核小體是由DNA和組蛋白形成的染色質(zhì)基本結(jié)構(gòu)單位,。每個(gè)核小體由146bp的DNA纏繞組蛋白八聚體近兩圈形成,。核小體由H2A、H2B、H3,、H4 四種組蛋白組成,，每種組蛋白各有兩個(gè)拷貝。核小體在 H1 和非組蛋白介導(dǎo)下進(jìn)一步壓縮形成染色質(zhì)纖維,。組蛋白的 N- 和 C-端尾部從核小體的中心向外延伸，大量氨基酸殘基就很容易被化學(xué)基團(tuán)所修飾,，如發(fā)生乙?；⒓谆?、磷酸化,、泛素化、瓜氨酸化修飾等過程,。脯氨酸順反異構(gòu)化使得組蛋白尾部發(fā)生構(gòu)象變化,。這些修飾可以破壞染色質(zhì)接觸，或影響非組蛋白招募到染色質(zhì),。已經(jīng)確定大量能夠催化添加或去除這些組蛋白修飾的酶,。組蛋白 H3 是研究得最多的組蛋白，大多數(shù)修飾存在于末端尾部,。

網(wǎng)絡(luò)研討會主題：

• 染色質(zhì)和 ChIP 簡介
• ChIP 實(shí)驗(yàn)方案
• 抗體選擇
• 疑難解答提示和實(shí)驗(yàn)優(yōu)化
• ChIP 資源

主講人簡介

Karen Halls 博士于 2007 年加入 Abcam 的技術(shù)支持團(tuán)隊(duì),，目前擔(dān)任技術(shù)支持部經(jīng)理一職。她在伯明翰大學(xué)取得了生物學(xué)理學(xué)學(xué)士學(xué)位,，之后在劍橋大學(xué)取得博士學(xué)位,。

Karen 在研究 SET 蛋白和新型組蛋白修飾的 Tony Kouzarides 教授實(shí)驗(yàn)室完成博士研究，并取得博士學(xué)位,。她致力于研究人類基因組測序項(xiàng)目,，具有豐富的 ChIP 實(shí)操經(jīng)驗(yàn)。

ChIP 原理簡介和疑難解答

?大家好,，歡迎各位參加 Abcam 的 ChIP 簡介在線講座,。我們對這次講座進(jìn)行了錄像，稍后大家可在 Abcam 博客上查看,。今天的主講人是我們的科學(xué)技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)經(jīng)理 Karen Halls 博士,。Karen 本科就讀于伯明翰大學(xué)獲，博士就讀于劍橋大學(xué),。她博士期間師從于Tony Kouzarides 教授,，研究方向是SET蛋白和新型組蛋白的修飾。Karen 曾從事于人類基因組測序項(xiàng)目,，具有豐富的 ChIP操作經(jīng)驗(yàn),。她于 2007 年加入 Abcam 科學(xué)技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)。今天與 Karen 一起進(jìn)行討論的還有我們新產(chǎn)品團(tuán)隊(duì)的 Miriam Ferrer。Miriam本科就讀于巴塞羅那大學(xué),，博士就讀于阿姆斯特丹自由大學(xué),。在博士期間，她的研究課題是利用Falconie anaemia細(xì)胞的順鉑敏感性進(jìn)行癌癥治療,。在博士后期間,，她在劍橋的 LMB 從事于 BRCA1研究，進(jìn)一步拓展了她在 DNA 修復(fù)領(lǐng)域的經(jīng)驗(yàn),。Miriam 于 2008 年加入 Abcam,。

和之前一樣，如果您在講座中有任何問題,，您可隨時(shí)通過屏幕右下方的 Q&A 面板提交問題,。您提交的問題會在本次講座最后的疑難解答環(huán)節(jié)進(jìn)行答復(fù)。現(xiàn)在,，我們有請 Karen 開始 ChIP 的在線講座,。

KH：謝謝，Lucy,。歡迎大家來到我們的 ChIP 在線講座,。感謝各位今天抽出時(shí)間來參與我們的講座，我希望你們通過本次講座獲得有用的信息,。本次講座將分為多個(gè)議題,。首先，我會簡單介紹染色質(zhì)和ChIP 技術(shù)的背景知識,。然后,，我會逐步講解實(shí)驗(yàn)步驟。同時(shí)我會詳細(xì)介紹 ChIP 如何選擇抗體,。接下來,，我會討論ChIP實(shí)驗(yàn)如何優(yōu)化以及常見問題的分析解決。最后,，Miriam 將詳細(xì)介紹實(shí)驗(yàn)方案資源?，F(xiàn)在我開始介紹染色質(zhì)和 ChIP如何應(yīng)用。染色質(zhì)的功能是包裝 DNA,，它可以在細(xì)胞內(nèi)強(qiáng)化 DNA,，協(xié)助細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂和減數(shù)分裂，幫助調(diào)控基因表達(dá),。真核生物的染色質(zhì)是 DNA,、RNA 以及蛋白質(zhì)的復(fù)合物。蛋白質(zhì)的主要成分是組蛋白,，而其他諸多染色體蛋白也會起到顯著作用,。

