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突變菌株分離和篩選方法
（1）,、隨機(jī)篩選
又稱(chēng)搖瓶篩選，該法主要是隨機(jī)挑選的平板菌落進(jìn)行搖瓶篩選,，做法是：將誘變處理后的菌體分離在瓊脂平板上,，培養(yǎng)后隨機(jī)挑選菌落，一個(gè)菌落移入一支斜面,，一個(gè)斜面的菌體接入一只三角瓶,，振蕩培養(yǎng)，根據(jù)測(cè)定產(chǎn)物活性,，決定取舍,。優(yōu)點(diǎn)是發(fā)酵過(guò)程的生產(chǎn)條件、生理?xiàng)l件與大規(guī)模生產(chǎn)條件相近,，可以模擬進(jìn)行,。
（2）、平板菌落預(yù)篩
A,、根據(jù)形態(tài)篩選突變株
部分微生物菌株經(jīng)過(guò)誘變處理后,，變異菌株的菌落形態(tài)與生理特性、生產(chǎn)性能變化有一定的相關(guān)性,。
B,、根據(jù)平板菌落生化反應(yīng)篩選變株
透明圈法、呈色圈法,、抑菌圈法,、渾濁圈法等。
C,、采用冷敏感菌篩選抗生素變株
主要用來(lái)篩選抗生素產(chǎn)生菌株,。冷敏菌：從人的病原菌中經(jīng)誘變分離出的，在20℃下不能生長(zhǎng),。篩選原理：將冷敏菌和誘變后的放線菌孢子懸浮液混合,，分離在同一培養(yǎng)基平板上，置于20℃培養(yǎng)3-4天,，抗生素產(chǎn)生菌不受干擾,，能正常形成菌落，冷敏菌不生長(zhǎng),。當(dāng)放線菌菌落成熟,，并且抗生素產(chǎn)量達(dá)高峰，將培養(yǎng)皿移至37℃培養(yǎng)18-24h,冷敏菌迅速生長(zhǎng)，而此時(shí)在抗生素產(chǎn)生菌落周?chē)睦涿艟蛏L(zhǎng)受到抑制而形成抑菌圈,。根據(jù)菌落直徑和抑菌圈直徑之比的有效值,，可以直接篩選出抗生素高產(chǎn)突變株。
D,、濃度梯度法
主要用來(lái)篩選抗生素產(chǎn)生菌株,。 原理：菌株產(chǎn)生抗生素水平受到它自身所產(chǎn)抗生素?cái)?shù)量的制約，耐受性越高,，抗生素產(chǎn)生能力也就越強(qiáng),。通常采用雙層法制濃度梯度平板，用涂布法接種,，培養(yǎng)后,，挑取高濃度抗生素區(qū)域的菌落，易于篩選到抗性變株,。
搖瓶液體培養(yǎng)
產(chǎn)物活性鑒定
搖瓶初篩階段測(cè)定產(chǎn)物的幾種簡(jiǎn)便方法,。
（1）、瓊脂平板活性圈法
該法是在特制的玻璃框瓊脂平板上進(jìn)行的,，以檢驗(yàn)菌或底物與一定量的瓊脂制成平板,，用專(zhuān)制的打孔器取出瓊脂塊，在留下的圓孔中加入發(fā)酵液,，或用圓濾紙片浸透發(fā)酵液直接覆于瓊脂平板上,，在適合溫度下培養(yǎng)一定時(shí)間，測(cè)量圓孔或?yàn)V紙片周?chē)纬傻囊志蛩馊?，根?jù)活性圈的大小挑選高產(chǎn)菌株,。
（2）、紙片法
隨著誘變代數(shù)的增加,，有效產(chǎn)物濃度不斷提高,，當(dāng)發(fā)酵液中產(chǎn)物濃度相當(dāng)高時(shí)，活性圈大小與產(chǎn)物濃度之間失去線性關(guān)系,，掩蓋了菌株的高產(chǎn)性能而被漏篩,，此時(shí)可采用紙片法：取直徑0.5cm圓紙片，滅菌后覆于瓊脂平板上,，準(zhǔn)確取發(fā)酵注1~2ul在濾紙片上,，培養(yǎng)20~25h，測(cè)量水解圈大小,。如果活性圈仍然很大（直徑15mm以上）,，則可將發(fā)酵液稀釋?zhuān)蛟黾拥孜餄舛群铜傊宓暮穸龋顾馊刂圃谝欢ǚ秶鷥?nèi),。
（3）,、瓊脂薄層紙片法
此法適合抗真菌抗生素和農(nóng)業(yè)抗生素野生菌的初篩和誘變菌株的初篩,，適合對(duì)大量菌株和多種產(chǎn)孢子的真菌、病源菌為對(duì)象的綜合篩選,。制備檢驗(yàn)菌的孢子懸液,，與真菌固體培養(yǎng)基混勻，傾入玻璃析上,，均勻攤平,，制成厚度約1mm的薄層瓊脂板，將濾紙片依次覆于薄層瓊脂板上,，加入1~2ul發(fā)酵液，上蓋一塊過(guò)的玻璃板,，放入底部有浸濕紗布的盤(pán)內(nèi),，以做便保濕，于適宜的溫度下培養(yǎng)3~4天,，觀察孢子萌發(fā),、菌絲形態(tài)，并測(cè)量抑菌圈大小,。
培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的調(diào)整
一個(gè)突變株由于基因突變,，失去生理特性的平衡，同時(shí)也因此降低了與原來(lái)環(huán)境條件的適應(yīng)能力,。由于這種環(huán)境因素的選擇作用,，不適應(yīng)的突變株優(yōu)良性狀不能表達(dá)，甚至被淘汰,。在實(shí)際工作中,，當(dāng)篩選到一個(gè)優(yōu)良菌株時(shí)，要調(diào)整培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件,，使突變株處于一個(gè)適應(yīng)的環(huán)境中得到充分表達(dá),。
突變株的特性研究與鑒定
研究菌種純度、遺傳穩(wěn)定性,、菌落形態(tài),、群體形態(tài)、生活能力,、產(chǎn)孢能力,、保藏培養(yǎng)基和保藏方法；研究碳氮源利用情況,、菌絲生長(zhǎng)速度,、菌絲量、發(fā)酵液粘度,；最適合接種量,、移種量,、通氣攪拌、溫度,、PH等,。從分子水平進(jìn)一步對(duì)突變株的生理生化特性加以鑒定。
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