免疫印跡法 (Western blotting) 是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學(xué)分析技術(shù)相結(jié)合的雜交技術(shù),。免疫印跡法具有分析容量大,、敏感度高,、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),,是檢測(cè)蛋白質(zhì)特性、表達(dá)與分布的一種最常用的方法,,如組織抗原的定性定量檢測(cè),、多肽分子的質(zhì)量測(cè)定及病毒的抗體或抗原檢測(cè)等。免疫印跡法(immunoblotting test,IBT)亦稱酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB),因與Southern早先建立的檢測(cè)核酸的印跡方法 Southern blot 相類似,,亦被稱為Western-blot. 與Southern或Northern雜交方法類似,,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測(cè)物是蛋白質(zhì),,“探針”是抗體,,“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變,。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,,與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),,經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分,。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。 今天小喵給大家?guī)?lái)了一套免疫印跡法Western blot,,大家快來(lái)看看學(xué)習(xí)一下吧~
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