1.1菌株的采集

實(shí)驗(yàn)室用菌種一是到國(guó)家法定機(jī)構(gòu)采購(gòu)，二是購(gòu)買(mǎi)商業(yè)派生菌種,，三是科研中菌種交流,。不管是哪種來(lái)源，均統(tǒng)一采集,。采集中嚴(yán)格按照規(guī)范執(zhí)行,。要求包裝可靠，采集迅速,，不泄漏不污染,。保證菌種合格和環(huán)境安全。采集中要有菌種傳代標(biāo)識(shí),。選擇有資質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)菌株的合格供應(yīng)商,，每批標(biāo)準(zhǔn)菌株必須附帶有供應(yīng)商的合格證或檢測(cè)報(bào)告或說(shuō)明書(shū)，來(lái)證明所采購(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株是合格的,。

1.2標(biāo)準(zhǔn)菌株和驗(yàn)收

實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)準(zhǔn)菌株,，首先應(yīng)進(jìn)行符合性感官檢查，記錄菌株號(hào)和標(biāo)準(zhǔn)菌株來(lái)源途徑信息,，確保溯源性清楚,。同時(shí)還應(yīng)記錄標(biāo)準(zhǔn)菌株名稱和數(shù)量、生產(chǎn)日期,、接收日期和有無(wú)破損等情況,。

1.3凍干標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活

1.3.1開(kāi)啟產(chǎn)品包裝：先用70%酒精棉擦拭外包裝,，再打開(kāi)使用。

1.3.2復(fù)活：選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件（根據(jù)菌種使用說(shuō)明書(shū),，見(jiàn)附錄）進(jìn)行復(fù)活,。菌種的首次活化最好是在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上，除非特殊情況或特別推薦,，一般不用液體培養(yǎng)基,。凍干菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代，從標(biāo)準(zhǔn)菌株保藏中心購(gòu)買(mǎi)的凍干標(biāo)準(zhǔn)菌株為第F0代,。

注：培養(yǎng)基后面的數(shù)字編號(hào)為廣東環(huán)凱微生物有限公司的產(chǎn)品編號(hào),，如需采購(gòu)，請(qǐng)聯(lián)系經(jīng)銷(xiāo)商或業(yè)務(wù)員,。上表提供了菌種傳代短期保存的方法,，供參考。

1.4工作菌株確認(rèn)方法及依據(jù)

用無(wú)菌接種環(huán)取上述培養(yǎng)物,，在相應(yīng)的培養(yǎng)基平板（營(yíng)養(yǎng)瓊脂,、大豆胰蛋白胨瓊脂）上或相應(yīng)的細(xì)菌鑒別平板（如伊紅美藍(lán)、麥康凱,、BP等上劃線分離單個(gè)菌落，置適宜條件下培養(yǎng)（若該類(lèi)微生物為厭氧菌,，則培養(yǎng)條件應(yīng)為厭氧條件）,。以同樣方法取真菌和酵母菌至SDA（薩布羅培養(yǎng)基）平板上或玫瑰紅鈉培養(yǎng)基平板上，23～28℃下培養(yǎng)7d,；培養(yǎng)后觀察是否具有典型的菌落狀態(tài),，然后挑取單一純菌落，進(jìn)行革蘭染色,、鏡檢,，觀察其染色特征及菌體形態(tài)以確定菌種。

1.5 污染處理

假如在該平板上發(fā)現(xiàn)有其他菌落生長(zhǎng),，則說(shuō)明操作有污染或菌種不純,。要將

該污染培養(yǎng)物做滅菌處理，尋找原因,，重新分離挑選純菌落,。

1.6菌種保存

所有菌種均由實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)人(雙人雙鎖)保存于專(zhuān)用冰箱或其它保存方式。要建立菌種登記臺(tái)帳,，詳細(xì)記錄菌種采集,、保管、制備,、使用,、處置情況,；每一種菌種一定要有檢測(cè)鑒定報(bào)告（具體的的鑒定方法見(jiàn)菌種質(zhì)量報(bào)告鑒定證書(shū)上的方法）；

具體菌種保存方法一般為：

將復(fù)蘇后肉湯與滅菌甘油按15%甘油比例（肉湯8.5mL+甘油1.5mL）混合,，-30 ℃凍存,，（可用2mL凍存管凍存多管），作為保藏儲(chǔ)備菌株F1代,，也可使用商品化的菌種保存管,。

1.7菌種的傳代

1.7.1標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)蘇：

① 菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，防止雜菌污染,。

② 每次使用和復(fù)蘇時(shí)只需將小珠在平板上滾動(dòng)或置肉湯中培養(yǎng),。

1.7.2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株每轉(zhuǎn)接一次須進(jìn)行確認(rèn)。（確認(rèn)方法一般為他們各自獨(dú)有的形態(tài),，在鑒別培養(yǎng)基上的形態(tài)）

1.7.3工作菌株轉(zhuǎn)接的方法：

①,、配制營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（溶血性弧菌加3%氯化鈉 ），121℃高壓滅菌15分鐘后分裝在試管內(nèi),，冷卻后備用,。

②、在無(wú)菌條件下,，用接種環(huán)挑取菌苔至新鮮試管上作“米”字形劃線接種,，放置在36℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)。

1.7.4工作菌株的使用

1.7.4.1內(nèi)部質(zhì)量控制：一個(gè)月一次陽(yáng)性對(duì)照,、培養(yǎng)基每批驗(yàn)收,；

1.7.4.2外部質(zhì)量控制：能力驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)室比對(duì),；

1.7.5工作菌株的期間核查

1.7.5.1期間核查的頻率：每半年對(duì)使用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行一次期間核查,。

1.7.5.2工作菌株期間核查的方法及依據(jù)：同工作菌株的確認(rèn)一樣。

1.7.5.3建立標(biāo)準(zhǔn)菌株期間核查記錄,。

1.8菌種的標(biāo)識(shí)和使用期限：

1.8.1標(biāo)識(shí)：菌種代數(shù)的計(jì)算為干粉菌種為第0代,，轉(zhuǎn)接一次加一代。具體標(biāo)識(shí)為：例單增李斯特氏菌第0代,，標(biāo)識(shí)為DZ-0,，第一代標(biāo)識(shí)為DZ-01第一代有12支，則DZ-01-01,、……,、DZ-01-12；并標(biāo)明日期：如2016.02.13這樣填寫(xiě),。

1.9 菌種的保藏

1.9.1將試管內(nèi)菌種放入冰箱中2～8℃冷藏保存,。

1.9.2將傳代并經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后的菌種放入冰箱中2～8℃保存。每支保存菌種需標(biāo)明菌名、標(biāo)準(zhǔn)編號(hào),、傳次,、傳代日期。

1.10菌種的銷(xiāo)毀

1.10.1菌種使用后或超過(guò)貯存期的應(yīng)進(jìn)行銷(xiāo)毀,。

1.10.2需銷(xiāo)毀的菌種,，應(yīng)用高壓蒸汽（121℃）滅菌30分鐘。

1.10.3滅菌后,，再進(jìn)行清洗和處理,。

1.10.4銷(xiāo)毀的菌種應(yīng)做好記錄。銷(xiāo)毀時(shí)由化驗(yàn)負(fù)責(zé)人監(jiān)督銷(xiāo)毀,，保管人員負(fù)責(zé)銷(xiāo)毀,。