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依據(jù)衛(wèi)生部《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》第三十條款和CNAS-CL02：2008《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》（IOS15189:2007）第5.5條款的相關(guān)要求，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)方法學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià),，以檢查其分析性能和對(duì)預(yù)期用途的適用性,。近年來(lái)，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心在實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的工作中,，進(jìn)行了大量的性能驗(yàn)證試驗(yàn),，累積了較豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，本文從“5W+1H”六個(gè)方面,，對(duì)定量檢驗(yàn)方法學(xué)的性能驗(yàn)證進(jìn)行匯總,，供大家探討和交流。

一,、為什么要做性能驗(yàn)證,？

性能驗(yàn)證是為了確保實(shí)驗(yàn)室開展的檢驗(yàn)項(xiàng)目，所應(yīng)用的檢測(cè)系統(tǒng)的分析性能或檢驗(yàn)項(xiàng)目的方法學(xué)能夠滿足檢測(cè)及臨床要求,，從而保證患者標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠,。

二、進(jìn)行性能驗(yàn)證的場(chǎng)所,？

按照實(shí)驗(yàn)室管理辦法和認(rèn)可準(zhǔn)則的要求,，醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)承擔(dān)所開展檢驗(yàn)項(xiàng)目的性能驗(yàn)證工作。

三,、何時(shí)需要做性能驗(yàn)證,？

1.以下情況應(yīng)完成初次性能驗(yàn)證：新安裝的儀器擬開展的項(xiàng)目,；新開展項(xiàng)目；同一項(xiàng)目的試劑變更廠家或檢驗(yàn)方法發(fā)生變更時(shí),；儀器校準(zhǔn),、發(fā)生故障維修后或更換主要的配件后，可能對(duì)結(jié)果產(chǎn)生較大的影響時(shí),，可選擇其所開展的部分檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行分析性能證,。

2.何時(shí)需要做性能評(píng)估/評(píng)價(jià)?

初次驗(yàn)證后，對(duì)精密度,、正確度及可報(bào)告范圍等性能參數(shù)至少每12個(gè)月進(jìn)行一次評(píng)估，可通過(guò)評(píng)估如CV,、均值等室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的變化趨勢(shì)（批間精密度）,、室間質(zhì)評(píng)項(xiàng)目的結(jié)果的可接受性（正確度）,、臨床醫(yī)護(hù)人員對(duì)結(jié)果的反饋（可報(bào)告范圍）、小樣本的驗(yàn)證等多種方式進(jìn)行,。若評(píng)估的結(jié)果不可接受,，則需重新進(jìn)行性能驗(yàn)證,。

四,、哪些人員可以進(jìn)行性能驗(yàn)證試驗(yàn)?

性能驗(yàn)證試驗(yàn)應(yīng)由實(shí)驗(yàn)室有資質(zhì)的檢驗(yàn)人員完成,，必要時(shí)可由技術(shù)支持人員協(xié)助完成試驗(yàn),；而性能驗(yàn)證報(bào)告必須由資深的檢驗(yàn)人員完成,，并經(jīng)科室主任審核后歸檔保存,。

五,、性能驗(yàn)證包括哪些方面,？

定量項(xiàng)目性能驗(yàn)證的內(nèi)容包括但不限于：精密度（批內(nèi),、批間）；正確度,；檢測(cè)低限（靈敏度）；攜帶污染率,；線性范圍,；可報(bào)告范圍；生物參考區(qū)間,；檢驗(yàn)結(jié)果量值溯源,；測(cè)量不確定度,；等。

六,、如何實(shí)施性能驗(yàn)證,？

1.性能驗(yàn)證試驗(yàn)的準(zhǔn)備工作

1.1范圍,、材料、方案：應(yīng)確定定量檢測(cè)的項(xiàng)目；所需的儀器,、配套試劑,、校準(zhǔn)品,、質(zhì)控品等材料；制定完整的性能驗(yàn)證方案（尤其是各項(xiàng)性能參數(shù)的判斷標(biāo)準(zhǔn)的制定及其依據(jù)）,。

