1. 六孔板每孔細(xì)胞中加入1ml Trizol，冰上放置5min,，槍頭吹打,。

2.  將各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中，加入氯仿0.2ml/管,，用力振搖15s,。15－30℃下孵育2-3min，離心（4℃,，12,000g,，15min）。

3.  離心后液體分為三層（上層－無色水樣層為RNA,，中層白色為DNA和底層紅色為蛋白質(zhì)）,，小心吸取上層無色液體移入一新的EP管中。

4. 加入等體積異丙醇,，0.4－0.5ml,，混勻，15-30℃下孵育10－30min,，離心（4℃,，12,，000g，10min）,。其中如果加入等體積異丙醇后,，置于試管架上用PE手套密封后，放于4℃冰箱中,，沉淀30min效果更好,。

5. 去上清，沉淀加入75％乙醇1ml,，漩渦振蕩30s,，離心（4℃，7,500g,，5min）,。

6.  小心去上清，管內(nèi)沉淀在超凈臺(tái)中鼓風(fēng)靜置干燥3-5min,。最好是用槍頭吸取上清,，盡量除去。

7. 加入20ul DEPC水溶解,，分裝5ul/管,，-70℃冰箱保存。

8. 細(xì)胞總RNA的鑒定：0.9-1.2％瓊脂糖電泳鑒定細(xì)胞總RNA,，觀察出現(xiàn)條帶及各條帶亮度,。紫外分光光度計(jì)測定：分別測定細(xì)胞總RNA在260nm和280nm處的光密度值(OD)，并計(jì)算RNA的含量和純度,。