河豚毒素(TTX)作為豚毒魚類體內(nèi)含有的一種生物堿,,是毒性很強(qiáng)的一種非蛋白生物毒素,,是一種典型的選擇性極高的快速可逆的鈉離通道阻斷劑,可阻止鈉離子進(jìn)入細(xì)胞從而影響細(xì)胞膜動(dòng)作電位產(chǎn)生,。 實(shí)驗(yàn)中TTX常被使用于阻斷鈉離子通道,,為了研究TTX在抑制阻斷神經(jīng)遞質(zhì)的誘發(fā)釋放的兩種不同電流中是否存在差異,以及探求TTX的最低完全阻斷的工作濃度,,在漢斯出版社《生物物理學(xué)》期刊中,,有學(xué)者分別采用不同濃度的TTX作用于原代小鼠大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞,記錄不同濃度TTX存在下的eIPSC與eEPSC,。 取新生24小時(shí)內(nèi)的野生型小鼠,,將新生鼠消毒后放入超凈工作臺(tái)中,斷頭處死,,分離出大腦皮層,,放入提前預(yù)冷的HBS緩沖液中。將HBS緩沖液倒掉,,加入1mL0.25%的胰酶,,放入37℃培養(yǎng)箱中消化,倒計(jì)時(shí)12~13分鐘,,消化完成后將胰酶吸干凈,,加入3mLplating溶液,清洗三遍防止胰酶殘留,,加入2mLplating溶液輕輕吹打8~12次,,將細(xì)胞吹散。接下來用70μm的細(xì)胞篩濾去組織塊,,加入一定體積的plating溶液定容(按一只老鼠種植12個(gè)孔的比例定容),,上下顛倒混勻后每個(gè)孔加入1mL細(xì)胞懸浮液。最后將細(xì)胞懸液滴于玻片上進(jìn)行培養(yǎng),。培養(yǎng)的第一天換上無(wú)Ara-C培養(yǎng)基,,在培養(yǎng)的第四天和第九天換上含4μM的Ara-C培養(yǎng)基,培養(yǎng)13~14天至細(xì)胞成熟后進(jìn)行電生理實(shí)驗(yàn)記錄,。 本實(shí)驗(yàn)通過使用大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞在不同濃度TTX存在的條件下進(jìn)行電生理實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證,,可以從最后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中發(fā)現(xiàn),隨著TTX濃度的增加,,它對(duì)誘發(fā)的突觸后電流的抑制作用逐步增強(qiáng),,呈現(xiàn)出一種濃度依賴性關(guān)系。將eIPSC組與eEPSC組相比較,,eEPSC組的IC50明顯大于eIPSC組,,這意味著誘發(fā)的突觸后興奮性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放會(huì)對(duì)TTX的濃度變化更為敏感,。綜上所述,河豚毒素對(duì)不同類型的突觸后電流影響不同,,且誘發(fā)的興奮性突觸后電流對(duì)河豚毒素濃度變化更敏感,。 文章鏈接:https:///10.12677/BIPHY.2021.93007 |
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