A2-腎臟：腎小管（單層扁平上皮） 石蠟切片HE染色

材料來(lái)源：人腎（部分）,、兔腎、貓腎,、狗腎（部分）

人腎有10幾個(gè)腎錐體,，兔只有1個(gè)腎錐體

腎臟表面有一層致密結(jié)締組織被膜。取下腎臟,，去掉被膜,，沿腎臟長(zhǎng)軸剖開(kāi)，中央色淺的部分為髓質(zhì),，周圍色深的為皮質(zhì),。將腎切分為2~4塊，確保每塊組織均有皮質(zhì)和髓質(zhì),。組織塊厚度最好不超過(guò)1厘米,。組織放在脫水籃內(nèi)。經(jīng)生理鹽水洗滌后,，迅速固定于常用固定液中,。取材及固定要求在30分鐘內(nèi)完成。

固定液：10%甲醛水溶液,、甲醛生理鹽水溶液,、甲醛PBS液、Bouin液,、Zenker液和Helly液,。

固定3~4小時(shí)后，修整組織塊,，再固定至24小時(shí),。

固定液量為組織容積10~30倍。固定液必須新鮮配制,，用后棄掉,。

甲醛固定后流水沖洗1~24小時(shí)，除去甲醛,，轉(zhuǎn)入70%酒精脫水,。

Bouin液固定后，用70~80%酒精 反復(fù)洗滌,，可加碳酸鋰飽和水溶液或氨水加快去除黃色,，待顏色變淺,，即轉(zhuǎn)入80~90%酒精脫水。

Zenker液或Helly液固定（顯示球旁細(xì)胞等）,，于70%酒精中加少許碘酒精攪拌（脫汞）至棕色很淺為止,，再入5%硫代硫酸鈉水溶液去汞，水洗,，轉(zhuǎn)入70%酒精脫水,。

脫水：從70%酒精開(kāi)始，經(jīng)80%,、90%酒精各一次,，95%酒精和無(wú)水酒精2次，脫水干凈,。每級(jí)酒精脫水時(shí)間不超過(guò)60分鐘,。

透明：經(jīng)一次無(wú)水酒精二甲苯等量混合液一次，再經(jīng)二甲苯透明2~3次,，每次30分鐘至組織呈透明狀,；

其他方法處理：不經(jīng)無(wú)水酒精處理，使用脫水兼透明試劑,。

70%酒精,、80%酒精、90%酒精,、95%酒精,，脫水30分鐘：入冬青油（水楊酸甲酯或苯甲酸甲酯）12~24小時(shí)至組織塊下沉，再換一次冬青油至透明（組織塊全部下沉至底部）,，經(jīng)二甲苯2~3次洗去冬青油并透明,；

70%酒精、80%酒精,、90%酒精,、95%酒精，脫水30分鐘：入正丁醇脫水兼透明1~24小時(shí),，換 2~3次,，可入正丁醇-石蠟等量混合液一次,，再浸蠟,。

浸蠟：脫水透明前打開(kāi)包埋機(jī)電源，并將蠟缸溫度調(diào)至55~65℃,，包埋蠟溫度調(diào)至65~70℃

透明好的組織塊放入石蠟1（蠟溫55℃,，軟蠟）洗去二甲苯或其他透明劑（正丁醇等），30分鐘,；

浸入二甲苯2（蠟溫60~65℃,，硬蠟）45~60分鐘,。浸蠟期間打開(kāi)冰臺(tái)。

選擇合適大小的包埋底模,，從包埋機(jī)中放入包埋蠟并充滿,，打開(kāi)脫水監(jiān)，迅速取出浸蠟的組織,，放在底模的底部正中位置,，撕掉脫水籃的蓋子，蓋上脫水籃的底面部分,，放在冰臺(tái),，幾分鐘后凝固，可輕易取下組織塊（蠟塊,，組織包在凝固的石蠟中）,。

