體外診斷試劑性能評(píng)估指標(biāo)
體外診斷試劑是疾病診斷與治療的重要輔助手段。一個(gè)新開發(fā)的試劑能否真正面市,，除了進(jìn)行反應(yīng)模式和體系等優(yōu)化外,，合理的性能分析與評(píng)估，是必經(jīng)的程序,，也是質(zhì)量保障的基礎(chǔ),。通常，體外診斷試劑產(chǎn)品性能評(píng)估包括檢測限,、線性范圍,、可報(bào)告范圍，準(zhǔn)確度,，精密度,，干擾實(shí)驗(yàn)，穩(wěn)定性,，參考區(qū)間,。
檢測限是指檢測方法可檢測出的最低被檢測量濃度，也稱為分析靈敏度,。
分析靈敏度：一般用95％可信限計(jì)算：重復(fù)測定空白樣本20次,，計(jì)算20次反應(yīng)測得的均值（X）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD），以X+2SD（夾心法）或X-2SD（競爭法）計(jì)算出相應(yīng)的濃度,，即為體外診斷試劑的分析靈敏度,，也是注冊(cè)資料所需提供的內(nèi)容。
功能靈敏度：將低值樣本倍比稀釋后重復(fù)測定10次以上,，計(jì)算每個(gè)低值樣本檢測信號(hào)的均值,、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)（CV），選擇CV大于 20％時(shí)所對(duì)應(yīng)的低值樣本平均濃度,，這就是體外診斷試劑的功能靈敏度,。
線性范圍是指檢測系統(tǒng)最終輸出值（濃度或活性）與被分析物的濃度成正比的范圍,。
建立一種定量測定方法的線性范圍，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7-11個(gè)濃度水平,。準(zhǔn)備足量的高值（H）樣本和低值（L）樣本,，經(jīng)不同比例混合配制成中間濃度樣本，比例關(guān)系可按等間距或其他確定的比例,。其中,，有幾個(gè)重要的濃度水平需要考慮：1）最低分析濃度或線性范圍下限；2）不同的醫(yī)學(xué)決定水平值,；3）最高分析濃度或線性范圍上限,。
可報(bào)告范圍是指對(duì)檢測有意義的待測物濃度范圍。
可報(bào)告范圍低限：以方法性能指示的CV值為可接受界值,，由數(shù)據(jù)中選取CV值等于或小于可接受界值的最低濃度水平作為可報(bào)告范圍低限,。
可報(bào)告范圍高限：當(dāng)測定值超出線性范圍上限時(shí)，此測定值應(yīng)視為不準(zhǔn)確值,，需要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋。由于基質(zhì)效應(yīng)的影響,，任何標(biāo)本并非可以做無止境的稀釋,。也就是說，每一個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目有其最大稀釋倍數(shù),。這個(gè)最大稀釋倍數(shù)與線性范圍上限的乘積即為可報(bào)告范圍高限,。
準(zhǔn)確度是指檢測結(jié)果與被測量真值之間的一致程度。
回收實(shí)驗(yàn)：實(shí)質(zhì)上是實(shí)驗(yàn)測得的加入的標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與理論計(jì)算而來的加入標(biāo)準(zhǔn)物的濃度的比值,。
方法學(xué)比對(duì)：對(duì)于比較,、比對(duì)方法，采用符合生產(chǎn)廠家要求的實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)行方法,，或采用工人的參考方法,。比對(duì)方法應(yīng)具備以上條件：1）具有比實(shí)驗(yàn)樣品方法更好的精密度；2）沒有已知的干擾物,；3）同實(shí)驗(yàn)樣品方法具有相同單位,。
精密度通常是指在規(guī)定條件下相互獨(dú)立的測試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法得到的,，是通過測量不精密度的數(shù)字形式表示的,，例如：偏差、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)（CV）,。
只評(píng)估批內(nèi)精密度：批內(nèi)精密度的測定應(yīng)使用同一種類,、同一批號(hào)的試劑盒校準(zhǔn)物（如可能，只進(jìn)行一次校準(zhǔn)）,，在一批內(nèi)對(duì)樣本進(jìn)行至少20次重復(fù)測定,。
