背景介紹

一般細胞培養(yǎng)分為懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng),，由于細胞的增殖有可能形成大小不等的細胞團塊或連接成片?；铙w體內(nèi)細胞當離體置于體外培養(yǎng)時大多數(shù)以貼壁方式生長,，主要包括正常細胞（例如：成纖維細胞、巨噬細胞,、神經(jīng)膠質(zhì)細胞,、心肌細胞以及肝、肺,、腎,、乳腺、皮膚細胞等）和腫瘤細胞,，一般用胰酶消化,；臨床上常見的脫落細胞經(jīng)過簡單離心過篩處理就能制備成單細胞懸液。

材料和試劑耗材

實驗流程

貼壁細胞：

1. 將培養(yǎng)細胞用0.25 % ~ 5 % 胰蛋白酶消化1 ~ 5 min（根據(jù)室溫情況而定）,，至光鏡下見到貼壁細胞間出現(xiàn)篩狀間隙為止,，棄去消化液，加 PBS 液,。

2. 用吸管將細胞從瓶壁上輕輕吹打下來,，并移入離心管中。

3. 短時低速離心,，即800~1000 r/min,，5 min。

4. 棄上清,，加pH 7.4的PBS液5~8 mL,，低速短時離心，800~1000 r/min 離心3~5 min,；重復(fù) 2~3次,，以去除細胞懸液中的細胞碎片。

5. 加少許PBS液,，將沉淀細胞輕輕吹打均勻,。加固定液或低溫保存待用。

脫落細胞：

1. 細胞洗脫到10 mL PBS液中,，1500 rpm,，5 min離心后，再用PBS液洗2次,，800 rpm,，離心2 min，棄上清；

2. 再加入PBS液5 mL,，以300目尼龍濾網(wǎng)過濾,，離心沉淀去上清；

3. 加少許PBS液混勻沉淀細胞,，加固定液或低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

結(jié)果展示

所獲細胞懸液：活率大于97 %,，結(jié)團率低，背景干凈,。