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應用血紅蛋白值矯正電化學檢測試紙技術(shù)方法的設計與驗證

 文進玲玉 2020-12-31

作者:吳岸峰
單位:廣州萬孚生物技術(shù)股份有限公司

【摘要】基于電化學的生化檢測已經(jīng)拓展到血紅蛋白及其他項目的聯(lián)檢領(lǐng)域。本文探討的方法可以直接讀取測試樣本的血紅蛋白值,,改進消除紅細胞壓積的影響,,從而矯正電化學檢測,有效提高試紙的結(jié)果準確性,。
【關(guān)鍵詞】血紅蛋白,;血糖;尿酸,;乳酸

一,、電化學檢測試紙現(xiàn)狀分析

當血液中有某些特殊成分存在時,會對電化學的測量產(chǎn)生不良影響,,導致檢測信號不準確,,使得患者無法察覺到血糖或乳酸等濃度的潛在危險。其中較為重要的一個影響參數(shù)是血液的血細胞比容,,即紅細胞壓積HCT,。

血液中的紅細胞壓積變化會造成電化學試紙測試的葡萄糖或者乳酸等的讀數(shù)出現(xiàn)差異。通常情況下,,高的紅細胞壓積會出現(xiàn)負偏差,,即高HCT值,讀出來的血糖或者乳酸的值會偏低,;而低HCT值,,出現(xiàn)正偏差,即計算出的分析物濃度偏高,。這種現(xiàn)象的原因主要在于,,在高HCT情況下,紅細胞可能會阻礙酶和電化學媒介體的反應,,降低化學溶解速率,,用于使化學反應物溶劑化物的血漿量比較低并且媒介體的擴散速度比較慢。這些因素會造成電化學過程中產(chǎn)生的電流比較小,,從而測量結(jié)果比預期的葡萄糖讀數(shù)偏低,。類似的,在低血細胞比容下,,可影響電化學反應的血紅細胞數(shù)量比預期的要少,,因而測得的電流也更大,。此外血樣的電阻也和血細胞比容相關(guān),這會影響電壓或電流測量,。

目前已經(jīng)采用多種方法降低或避免血細胞比容變化對血糖,、乳酸等造成的影響。例如,,測試試紙被設計成具有多個樣品中的紅細胞去除的篩目,,或者含有多種化合物或制劑,用以提高血紅細胞的粘度并減弱低血細胞比容對濃度測定的影響,。為了矯正血細胞比容,,其他測試條也可采用包括溶血劑和測定血紅蛋白蛋白濃度。

大多數(shù)測試的血紅蛋白值,,需要抽取靜脈血,;有少部分的廠家可以用光化學的辦法測試血紅蛋白值;但是儀器的價格比較貴或者需要定量采血,。一個項目的單個采血量大約在10ul,,對小孩子特別不方便操作,疼痛感也比較強,。大多數(shù)矯正的值,,有的測試用測試阻抗的方法測試紅細胞壓積,但是這個方法測試很難區(qū)分出來HCT在20%-30%的紅細胞壓積,。

本文提出的方法,,可以比較好的區(qū)分出比較低分紅細胞壓積,,并且可以有效測試血紅蛋白的值,。

二、方法的設計與建立

我們的試紙條,,改進電化學試紙的測試通道,,即設計的其中一個通道,用電化學測試血紅蛋白值,。另外一個通道可以測試葡萄糖或者乳酸,,膽固醇甘油三脂,尿酸,,甘油三酯,,ALT等。用第一個通道測試出來的血紅蛋白值矯正紅細胞壓積對電流的影響,。圖1是雙通道電化學試紙結(jié)構(gòu)的示意圖,。

血液中血紅蛋白和葡萄糖的電化學傳感器制作方法包含以下步驟:

1.首先,利用絲網(wǎng)印刷技術(shù)在基板上形成包含工作電極和參比電極的電極系統(tǒng),。其中參比電極用銀,,氯化銀為佳,,工作電極中,先印刷銀油墨,,后印刷碳油墨,,最后印刷絕緣油墨。工作區(qū)間由2個反應區(qū)間組成,,設計合適的反應面積,,保證測試重復性以及準確度比較高。

2.電路設計中,,試紙1含有葡萄糖對應的酶以及電子傳遞體,,以及合適的輔料等等,測試血糖或者乳酸等不同項目的電流值,。

試紙2含有溶血劑等配方,,可以測試血樣中的血紅蛋白值。采用精密度比較高的點樣機或者其他點液設備,,點到對應的區(qū)域里面,。然后過烘道以及后面雙面膠等處理。血糖和血紅蛋白值的干燥成膜處理,。

三,、方法的實驗驗證

我們利用實驗來證明在存在和不存在血紅蛋白情況下,此形態(tài)的血糖傳感器的性能,。用雷杜米特的血氣生化分析儀ABL800作為比對設備,,初始參考血樣信息為:HCT HB值為13,GLU 7=mol/l,,Lac =3mol/l,,UA=600 mol/l。同一個血樣配置成不同的HCT值,,再進行血糖(GLU),、乳酸(Lac)和尿酸(UA)的測定。

四,、驗證結(jié)論

采用本文提供的設計雙通道或多通道電化學測試試紙,,可以做到一次扎針后在較短的時間同時測試出多種分析物的含量。本論文用血紅蛋白值矯正血糖等值的電化學傳感器,,包括銀油墨,,碳油墨,絕緣油墨,,底板上有參比電極和工作電極,。底板上設置工作區(qū)域。血液測試區(qū)域外用絕緣油墨控制反應區(qū)域,。工作區(qū)域內(nèi),,反應試劑可以和血液中的膽固醇甘油三脂或者血糖乳酸反應,。試紙可以測試血紅蛋白值,從而可以消除電化學測試中經(jīng)常出現(xiàn)的結(jié)果值受到紅細胞壓積的影響的現(xiàn)象,。

參考文獻

[1].郭志謀, 劉歡, 陳劍,等. 血紅蛋白修飾粉末微電極的電化學行為及其在NO檢測中的應用[J]. 電化學, 2004, 10(4):404-408.

[2].王翔. 聯(lián)合血脂,、血糖、肝功能及血尿酸檢測在診斷老年脂肪肝患者中的價值[J]. 國際檢驗醫(yī)學雜志, 2017, 38(15):2040-2042.

[3].佚名. 糖尿病患者血糖,、尿酸和血脂水平的檢驗分析[J]. 國際檢驗醫(yī)學雜志, 2017, 38(17):2460-2462.

參考文獻略

注:本文來源于《臨床實驗室》雜志2020年第12期“回顧與發(fā)展”專題

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