◆干粉引物溶解稀釋方法:
收到引物后,,在開啟離心管蓋前在12000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心5分鐘,,以防開蓋時(shí)引物干粉散失,。引物保存在高濃度的狀況下比較穩(wěn)定,。如果對(duì)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性要求較高,,合成的OD數(shù)較大,建議分裝,,避免反復(fù)凍融,。引物一般配制成10-100pmol/ul(umol/l)。 三博遠(yuǎn)志的引物在出廠時(shí)都標(biāo)有1OD 相當(dāng)于多少umol 的計(jì)算結(jié)果,,進(jìn)行稀釋時(shí)的引物加水量可以按以下公式計(jì)算: 稀釋成100pmol/ul 1OD 需加水量(ul)=1OD相當(dāng)于umol 數(shù)×10000 例如,,您拿到的引物DNA合成報(bào)告單上標(biāo)有1OD≈0.0035umol ,包裝量是1OD/管,,如果您希望將引物濃度定為100umol/L,,那么只需用35ul無核酸酶的雙蒸水將1OD的引物干粉溶解即可。 ◆液體引物再稀釋可用下列公式: 稀釋引物要達(dá)到的濃度(pmol/ul或umol/l)=母液濃度(pmol/ul或umol/l)×汲取母液的體積(ul)÷(汲取母液的體積(ul)+加水量(ul)) 例如,,需要上引和下引共2微升,,稀釋上引物和下引物要達(dá)到的濃度均為5um/l,母液濃度均為100 um/l 那么,,對(duì)于上引物來說5 um/l=100 um/l(或pmol/ul)×汲取母液的體積(ul)÷2微升 汲取上引物母液的體積(ul)=0.1微升 對(duì)于下引物來說5 um/l=100 um/l(或pmol/ul)×汲取母液的體積(ul)÷2微升 汲取下引物母液的體積=0.1微升 需要的超純水為2-0.1-0.1=1.8微升
如果防止每次都再稀釋,,那么可以先把母液(上引和下引)稀釋成100微升,,上引和下引濃度均為5um/l,計(jì)算方法如下: 對(duì)于上引物來說 5 um/l=100 um/l(或pmol/ul)×汲取母液的體積(ul)÷100微升 汲取上引物母液的體積(ul)=5微升 對(duì)于下引物來說5 um/l=100 um/l(或pmol/ul)×汲取母液的體積(ul)÷100微升 汲取下引物母液的體積=5微升 需要的超純水為100微升-5微升-5微升=90微升
|
|