RT-PCR將逆轉(zhuǎn)錄步驟和后續(xù)的PCR在一管內(nèi)進(jìn)行,。RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄步驟之后可以承接普通PCR、SYBR Green I法熒光定量PCR（RT-qPCR）和探針?lè)晒舛縋CR（RT-qPCR）,。

RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段,。RT-PCR技術(shù)靈敏而且用途廣泛，可用于檢測(cè)細(xì)胞中基因表達(dá)水平,，細(xì)胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作為模板的RNA可以是總RNA,、mRNA或體外轉(zhuǎn)錄的RNA產(chǎn)物。無(wú)論使用何種RNA，關(guān)鍵是確保RNA中無(wú)RNA酶和基因組DNA的污染,。

RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段,。RT-PCR技術(shù)靈敏而且用途廣泛，可用于檢測(cè)細(xì)胞中基因表達(dá)水平,，細(xì)胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列,。作為模板的RNA可以是總RNA,、mRNA或體外轉(zhuǎn)錄的RNA產(chǎn)物。,。RT-PCR用于對(duì)表達(dá)信息進(jìn)行檢測(cè)或定量。另外,，這項(xiàng)技術(shù)還可以用來(lái)檢測(cè)基因表達(dá)差異或不必構(gòu)建cDNA文庫(kù)克隆cDNA,。RT-PCR比其他包括Northern印跡,、RNase保護(hù)分析,、原位雜交及S1核酸酶分析在內(nèi)的RNA分析技術(shù)，更靈敏,，更易于操作,。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)可以使用逆轉(zhuǎn)錄酶,，以隨機(jī)引物、oligo(dT)或基因特異性的引物(GSP)起始,。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,，每一步都在最佳條件下進(jìn)行,。cDNA的合成首先在逆轉(zhuǎn)錄緩沖液中進(jìn)行,，然后取出1/10的反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行PCR,。在一步法RT-PCR中，逆轉(zhuǎn)錄和PCR在同時(shí)為逆轉(zhuǎn)錄和PCR優(yōu)化的條件下,，在一只管中順次進(jìn)行。

RT-PCR是檢測(cè)RNA模板或基因表達(dá)水平最敏感的技術(shù)之一,，一步法RT-PCR能克隆微量mRNA而不需要構(gòu)建cDNA文庫(kù),即cDNA合成與PCR反應(yīng)在同一buffer中進(jìn)行,，一步完成，省略了cDNA與PCR之間的過(guò)程,。兩步法RT-PCR：首先用反轉(zhuǎn)錄酶AMV、MULV或TthDNA聚合酶合成cDNA,，然后以cDNA為模板進(jìn)行PCR,。RT-PCR一步法與RT-PCR兩步法進(jìn)行比較,，顯示RT-PCR一步法：快速、簡(jiǎn)便,、敏感、減少污染機(jī)會(huì),，減少了mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu),。兩步法：同一管中同時(shí)擴(kuò)增兩個(gè)引物,，減少了一些人為的誤差，將RNA轉(zhuǎn)錄為cDNA,，易于保存。兩步法的費(fèi)用比一步法少,。