HEPES（4-羥乙基哌嗪乙磺酸） 分子式：C8H18N2O4SHEPES 它是一種兩性離子有機(jī)化學(xué)緩沖劑，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用,，同時(shí)它也是一種氫離子緩沖劑,，能較長(zhǎng)時(shí)間控制恒定的PH值范圍，在PH值為7.2-7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力。

好的HEPES緩沖液具有以下特征：

1,、pKa值介于6.0和8.0之間

2,、高溶解度

3、膜不透性

4,、對(duì)生化反應(yīng)影響有限

5,、極低的可見光和紫外線吸收

6、耐化學(xué)作用和酶解作用

7,、易于制備

HEPES廣泛用于多種生物化學(xué)反應(yīng),，并在某些細(xì)胞培養(yǎng)基中用作緩沖試劑，它最大的優(yōu)點(diǎn)是在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的PH值,。細(xì)胞培養(yǎng)基中的HEPES濃度范圍為10mM至25mM,注意HEPES不為細(xì)胞供給營(yíng)養(yǎng),，只有在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需要長(zhǎng)時(shí)間在CO2培養(yǎng)箱外處理細(xì)胞時(shí)，才將其加入培養(yǎng)基,，增強(qiáng)緩沖能力,。

HEPES的使用方法有兩種：

1、按照所需濃度直接加入到配置的培養(yǎng)溶液中,，過(guò)濾除菌,，每1000毫升培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES，溶解后用1N NaOH調(diào)PH至7.2,，過(guò)濾除菌后可使用,。此時(shí)HEPES的使用濃度為10mmol/L。

2,、配成100x貯存液(1mol/L),，取23.8gHEPES溶于90ml的雙蒸水中，用1NNaOH調(diào)PH至7.5-8.0,，然后用水定容至100ml,過(guò)濾除菌分小瓶裝,，4攝氏度至20攝氏度保存。使用前取99ml培養(yǎng)液加入1ml貯存液最終應(yīng)用濃度仍為10mmol/L,。