1.2 試驗(yàn)要求：儀器應(yīng)進(jìn)行校準(zhǔn)或保養(yǎng)；要盡可能在相同條件下進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)；所有試驗(yàn)均需在室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果在控的情況下方可進(jìn)行。

2.性能驗(yàn)證試驗(yàn)

主要討論精密度,、正確度,、攜帶污染率,、線性范圍、可報(bào)告范圍的試驗(yàn)方法,。

2.1 精密度

主要包括批內(nèi)精密度和批間精密度兩項(xiàng)

2.1.1批內(nèi)精密度

標(biāo)本選擇：選擇低,、中、高三個(gè)濃度或中,、高兩個(gè)濃度的新鮮標(biāo)本/質(zhì)控品,；

試驗(yàn)方法：連續(xù)重復(fù)測(cè)定20/21次,；

結(jié)果計(jì)算：計(jì)算后20次檢測(cè)結(jié)果的SD和CV；

判斷標(biāo)準(zhǔn)：以能力驗(yàn)證/室間質(zhì)評(píng)評(píng)價(jià)界限作為允許總誤差（TEa）,，批內(nèi)精密度<1/4TEa,；或者符合試劑說(shuō)明書的要求。

注意事項(xiàng)：若選擇標(biāo)本,，則其濃度應(yīng)盡可能接近質(zhì)控品或試劑說(shuō)明書中評(píng)價(jià)該性能所提供的標(biāo)本濃度,。

2.1.2 批間精密度

標(biāo)本選擇：選擇低,、中,、高三個(gè)濃度或中,、高兩個(gè)濃度的新鮮標(biāo)本/質(zhì)控品,；

試驗(yàn)方法：每天1次測(cè)試,，連續(xù)測(cè)試20天,；或每天2次測(cè)試，連續(xù)測(cè)試10天,；或每天4次測(cè)試,，連續(xù)測(cè)定5天;

結(jié)果計(jì)算：剔除離群值后,，計(jì)算20次檢測(cè)結(jié)果的SD和CV；

判斷標(biāo)準(zhǔn)：<1/3TEa,；或者符合試劑說(shuō)明書的要求,。

注意事項(xiàng)：若選擇標(biāo)本,，首先應(yīng)考慮檢測(cè)物的穩(wěn)定性,，濃度要求同批內(nèi)精密度,；若檢測(cè)物不穩(wěn)定，則必須使用質(zhì)控品進(jìn)行該試驗(yàn)。

2.2 正確度

可采用以下七種方法進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)：

①分析已知值的參考物質(zhì)：因?qū)嶒?yàn)室不易得到參考物質(zhì),，較少使用。

②分析廠商或第三方提供的已經(jīng)賦值的質(zhì)控品：因采用質(zhì)控品進(jìn)行正確度評(píng)價(jià),，尚存在爭(zhēng)議，較少使用,。

③加樣回收試驗(yàn)：因大部分用于臨床診斷的檢驗(yàn)項(xiàng)目為微量或痕量物質(zhì)，試驗(yàn)難度較大,；不宜采用,。

④方法學(xué)比對(duì)試驗(yàn)；適用于引進(jìn)新方法時(shí),，可以與原有的方法進(jìn)行比較,，最少分析20個(gè)新鮮標(biāo)本,，要求濃度覆蓋線性范圍,，用兩種方法同時(shí)測(cè)定同樣的樣品（偏倚<1/2Tea）,，進(jìn)行相關(guān)回歸分析,。

⑤分割樣本室間比對(duì)：要求與使用相同檢測(cè)方法的、質(zhì)量保證措施較好的,、或已獲認(rèn)可或的實(shí)驗(yàn)室，或與使用配套分析系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果滿意,。

⑥分析室間質(zhì)評(píng)物：最為常用,。檢測(cè)衛(wèi)生部臨檢中心質(zhì)評(píng)物，檢測(cè)結(jié)果均在允許范圍內(nèi),。

⑦分析廠商提供的參考物質(zhì)：當(dāng)以上六種方法均難以實(shí)施時(shí)，此方法最為實(shí)

