【技術原理】

抗原抗體反應,，即抗原與抗體特異性結合的原理,，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶,、金屬離子,、同位素）顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位,、定性及相對定量,。

【實驗流程】

技術總結

 【常見問題】

1、無/弱染色

     烤片溫度過高,，推薦56℃-60℃1-2h,；

     一抗是否適用固定液和石蠟切片，使用濃度是否過低,，孵育是否時間過短等,。

2、非特異性背景染色

    是否滅活內(nèi)源性過氧化物酶,；

    孵育過程中干片,；

    抗原熱修復過度。

3,、染色過深

    一抗?jié)舛冗^高,；
           染色試濃度過高或孵育時間過長；
           染色劑濃度過高或孵育時間過長,。

【注意事項】

1,、使用3%過氧化氫溶液消除內(nèi)源性過氧化酶活性時，請勿孵育過長時間,，一般為5—10分鐘,；

2,、對于較易產(chǎn)生脫片的部分組織如皮膚、骨組織,、腦組織等盡量避免使用微波修復和高壓修復,，減少其脫片的風險；

3,、使用DAB顯色時,，顯色劑停留時間過長會造成染色過深，可根據(jù)實驗溫度及實驗結果適當調整染色時間,。