同時(shí)評(píng)估批內(nèi)和批間精密度：每天做2個(gè)批次的測試,，每批測試對(duì)同一樣品做雙份測量，工作20d,。那么,，評(píng)估結(jié)束時(shí)有40對(duì)數(shù)據(jù)，即80個(gè)測試結(jié)果,。從同一樣本的雙份測量結(jié)果即40個(gè)數(shù)據(jù)可求出批內(nèi)精密度,；從兩批80個(gè)數(shù)據(jù)可求出批間精密度。
干擾實(shí)驗(yàn)主要是考慮非檢測物對(duì)檢測結(jié)果的影響,，通過對(duì)樣本中添加不同種類,、不同濃度的干擾物質(zhì)進(jìn)行檢測，以判斷在產(chǎn)品性能指標(biāo)范圍內(nèi)可接受的干擾物質(zhì)極限濃度,。血液樣本一般須考慮膽紅素,、血紅蛋白、甘油三酯等常見干擾物質(zhì)及溶血等因素,；檢測樣本為血漿的試劑,，還應(yīng)充分考慮不同抗凝劑對(duì)檢測結(jié)果的影響。尿液樣本則一般考慮pH值,、血尿,、蛋白尿等的影響。
穩(wěn)定性是體外診斷試劑隨時(shí)間推移保持特性一致性的能力,。
效期穩(wěn)定性研究時(shí)間設(shè)定一般原則是“第一年內(nèi)每隔三個(gè)月檢測一次,，第二年內(nèi)每隔六個(gè)月檢測一次，第三年開始可以每年檢測一次,。如果有效期為一年或一年以內(nèi),，則長期穩(wěn)定性應(yīng)為前三個(gè)月每月檢測一次，以后每三個(gè)月一次”,。
加速穩(wěn)定性研究方法為：將三個(gè)批號(hào)的試劑盒放 入37?C恒溫培養(yǎng)箱中,，分別于第0、3,、6,、10天各取原裝未開封試劑，參考產(chǎn)品技術(shù)要求中相關(guān)檢測方法對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢測,，各指標(biāo)均應(yīng)符合擬定的技術(shù)要求中各性能指標(biāo)要求,。
運(yùn)輸穩(wěn)定性評(píng)價(jià)是基于對(duì)試劑實(shí)際運(yùn)輸條件的了解（如運(yùn)輸時(shí)間、預(yù)計(jì)溫度和濕度）來模擬運(yùn)輸條件存放產(chǎn)品從而評(píng)價(jià)產(chǎn)品的穩(wěn)定性,。在運(yùn)輸穩(wěn)定性考察中主要考慮的條件有：極端溫度條件,，溫度循環(huán)條件，沖擊與振蕩,，壓力與濕度等,。生產(chǎn)企業(yè)可以通過實(shí)地追蹤記錄體外診斷試劑產(chǎn)品的物流運(yùn)輸情況為模擬運(yùn)輸 模式的確定提供參考,。
開瓶穩(wěn)定性是考察試劑在正常使用條件下，外界因素對(duì)試劑性能指標(biāo)的影響,。由于試劑,、試紙條等在開封后會(huì) 與空氣接觸產(chǎn)生氧化、降解等反應(yīng),，部分試劑在開瓶上機(jī)后的外界條件與原儲(chǔ)存條件差別很大,，以及部分試劑還會(huì)存在使用者二次配制等情況，所以在制定開封穩(wěn)定性研究方法時(shí)應(yīng)充分考慮到各種環(huán)境因素,。
參考區(qū)間即正常人群的檢測值范圍,，在研究過程中，企業(yè)應(yīng)詳細(xì)說明所采用樣本來源及試驗(yàn)方法,，并明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn),。根據(jù)文獻(xiàn)資料等判斷檢測結(jié)果在不同性別、年齡,、樣本類型之問是否有顯著性差異,，如有須分別進(jìn)行研究，同時(shí)所研究樣本例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求,，建議采用至少120例以上樣本進(jìn)行研究(可滿足90％置信限),，198例樣本則可滿足99％的置信限，在檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析過程中,，結(jié)合不同產(chǎn)品的臨床意義確定最終的參考區(qū)間，在研究過程中由于所選樣本受地區(qū)或人種限制,，因此在臨床應(yīng)用時(shí)建議各臨床實(shí)驗(yàn)室建立參考區(qū)間,。
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