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其實(shí)引物稀釋是個(gè)很簡(jiǎn)單的問(wèn)題,，關(guān)鍵就是搞清楚單位 例如： 引物合成單中： 4.29nmol/OD ////// Volume for 100uM:42.9ul/OD 方法1 使用前面的nmol數(shù)計(jì)算： 如果想將引物稀釋為20pmol/ul,，則稀釋的體積為：4.29/20*1000=214ul 方法2 使用后面的ul計(jì)算 如果想將引物稀釋為20uM,，則稀釋的體積為：42.9*5=214ul 可見(jiàn)兩種方法的稀釋體積事一樣的,，但是為何最終的引物一個(gè)事uM一個(gè)是pmol/ul呢,？ 其實(shí)很簡(jiǎn)單，只要看清單位即可： 1uM＝1umol/L=1000000pmol/1000000ul=1pmol/ul 不用電腦來(lái)算吧,，口算都可以了,。合成引物的nmol數(shù)除以你想得到的引物濃度數(shù)，×1000就是你要加的H2O的量(μl),。比如引物干粉是9.3nmol,，需要稀釋成25pmol/μl，就用9.3/25=0.372 0.372×1000=372μl H2O,，OK搞定了! 合成引物的nmol數(shù)除以你想得到的引物濃度數(shù),，×1000就是你要加的H2O的量(μl),。確實(shí)是這樣的啊 推薦一個(gè)簡(jiǎn)單的公式， 加水量=引物的nmol數(shù)/2 x 100ul, 則你的引物濃為２０uM, 在編人員５０ul反應(yīng)體系中加1ul即可． 加水量=引物的nmol數(shù) x 10ul, 則你的引物濃為１００uM, 1OD約為33ug,，合成的引物會(huì)附有說(shuō)明書(shū),，上面寫(xiě)的有OD數(shù)值，MV,。 如果是2OD,，MV＝5000 質(zhì)量＝2*33=66ug 摩爾數(shù)=66/5000=0.0132umol 配制成100μM所需要加的水的量＝0.0132/100*10的6次方＝132ul 即配制成100μM所需要加的水的量＝OD數(shù)*33/MV×10000ul 一般先配成100uM作為儲(chǔ)存濃度，然后再由100uM稀釋至20uM或者10uM作為工作濃度,。 注意打開(kāi)管子前先離心,。 引物2： ？μg/μmol,2OD—>加水(2*33/,？)*20000=μl [（OD*33/M.W）*20000] ,，使?jié)舛葹?0pmol/ ul 用滅菌去離子水稀釋前，兩管先離心甩一下,，以防止開(kāi)蓋時(shí)引物粉末飛出,。加入滅菌去離子水后—>-20℃保存。 ,？ng/umol是在引物合成公司給你的引物時(shí)帶子里的兩張小條子寫(xiě)的多少ng/mol,，舉個(gè)例子，比如說(shuō)：引物1是7321ug/mol,2OD —>加水(2*33/7321)*20000=170.32μl [（OD*33/M.W）*20000],，使?jié)舛葹?0pmol/ ul（OD＝A260/A280 呵呵,，稀釋后以3ul分裝，表明是引物1還是引物2,，呵呵,，這是個(gè)很好的公式，記得用哈,，祝你試驗(yàn)成功 我看樓上的都加水稀釋?zhuān)@樣保存引物不會(huì)降解嗎？我們實(shí)驗(yàn)室基本都用0.1倍的TE稀釋或5毫摩爾的Tris稀釋,。最好稀釋成終濃度為100微摩爾保存,。 ############################################################## 摩爾數(shù)=質(zhì)量/分子量 摩爾濃度=摩爾數(shù)/體積 1M＝1mol/L 如：某藥物A分子量為500，欲得到200mM（0.2M）的A儲(chǔ)存藥液10ml（0.01L）,，其計(jì)算方法為： 0.2M*0.01L*500＝1（g） 即稱(chēng)取1g藥物A,，溶于10mL溶劑中，便得到200mM濃度的A液,。 將200mM藥液A稀釋為20mM,，2mM,，0.2mM，～ 各3.15mL（例如給24孔板加藥）方法為： 取0.35mL200mM A液+3.15mL培液 得3.5mL 20mM A液,； 取0.35mL20mM A液+3.15mL培液 得3.5mL 2mM A液,； 取0.35mL2mM A液+3.15mL培液 得3.5mL 0.2mM A液； 依次類(lèi)推～ 再如,，將200mM藥液A倍比稀釋為100mM,，50mM，25mM,，～ 各3.15mL（例如給24孔板加藥）方法為： 取3.15mL200mM A液+3.15mL培液 得6.3mL 100mM A液,； 取3.15mL100mM A液+3.15mL培液 得6.3mL 50mM A液； 取3.15mL50mM A液+3.15mL培液 得6.3mL 25mM A液,； 依此類(lèi)推～ 藥液稀釋需要仔細(xì)推算,，掌握好用量，熟練后就不是難事了^_^ 以上僅僅是舉幾個(gè)比較實(shí)用的例子,，具體實(shí)驗(yàn)中需要靈活應(yīng)用,。希望對(duì)樓主有所參考和幫助。 先配成較高濃度儲(chǔ)存液,，如配成10mL10uM（1M＝1mol/ L,，1M＝1000mM，1mM＝1000 uM,，1uM＝1000 nM）： 換算方法如下： 1、1摩爾（mol）=1000毫摩爾(mmol) 2,、1毫摩爾(mmol)=1000微摩爾(μmol) 3,、1微摩爾(μmol) = 1000納摩爾（nmol） 4、1納摩爾（nmol）=1000皮摩爾（pmol） 5,、1 mmol/L=1000 μmol/L=1000 000nmol/L |
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