細(xì)胞增殖的能力是評(píng)價(jià)細(xì)胞、代謝,、生理,、病理狀況、細(xì)胞活性,、基因毒性等的重要指標(biāo)之一,。

細(xì)胞增殖雖然與多種因素有關(guān)，比如細(xì)胞代謝活性,、與細(xì)胞增殖相關(guān)的蛋白表達(dá),、ATP的濃度等等，但是檢測(cè)細(xì)胞增殖現(xiàn)象的zui直接zui準(zhǔn)確的方法就是用熒光探針直接檢測(cè)遺傳物質(zhì)DNA的合成,，這種方法是研究細(xì)胞增殖,、信號(hào)通路,、DNA修復(fù)及分化等等方向常用的方法,。

目前，基于DNA的合成原理,，人們zui初開(kāi)發(fā)了工具是BrdU染色法, 但是這種方法操作耗時(shí)長(zhǎng),，往往需要過(guò)夜處理細(xì)胞，操作繁雜,，比如需要DNA變性,、抗原修復(fù)以及抗原抗體反應(yīng)等操作，后來(lái)在BrdU的基礎(chǔ)上,，人們開(kāi)發(fā)出了革命性的探針--EdU,，這種方法不需要繁雜的操作，節(jié)約時(shí)間,，且反應(yīng)更靈敏和準(zhǔn)確,。并且與MTT/WST-1或者CCK-8這種依靠化學(xué)顯色法只能得到一個(gè)折線圖的方法相比，EdU 細(xì)胞增殖檢測(cè)法可以得到高清細(xì)胞增殖現(xiàn)象數(shù)據(jù)圖,，可視化展示數(shù)據(jù),、更直觀、更具視覺(jué)效果!

EdU的檢測(cè)原理是什么,？

EdU可以說(shuō)是一款革命性的細(xì)胞增殖狀態(tài)檢測(cè)方法

與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測(cè)方法相比,， EdU只有BrdU抗體大小的1/500，在細(xì)胞內(nèi)更容易擴(kuò)散,，不需要嚴(yán)格的樣品變性(酸解,、熱解、酶解)處理,，有效地避免了樣品損傷,，有助于在組織、器官的整體水平上觀測(cè)細(xì)胞增殖的真實(shí)情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測(cè)速度,。

EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)法的操作教程

一,、首先用 EdU 來(lái)標(biāo)記細(xì)胞

注意:本實(shí)驗(yàn)樣本是 Hela 細(xì)胞，如果使用其它類型的細(xì)胞,，實(shí)驗(yàn)可能需要做調(diào)整,。建議 EdU 起始濃度是 10 μM，或者根據(jù)細(xì)胞類型設(shè)置幾個(gè)梯度預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索zui佳EdU濃度,，再進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn),。

1.在六孔板里的蓋玻片上培養(yǎng)細(xì)胞，使其生長(zhǎng)至所需密度后處理細(xì)胞,；

2.用 10 mM EdU 溶液在無(wú)血清培養(yǎng)基中制備 2x EdU 工作溶液,；

3.預(yù)熱 2x EdU 溶液，然后將 2x EdU 溶液添加到等體積含有實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的培養(yǎng)基中,，獲得 1x EdU 溶液,。例如，對(duì)于zui終濃度為 10 μM 的溶液,，可用 20 μM EdU 的新鮮培養(yǎng)基替換一半含細(xì)胞的培養(yǎng)基

注意：建議不要更換所有的培養(yǎng)基,，因?yàn)檫@會(huì)影響細(xì)胞增殖速率；

將處理好的細(xì)胞孵育12小時(shí),；

孵育完成后立即進(jìn)行步驟 B

二,、細(xì)胞固定和透化

1.孵育后除去培養(yǎng)基，并向每個(gè)含有蓋玻片的孔中加入2.5 mL含多聚甲醛的 PBS,，室溫下孵育15分鐘,；

2.除去固定液，用2.5 mL PBS洗滌孔中的細(xì)胞5分鐘,，重復(fù)三遍,；

3.除去洗滌液，然后向前五個(gè)孔中加入2.5 mL通透液,， 室溫下孵育20分鐘,；

4.除去通透緩沖液，用2.5 mL PBS洗滌每個(gè)孔中的細(xì)胞兩次,，除去洗滌液,；

5.立即進(jìn)入步驟 C。

三,、 EdU 檢測(cè)

每孔使用 100 μL 反應(yīng)混合物,。反應(yīng)混合物體積可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)節(jié)，但必須按比例加入反應(yīng)組分,。

1.制備 Click-iT 反應(yīng)混合物,。注意要按表中列出的順序添加成分,，否則反應(yīng)將無(wú)法得到zui佳效果。配置好的 Click-iT 反應(yīng)混合物必須在15分鐘內(nèi)使用,。

2.向每個(gè)玻片上加入 100 μl Click-iT 反應(yīng)混合物,，室溫下避光孵育 30 分鐘；

3.除去反應(yīng)混合物,，用2.5 mL PBS洗滌每孔一次后,，除去洗滌液；

可選擇步驟：進(jìn)行核染色（DAPI 或 Hoechst 33342）或抗體標(biāo)記

提示：在孵育過(guò)程中一定要避光,。如不需要其它染色,，孵育后請(qǐng)直接進(jìn)行成像和分析

Abbkine EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒發(fā)表的文獻(xiàn)：

1.Perilaldehyde activates AMP‐activated protein kinase to suppress the growth of gastric cancer via induction of autophagy

作者：Y Zhang, S Liu, Q Feng 雜志名稱：JOURNAL OF CELLULAR BIOCHEMISTRY   IF：3.09

2. In vitro mitochondrial-targeted antioxidant peptide induces apoptosis in cancer cells

作者：W Zhan, X Liao, L Li 雜志名稱：Onco Targets Therv IF：2.31