用,。選擇使用A,、B兩個(gè)不同批號(hào)校準(zhǔn)品，使用A批號(hào)校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn),，對(duì)B批號(hào)的校準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè),，連續(xù)測(cè)定6次，排除第1次的分析結(jié)果,，計(jì)算其余5次檢測(cè)結(jié)果的平均值,，要求每次檢測(cè)結(jié)果和均值都在校準(zhǔn)品定值可接受范圍內(nèi)；并計(jì)算檢測(cè)均值與廠家賦值的偏倚,，以<uB</u（廠家提供的校準(zhǔn)品B類不確定度）作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),。

2.3 攜帶污染率（加樣針）

標(biāo)本選擇：取高濃度室內(nèi)質(zhì)控品或高濃度新鮮標(biāo)本，混合均勻后放置于1,、2,、3杯位置,，再取去離子水或生理鹽水放置于4,、5、6杯位置,；

試驗(yàn)方法：對(duì)以上6份標(biāo)本連續(xù)進(jìn)行檢測(cè),，測(cè)定值分別為H1、H2,、H3,、L1、L2,、L3,；

結(jié)果計(jì)算：攜帶污染率 =（L1－L3）×100% /（H3－L3）；

判斷標(biāo)準(zhǔn)：生化檢驗(yàn)項(xiàng)目 <2%,。

2.4 線性評(píng)價(jià)

標(biāo)本選擇：選取接近線性范圍上限的高值標(biāo)本與接近下限的低值標(biāo)本,；無(wú)法獲取合適的標(biāo)本可使用添加物或校準(zhǔn)品；上述條件均無(wú)法滿足時(shí),，可選用滿足臨床需求的高值標(biāo)本,。

試驗(yàn)方法：標(biāo)本分別按5：0（100%）、4：1（80%）,、3：2（60%）,、2：3（40%）,、1：4（20%）、0：5（0%）的比例進(jìn)行稀釋,，每個(gè)稀釋度重復(fù)測(cè)定3次計(jì)算均值,。

結(jié)果計(jì)算：將實(shí)測(cè)值與理論值作比較（偏離應(yīng)小于10%），計(jì)算Y= bX + a,，驗(yàn)證線性范圍,。

判斷標(biāo)準(zhǔn)：b在0.97～1.03范圍內(nèi)，a接近于0,。

2.5可報(bào)告范圍

適用于實(shí)驗(yàn)室開展的線性范圍不能滿足臨床標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果需求的定量檢驗(yàn)項(xiàng)目,。

標(biāo)本選擇：取一份接近線性范圍高限值濃度的病人標(biāo)本，用去離子水,、生理鹽水,、低值血清或廠商推薦的稀釋液進(jìn)行系列稀釋，稀釋比例參照廠商提供的機(jī)內(nèi)稀釋倍數(shù),。

試驗(yàn)方法：每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定2次計(jì)算均值,。

結(jié)果計(jì)算：每個(gè)濃度實(shí)際測(cè)定的均值和稀釋后的理論估計(jì)值，兩者進(jìn)行差值相對(duì)百分?jǐn)?shù)計(jì)算,，如果結(jié)果≤20%,，此稀釋度為技術(shù)上的可接受限。

可報(bào)告范圍的高限=可接受最大稀釋倍數(shù)×線性范圍（AMR）上限值,；

可報(bào)告范圍的低限：線性范圍的檢測(cè)低限或功能靈敏度為可報(bào)告范圍的低限,。

綜上所述，方法學(xué)的分析性能驗(yàn)證包涵許多的內(nèi)容,、技術(shù)要求較高,，在實(shí)際工作中，應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行分析,，在質(zhì)量體系允許的范圍內(nèi),，選擇合適的試驗(yàn)方法完成此項(xiàng)工作，保留原始數(shù)據(jù),，結(jié)合制定的判斷標(biāo)準(zhǔn),，綜合分析試驗(yàn)結(jié)果，以評(píng)價(jià)所選的方法學(xué)能否滿足臨床實(shí)驗(yàn)的要求,，從而保障檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。