細(xì)胞增殖是生物體生長(zhǎng),、發(fā)育,、繁殖以及遺傳的基礎(chǔ)，是生物體的重要生命特征,。檢測(cè)細(xì)胞在培養(yǎng)基或組織中的生長(zhǎng)速率,，對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)和分化研究至關(guān)重要。在藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中也常被用于評(píng)估藥物的毒性和對(duì)癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制情況,。細(xì)胞增殖檢測(cè)通常是基于DNA含量或細(xì)胞代謝實(shí)現(xiàn)的,，主要的研究方向?yàn)閷?duì)活細(xì)胞的代謝活性的檢測(cè)（基于CCK-8、WST,、XTT,、MTT等）及對(duì)DNA合成的檢測(cè)（基于BrdU、 EdU）,，可通過(guò)體內(nèi)成像,、微孔板或流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)等多種技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞示蹤。

以下是常見(jiàn)的三種方法：

使用四唑鹽進(jìn)行代謝活性檢測(cè)

通過(guò)添加四咪唑鹽到細(xì)胞中可進(jìn)行線粒體內(nèi)酶代謝活性的測(cè)定,?；罴?xì)胞能將四咪唑鹽（如CCK-8、MTT,、XTT,、WST-1）還原成有色的甲瓚或甲瓚鹽（Formazan），可通過(guò)分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè),。

其中Cell Counting Kit-8（CCK-8試劑盒）是由同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開(kāi)發(fā)的檢測(cè)細(xì)胞增殖,、細(xì)胞毒性的試劑盒，為MTT法的替代方法,，CCK-8被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的橙色甲臜染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中,，生成的甲臜量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。具體是利用四唑鹽——WST-8,，它在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料,。WST-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)的靈敏度比其它四唑鹽如MTT, XTT, MTS或WST-1高,。

測(cè)定ATP水平檢測(cè)細(xì)胞增殖

活細(xì)胞需要不斷以ATP的形式輸入自由能,，因此通過(guò)檢測(cè)ATP的增加水平可檢測(cè)細(xì)胞增殖。例如sigma的ATP Bioluminescence Assay Kit HS II及ATP Bioluminescence Assay Kit CLS II)是通過(guò)經(jīng)典的熒光素酶發(fā)光對(duì)ATP檢測(cè)定量的試劑盒,。前者主要應(yīng)用于高靈敏度檢測(cè)極低濃度ATP的實(shí)驗(yàn),，后者主要應(yīng)用于當(dāng)有持續(xù)信號(hào)產(chǎn)生而需要高重復(fù)性結(jié)果的實(shí)驗(yàn)。

DNA的合成的檢測(cè)

DNA的新組裝合成是細(xì)胞生長(zhǎng)的必要條件,，故經(jīng)常被用來(lái)進(jìn)行細(xì)胞增殖,、細(xì)胞活力及凋亡的檢測(cè),。 BrdU及EdU，都是胸腺嘧啶的非放射性類似物,，能摻入增殖細(xì)胞的DNA中,，可通過(guò)對(duì)BrdU及EdU的檢測(cè)，從而對(duì)DNA的合成量進(jìn)行測(cè)定,。

例如sigma,，可通過(guò)Cell Proliferation ELISA,BrdU (比色法.)或Cell Proliferation ELISA, BrdU (發(fā)光法) 進(jìn)行細(xì)胞群落中DNA合成測(cè)定（BrdU based）。優(yōu)點(diǎn)是：實(shí)驗(yàn)結(jié)果同增殖細(xì)胞數(shù)目緊密相關(guān),，可一步完成細(xì)胞的溫和固定和變性,，操作方便穩(wěn)定，不破壞細(xì)胞形態(tài),。5-Bromo-2′-dU Labeling/Detection Kit I（熒光法）或Kit II（AP）可使用試劑盒提供的BrdU單抗,，以及酶或熒光偶聯(lián)二抗，檢測(cè)單細(xì)胞水平的DNA合成（BrdU based）,。前者通過(guò)免疫熒光檢測(cè),，后者通過(guò)熒光顯微鏡檢測(cè)。優(yōu)點(diǎn)是：使用核酸酶變性DNA,，在不傷害細(xì)胞完整性的情況下使抗體結(jié)合BrdU,。體內(nèi)外均可進(jìn)行標(biāo)記，且可同時(shí)使用其他標(biāo)記進(jìn)行檢測(cè),，操作安全簡(jiǎn)便,。適用于貼壁或懸浮細(xì)胞，冰凍或福爾馬林包埋組織切片,。

EdU與BrdU檢測(cè)法不同,，EdU-Click 檢測(cè)，如EdU-Click 594無(wú)需進(jìn)行DNA變性來(lái)檢測(cè)摻入的EdU,，而是通過(guò)一次快速,、高度特異性的點(diǎn)擊反應(yīng)，將EdU高效地?fù)饺氲叫潞铣傻腄NA之中, 通過(guò)EdU與不同熒光染料的特異性反應(yīng)檢測(cè)DNA復(fù)制活性,，從而確地反映細(xì)胞的增殖情況,。這一類細(xì)胞增殖用熒光標(biāo)記采用溫和的點(diǎn)擊實(shí)驗(yàn)方案，準(zhǔn)確且兼容各種抗體實(shí)驗(yàn)方案,，整個(gè)實(shí)驗(yàn)可在30分鐘內(nèi)完成,，在結(jié)果的數(shù)據(jù)豐富程度方面，堪比多重分析方法,。此外,，該方法適用于培養(yǎng)的細(xì)胞或組織切片，可用流式細(xì)胞術(shù)分析檢測(cè)EdU Flow Cytometry Kit 594）；可進(jìn)行HCS分析或進(jìn)行細(xì)胞裂解液微孔板檢測(cè)EdU HTS Kit 594,；也可適用于培養(yǎng)中的細(xì)胞，或通過(guò)注射方法進(jìn)行活體實(shí)驗(yàn)的小動(dòng)物樣本,，進(jìn)行體內(nèi)成像分析In Vivo EdU Click Kit 594,、流式細(xì)胞檢測(cè)或HCS高通量檢測(cè)。(共有488,、555,、594、647四種熒光染料可選）,。