切片：準(zhǔn)備展片的冷水（寬大的結(jié)晶皿、培養(yǎng)皿等大容器）,，打開(kāi)攤片機(jī)電源并啟動(dòng),，將展片溫度調(diào)至45~50℃，烤片溫度調(diào)至60~70℃,，

將蠟塊夾持切片機(jī)上,，固定好蠟塊和刀片，移動(dòng)切片機(jī)頭接近切片刀片刃部,，輕輕搖動(dòng),，不要碰撞蠟塊。調(diào)整切片厚度5~10微米,。組織越大,，厚度越厚才能切得平整。順時(shí)針旋轉(zhuǎn)手輪,，用毛筆輕輕將蠟片從刀口下取下,，放于水中，亮面朝下,。

展片,、黏片和烤片：待蠟片慢慢展平（可能不太平展），轉(zhuǎn)入熱水中,，蠟片迅速展開(kāi),，用鑷子等工具將蠟片順勢(shì)展平，移入另一面糞片機(jī)并立干水分,?？酒?~2小時(shí)，或轉(zhuǎn)入37℃溫箱烤干過(guò)夜,。

染色：蘇木精-伊紅（HE）染色

染色前確保切片烤干,，并將蘇木精染液過(guò)濾,。

染色流程：

二甲苯透明2~4次，每次2~5分鐘,；

無(wú)水酒精 兩次,，洗去二甲苯；

95%酒精,、80%酒精,、70%酒精下行至水，每級(jí)酒精不超過(guò)1分鐘,。

入成熟并過(guò)濾的蘇木精染液中染色10分鐘（冬天最好經(jīng)微波加熱2~3分鐘再染色）,，自來(lái)水洗去浮色；

經(jīng)鹽酸酒精分色數(shù)秒至1分鐘左右,，70%酒精迅速洗去酒精,，再入氨酒精返藍(lán)；（蘇木精染色鏡檢,，可在水洗蘇木精后在低倍鏡下觀察著色情況,，或經(jīng)氨酒精 返藍(lán)后再鏡檢，若著色不好可重回蘇木精染液再染色,，如染色過(guò)深,，經(jīng)水洗后再返鹽酸酒精分色）

經(jīng)80%酒精、90%酒精,、95%酒精洗去氨水,；

入伊紅酒精染液染色2~5分鐘，95%酒精分色2~3次,，不超過(guò)5分鐘,；（伊紅染色時(shí)間根據(jù)蘇木精染色情況而定）

無(wú)水酒精脫水2~4次，每次1~5分鐘,；（可在鏡檢染色情況,，若伊紅著色不好岢重返伊紅液再染色）

二甲苯透明2~4次，每次1~5分鐘,。

封片：準(zhǔn)備好濃度濃稀合適的中性樹(shù)膠,、大小合適的干凈蓋玻片（免洗蓋玻片），紗布?jí)K或綢布,，鑷子,，晾片板。

從染色缸內(nèi)取出染色好的玻片,，立干,；

在組織周圍滴上大小合適的樹(shù)膠,；

夾持合適大小的蓋玻片,，輕輕從組織一側(cè)放下,，蓋玻片即蓋住組織，并用鑷子輕輕壓一下,，使樹(shù)膠鋪平逸出,，對(duì)可能產(chǎn)生的氣泡，用鑷子一端從中往外壓,，將其排出,，如不能完全排出，影響觀察,，可經(jīng)二甲苯洗下,，重新封片。

封好的切片平放于晾片板上,，放37℃溫箱數(shù)天烘干,。置顯微鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)和染色情況。

顯微鏡下觀察：腎小管（泌尿小管）,，單層立方上皮圍成,，遠(yuǎn)端小管和近端小管，細(xì)段,，集合管,。上皮細(xì)胞立方形，一層,，圍成管道,，細(xì)胞核一個(gè)，圓形,，位于細(xì)胞中央,。

腎的組織結(jié)構(gòu)，參見(jiàn)《泌尿系統(tǒng)-腎臟》,。