作者：半知菌目

編輯：北京中侖工業(yè)微生物研究院

　　序言：從70%到50-200%，2015年版《中國藥典》的回收率標準降低了嗎,？且聽半知菌目娓娓道來......

　　一,、回收率的規(guī)定

　　中國藥典2015年版4部，對于回收率是這樣規(guī)定的：接種不大于100cfu 每一試驗菌株平行制備2 個平皿,。檢培被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0. 5～2 范圍內(nèi),，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。

　　這段話中包含如下的信息：

　　1.回收率：50～200%,；

　　2.接菌量小于100cfu,。

　　微生物檢驗員應(yīng)該都不會忘記中國藥典2010年版及之前對于回收率的要求吧：

　　1. 回收率大于70%；

　　2. 接種量：50～100cfu,。

　　為什么中國藥典會做出這樣的改變,？中國藥典對回收率標準的改變，是標準降低了嗎,？

　　回收率,，做為評價培養(yǎng)基的關(guān)鍵指標，它的合格與否直接決定了培養(yǎng)基的主要指標促生長能力的優(yōu)劣,。而回收率測定,，又與測試的標準菌株息息相關(guān)、密不可分,。

　　二,、微生物生長曲線

　　我們從微生物的生長曲線開始談起,，

　　單細胞微生物接種純種到一定容積的液體培養(yǎng)基后，在適宜的條件下培養(yǎng),，定時取樣測定細胞數(shù)量,。以細胞增長數(shù)目的對數(shù)做縱坐標，以培養(yǎng)時間做橫坐標,，繪制一條如上圖所示的曲線,，我們稱這條曲線為細菌的生長曲線。曲線顯示了細菌的生長繁殖的4個時期：遲緩期,，對數(shù)生長期,，穩(wěn)定期，衰亡期,。

　　用來測試培養(yǎng)基回收率的菌懸液,，即接種涂布在固體培養(yǎng)基表面那0.1毫升、小于100cfu的測試菌,，必然包含了上述遲緩期,，對數(shù)生長期，穩(wěn)定期,，衰亡期的微生物,，其生長性能，在培養(yǎng)基上表現(xiàn)出的生長活性是有所不同的,。那100cfu個微生物中,，處于對數(shù)生長期，穩(wěn)定期的,，其生長活性必然旺盛，而處于遲緩期,、衰亡期的微生物,，其生長活性必定不如前者。

　　三,、回收率的合格標準

　　因此,，對于測試培養(yǎng)基來說，回收率合格與否,，一定要與對照培養(yǎng)基（標準培養(yǎng)基）生長的同種測試菌種的數(shù)量來對比,，回收率測試的合格標準一定是一個動態(tài)的標準，測試培養(yǎng)基的合格標準就是對照培養(yǎng)基（標準培養(yǎng)基）的上下2倍范圍,。

　　反映在回收率的合格標準上,，50～200%的合格范圍，直接決定因素就是對照培養(yǎng)基（標準培養(yǎng)基）上生長的微生物數(shù)量,，隨每次檢測的不同而呈現(xiàn)出一定幅度的變化,。而不是給回收率規(guī)定一個一成不變的固定數(shù)值,。每一次對測試培養(yǎng)基回收率試驗與對照培養(yǎng)基（標準培養(yǎng)基）的比值決定了這次回收率的合格的上下限，并沒有設(shè)定一個單一的,，固定不變的合格限度,。這樣一個動態(tài)的回收率判定的規(guī)定，更加符合微生物的生長特性,，而且在實際的培養(yǎng)基適用性試驗檢測活動中更有實際意義,。

　　四、回收率的高低

　　那么回收率的高低說明什么呢？對于同一批次培養(yǎng)基,，2次回收率測試如果分別是51%,，99%，說明了什么,？

　　如果回收率測試方法正確，回收率數(shù)值的高低第一不可以評價培養(yǎng)基質(zhì)量優(yōu)劣,；第二不可以評判檢驗員測試水平高低,。如果2次測試同一批培養(yǎng)基，分別得出51%,，99%兩個回收率數(shù)據(jù),，或者兩位檢驗員對一個批次培養(yǎng)基測試分別得出51%，99%兩個回收率數(shù)據(jù),，只要測試方法正確,，這兩個回收率數(shù)據(jù)評價這批次培養(yǎng)基第一都是合格的，第二兩個數(shù)據(jù)是等效的,。而不是回收率高,，培養(yǎng)基質(zhì)量好或檢驗員水平高；回收率低,，培養(yǎng)基質(zhì)量差或檢驗員水平低,。因此，這種情況下回收率數(shù)字的高與低,，反映出了測試菌懸液的生長狀態(tài),，畢竟微生物是有生命的。

　　回收率試驗其實就是用“活”的微生物來測試“死”的培養(yǎng)基,，要證明“死”的培養(yǎng)基合格,，如何操作“活”的微生物成了關(guān)鍵。

　　五,、回收率的測試方法

　　回收率測試方法,，對于固體培養(yǎng)基而言，就是中國藥典2015年版新引入的“涂布法”,。涂布法就是在測試固體培養(yǎng)基表面涂布小于100cfu測試微生物,，按照規(guī)定的方法培養(yǎng)后計數(shù)并計算回收率,。該方法的關(guān)鍵操作有兩點：

　　第一，菌懸液的制備與稀釋,；

　　第二,，涂布方法。

　　第一點藥典上已經(jīng)有了詳細說明,。

　　涂布方法,，藥典只簡單說了在測試培養(yǎng)基上加入不少于0.1mL菌懸液（不超過100cfu微生物）。在涂布法測試中,，0.1mL菌懸液和不超過100cfu微生物,，這兩個數(shù)字都必須滿足嗎？

　　要回答這個問題,，首先要明確的是對于測試培養(yǎng)基的回收率來說,，0.1mL菌懸液和不超過100cfu這兩個數(shù)據(jù)要求，對回收率而言,，那個更關(guān)鍵呢,？毫無疑問，回收率測試就是要考察涂布在培養(yǎng)基上那100cfu的微生物,，測試培養(yǎng)基的支持生長能力,，測試培養(yǎng)基的回收率即由此決定。而0.1mL毫升的接菌數(shù)量,，對于不同規(guī)格的培養(yǎng)基來說,，在保證涂布均一性的提前下，90mm平板加入0.1mL是可以的,，對于150mm平板,，要保證涂布的均一性，加入0.1mL是遠遠不夠的,，加菌量至少需要0.2-0.3mL,；而對于55mm的接觸平板，因為其表面呈現(xiàn)為凸面,，且表面積不足90mm平板的40%，若仍加入0.1mL涂布,，加菌后未等涂布均勻菌懸液就會溢出培養(yǎng)基表面了,，極容易出現(xiàn)回收率非常低下的測試結(jié)果，因此對于55mm的接觸平板,，回收率測試時的加菌量應(yīng)該少于0.1mL,，以0.05mL為宜。但是,，對于不同規(guī)格的培養(yǎng)基,，涂布法的加菌量可以不同,，但加菌的數(shù)量都應(yīng)該遵循不超過100cfu這一原則。

回收率測試試驗,，對于不同培養(yǎng)基,，不同配制時間的培養(yǎng)基，涂布的方法也是所不同