伊紅（曙紅，Eosin）染色法是組織學(xué)標(biāo)本及病理切片標(biāo)本的常規(guī)染色,，簡稱HE染色,。經(jīng)HE染色后，細(xì)胞核被蘇木精染成紫藍(lán)色,，多數(shù)細(xì)胞質(zhì)及非細(xì)胞成分被伊紅染成粉紅色,。

　　由于蘇木精是帶陽離子的染料，染液呈堿性,，核內(nèi)染色質(zhì)及胞質(zhì)內(nèi)核糖體等物質(zhì)對這種染料有親和性,，稱嗜堿性；而帶陰離子的染料伊紅配制的染液呈酸性,，對這種染料的親和性,，稱嗜酸性。

　　有時不同的組織結(jié)構(gòu)還需要用特殊的染料及染色方法加以顯示,，稱特殊染色,。有些細(xì)胞組織經(jīng)硝酸銀浸潤后，可使溶液中銀離子還原成金屬銀或銀粒附著在細(xì)胞組織上,，呈棕黑色,，這種性質(zhì)稱親銀性，而有些細(xì)胞組織本身不能使硝酸銀的銀離子還原成金屬銀,，還需加還原劑才能將銀離子還原,，稱嗜銀性。

切片脫水,、透明和封片

　　染色后的切片尚不能在顯微鏡下觀察,，需經(jīng)梯度酒精脫水,，在95%及純酒精中的時間可適當(dāng)加長以保證脫水徹底；如染液為酒精配制,，則應(yīng)縮短在酒精中的時間,，以免脫色。二甲苯透明后,，迅速擦去材料周圍多余液體,，滴加適量（1～2滴）中性樹膠，再將潔凈蓋玻片傾斜放下,，以免出現(xiàn)氣泡,，封片后即制成永久性玻片標(biāo)本，在光鏡下可長期反復(fù)觀察,。注意有些染料需特定廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品,。根據(jù)各種染色方法、組織類別及切片厚度,，掌握適宜的染色時間,，才能達(dá)到較好的染色效果。

　　石蠟制片程序及環(huán)節(jié)繁多,，需數(shù)日才能完成1個周期,，但切片可長期保存，供教學(xué),、科研及病理診斷及復(fù)察，并可利用蠟塊作其他項(xiàng)目的回顧性研究,。病理常規(guī)制片過程中已簡化了一些細(xì)的環(huán)節(jié)或縮短了部分處理時間以適應(yīng)臨床需要（可縮短至2天）,。雖然冰凍切片大大快于石蠟切片，但所顯示的形態(tài)結(jié)構(gòu)卻不如前者,，因此病理醫(yī)生最后還需要根據(jù)石蠟切片作出準(zhǔn)確診斷,。

　　近些年來，在病理常規(guī)制片過程中采用了微波技術(shù),，從而大大縮短了制片過程,，而且對形態(tài)結(jié)構(gòu)并沒有影響。微波是一種波長很短,、頻率卻很高的高頻電磁波[波長為1米 ～1毫米,，頻率為300兆赫（MHz）～300千兆赫（GHz）]。組織經(jīng)微波輻射后加速組織內(nèi)部分子的高速運(yùn)動,，以使液體的運(yùn)輸加快,，增加彌散、滲透和交換效率,，從而加速組織的固定,、脫水,、透明、包埋和染色各個環(huán)節(jié),。

　　例如常規(guī)福爾馬林固定需數(shù)小時～1天,，而且能引起組織收縮及某些抗原成分不同程度的受到破壞，微波固定僅需1～2分鐘,，且可減少抗原的丟失和損害,。選擇適當(dāng)?shù)臋n次（功率）、輻射時間和溫度是極為重要的,。目前微波技術(shù)的應(yīng)用在國內(nèi)尚處于起步階段,，許多技術(shù)應(yīng)用環(huán)節(jié)尚需進(jìn)一步摸索。