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中圖分類號(hào)：R781.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1004-4949（2013）03-00-01 口腔潰瘍?yōu)榭谇徽衬こ什欢ㄆ诨蛑芷谛栽诳谇徽衬と魏尾课怀霈F(xiàn)孤立或多發(fā)的口腔粘膜潰瘍,?；疾÷示涌谇火つげ≈祝静‰m不危及生命,，但潰瘍局部灼痛明顯,，妨礙飲食及言語，可不同程度地影響人們身心,、工作和生活質(zhì)量,，占用了大量有限的醫(yī)療資源。目前人們對(duì)于該病的病因及發(fā)病機(jī)制尚不明確,。本實(shí)驗(yàn)是通過半定量的方法,，觀察實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍大鼠HE染色切片病理情況、Masson膠原三色染色以及基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase-2,，9,，MMP-2、9）免疫組織化學(xué)染色等指標(biāo),，摸索口腔潰瘍的病理機(jī)制,，為今后的臨床研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 1 材料和方法 1.1 主要試劑 鹽酸利多卡因注射液,，規(guī)格0.1g/5ml,，山東華魯制藥有限公司。Masson三色染色試劑盒,，北京環(huán)宇金鷹科技有限公司,。免疫組化試劑盒（武漢博士德生物技術(shù)有限公司）。 1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠12只,，體重180-200g,，雌雄各半。 1.3 實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍動(dòng)物模型的制備 選取健康SD大鼠9只,，固定后腹腔注射0.1g/5ml鹽酸利多卡因注射液,，待大鼠麻醉后，牽拉打開其口角,，充分暴露頰粘膜,。將含有60%的冰醋酸的棉球分別平置于大鼠左右兩側(cè)口角約1mm處頰膜上，灼燒時(shí)間30s,，24h后肉眼即可見該處頰粘膜約3mm白色損害,。 1.4 HE染色 造模第2、4、6天隨機(jī)選取3只SD大鼠用頸部脫臼法處死,。用眼科剪剪下兩側(cè)頰粘膜,，修整后置入10%中性甲醛溶液中固定24h。后置入自動(dòng)組織脫水機(jī)中梯度酒精脫水,、二甲苯透明,、浸蠟、石蠟包埋,。經(jīng)組織切片（5μm）,、攤片、撈片,、烤片后,，脫蠟至水。蘇木精染色,、鹽酸分化,、流水沖洗后酒精脫水，入伊紅溶液染色,。最后梯度酒精脫水,、二甲苯透明、中性樹膠封片,，置于顯微鏡下觀察,。 1.5 Masson染色 組織切片常規(guī)脫蠟至水，按照試劑盒上推薦的步驟,，先將切片放入蘇木素溶液中染色,，酒精分化后水洗，用Masson復(fù)合染液染色5-10min,，酸洗分化后亮綠SF染色,，最后經(jīng)梯度酒精脫水、二甲苯透明,、中性樹膠封片等步驟后,，光鏡下觀察染色組織情況。 1.6 免疫組化法 采用免疫組化SP法,，按試劑盒說明書進(jìn)行染色,，以PBS代替一抗作為空白對(duì)照。即切片脫蠟至水后,，經(jīng)內(nèi)源性過氧化物酶滅活、抗原修復(fù),、血清封閉,、一抗4℃過夜，二抗37℃ 30min孵育后,，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液,，DAB/H2O2反應(yīng)染色,。蘇木素復(fù)染、常規(guī)脫水,、透明,、干燥、封片,。 2 結(jié)果 2.1 HE染色結(jié)果 正常組上皮層完整,，固有層僅有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍組與正常對(duì)照組相比,，造模第2天上皮層出現(xiàn)破潰區(qū),，固有層有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，滲出明顯,；第4天,，缺損區(qū)域不同程度縮小，固有層仍有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),；第6天,，有部分樣本上皮已恢復(fù)連續(xù)性，缺損未消失者,，上皮有大量纖維增生,。 2.2 Masson染色結(jié) 正常組染成藍(lán)色的膠原纖維比較完整，數(shù)量較多,，而實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍組第2天染成藍(lán)色的膠原纖維排列較紊亂,，纖維細(xì)而短，數(shù)量少,，直到第6天,，膠原排列仍紊亂，只是數(shù)量增多,。 2.3 免疫組化染色結(jié)果 兩組切片中基底膜附近細(xì)胞胞漿中均可見MMPs的表達(dá)（染色為黃色）,，只是實(shí)驗(yàn)性口腔潰瘍組染色更深，范圍更大,，特別在造模第2天,，表現(xiàn)尤為明顯，第4至6天,，染色范圍逐漸縮小,，顏色逐漸變淺。 3 討論 口腔潰瘍病損的病理變化早期表現(xiàn)為黏膜上皮細(xì)胞及細(xì)胞間水腫,，上皮內(nèi)及血管周圍有密集的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),；隨后上皮溶解、破潰、脫落,，形成潰瘍,。潰瘍表面有纖維素性滲出物形成的假膜或壞死組織覆蓋，固有層內(nèi)膠原纖維水腫變性,、均質(zhì)化或彎曲斷裂,、甚至破壞消失[1]?；|(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase,，MMPs）是一組在結(jié)構(gòu)上具有極大同源性、能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)（包括基質(zhì)中以及整合于質(zhì)膜中的各種膠原酶和彈性蛋白酶等）的蛋白內(nèi)肽酶的總稱,。根據(jù)作用底物以及片斷同源性,，將其分為5類，為膠原酶,、明膠酶,、基質(zhì)降解素、膜型MMP和其他類MMP[2],。MMPs參與許多正常生理過程,，如胚胎發(fā)育、器官形態(tài)發(fā)生,、骨重建,、傷口愈合、細(xì)胞凋亡等,，還參與炎癥,、心血管疾病、牙周病,、潰瘍,、肺氣腫、腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移等病理過程,。其中明膠酶,，包括MMP-2、9,，主要降解Ⅳ型膠原和層黏連蛋白（基底膜的骨架）,，前者作為屏障起到阻止炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和炎癥擴(kuò)散的作用。本實(shí)驗(yàn)Masson染色結(jié)果顯示口腔潰瘍的發(fā)生過程中確實(shí)有細(xì)胞外的基質(zhì)成分（膠原）和基底膜的降解,，其病理變化主要為非特異性炎癥,，且連續(xù)切片的免疫組化染色結(jié)果顯示基底膜附近和固有層均有MMPs的表達(dá)，與對(duì)照組相比,，染色更深,、范圍更廣,，據(jù)此可以推測(cè)MMP-2、9與口腔潰瘍時(shí)基底膜的降解關(guān)系密切,，與康媛媛[3， 4]等研究結(jié)果一致,。據(jù)此,，尋找、開發(fā)MMPs人工合成抑或天然的抑制劑,，有望在不久的將來預(yù)防口腔潰瘍的發(fā)生或者促進(jìn)其快速愈合,，減輕患者的痛苦。 參考文獻(xiàn) [1] 陳謙明,，周曾同.口腔黏膜病學(xué).人民衛(wèi)生出版社. [2] 施琳,，王關(guān)東.基質(zhì)金屬蛋白酶及其組織抑制物與口腔癌關(guān)系的研究進(jìn)展.口腔頜面外科雜志，2005. [3] 康媛媛,，張英.MMP-9在復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍中的表達(dá)及意義.實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志.2008. |
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