核小體是由DNA和組蛋白形成的染色質(zhì)基本結(jié)構(gòu)單位。每個(gè)核小體由146bp的DNA纏繞組蛋白八聚體近兩圈形成。核小體由H2A,、H2B,、H3、H4 四種組蛋白組成,，每種組蛋白各有兩個(gè)拷貝,。核小體在 H1 和非組蛋白介導(dǎo)下進(jìn)一步壓縮形成染色質(zhì)纖維。組蛋白的 N- 和 C-端尾部從核小體的中心向外延伸,，大量氨基酸殘基就很容易被化學(xué)基團(tuán)所修飾,，如發(fā)生乙酰化,、甲基化、磷酸化,、泛素化,、瓜氨酸化修飾等過程。脯氨酸順反異構(gòu)化使得組蛋白尾部發(fā)生構(gòu)象變化,。這些修飾可以破壞染色質(zhì)接觸,，或影響非組蛋白招募到染色質(zhì)。已經(jīng)確定大量能夠催化添加或去除這些組蛋白修飾的酶,。組蛋白 H3 是研究得最多的組蛋白,，大多數(shù)修飾存在于末端尾部。

ChIP 的原理很簡單,，通過對含有特異性抗原的染色質(zhì)片段進(jìn)行選擇性濃縮,，鑒定抗原結(jié)合的特異性 DNA。最常見的目的是分析修飾組蛋白或染色質(zhì)結(jié)合蛋白在基因組上的存在情況,。在體內(nèi)使用特異性抗體來確定基因組中一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)處相應(yīng)抗原的豐度,。利用抗體拉出目標(biāo)蛋白或修飾蛋白，確定其在基因組中的結(jié)合位點(diǎn),。接下來我將通過一些例子來進(jìn)行闡述,。通過 ChIP，我們可以比較不同位點(diǎn)的蛋白質(zhì)或修飾蛋白質(zhì)的富集程度,。在這個(gè)例子中,，我們分析了H3K3乙酰化組蛋白在一些已知活性及非活性位點(diǎn)富集程度,。如條形圖所示,，這個(gè)H3K3乙酰化組蛋白在所分析的活性基因位點(diǎn)處富集,。

還可利用 ChIP 分析特異位點(diǎn)蛋白質(zhì)或修飾蛋白結(jié)合情況,。這個(gè)例子中，利用 RNA 聚合酶 II 5號位絲氨酸磷酸化特異性抗體分析了γ 肌動蛋白基因位點(diǎn)處活性 RNA 聚合酶結(jié)合情況。RNA 聚合酶 II定位在 γ 肌動蛋白基因的 5' 端,，是這個(gè)是RNA 聚合酶 II結(jié)合的特異性位點(diǎn),。最后，ChIP 還能夠在一段時(shí)間內(nèi)對基因位點(diǎn)處的蛋白質(zhì)或修飾蛋白進(jìn)行定量,。這個(gè)例子中,，在可誘導(dǎo)的 pS2 啟動子上分析了瓜氨酸化的H3。用雌激素進(jìn)行進(jìn)一步誘導(dǎo),，每隔十分鐘取樣,，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞都用特異性抗體進(jìn)行獨(dú)立的 ChIP 實(shí)驗(yàn)。修飾的組蛋白在啟動子上富集程度周期性變化,，40 分鐘時(shí)瓜氨酸化H3組蛋白富集量最高,。ChIP 實(shí)驗(yàn)有兩種常用方法：自然 ChIP 和交聯(lián) ChIP。應(yīng)根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)或目的,、以及起始材料來進(jìn)行選擇,。兩種技術(shù)之間有些關(guān)鍵的區(qū)別。

在自然 ChIP 中,，蛋白質(zhì)沒有交聯(lián),，底物是天然染色質(zhì)。通過微球菌核酸酶消化實(shí)現(xiàn)片段化,，使用酶進(jìn)行消化就可以得到約 150對堿基對的單個(gè)核小體片段,。自然 ChIP 只適用于與染色質(zhì)穩(wěn)定結(jié)合的蛋白質(zhì)，通常只有組蛋白和修飾過的組蛋白符合這一條件,。在交聯(lián) ChIP 中,，通常使用甲醛可逆交聯(lián)劑使蛋白質(zhì)與 DNA 交聯(lián)。染色質(zhì)經(jīng)超聲處理而片段化,，產(chǎn)生 200 至 1,000 對堿基對的隨機(jī)片段,。由于蛋白質(zhì)是交聯(lián)的，可分析組蛋白,、修飾過的組蛋白以及染色質(zhì)結(jié)合因子,。交聯(lián)ChIP 是 Abcam 的標(biāo)準(zhǔn)化ChIP應(yīng)用抗體鑒定方法。自然 ChIP和交聯(lián)ChIP兩種技術(shù)各有利弊,。在自然 ChIP 中,，由于表位不受固定的影響，抗體特異性是可預(yù)見的,。因?yàn)榭贵w可以有效地結(jié)合到目標(biāo)抗原上,可以實(shí)現(xiàn)有效的免疫沉淀,。由于酶切消化可以使 DNA 片段化至核小體大小，約 175 堿基對,，分辨率更高,，目標(biāo)抗原的定位也更準(zhǔn)確,。

但是，自然 ChIP 只適用于組蛋白,，因?yàn)槿旧|(zhì)結(jié)合因子沒有緊密地連接到 DNA,，在樣品制備階段可能會丟失。酶切消化也會引起選擇性核酸酶消化,，因?yàn)槲⑶蚓怂崦笗蛴谝恍┗蚪M序列,，導(dǎo)致消化不均一。同時(shí)由于核小體沒有固定,，也可能發(fā)生核小體重排,。最后，因?yàn)橄嗷プ饔脹]有穩(wěn)定固化,，整個(gè)過程務(wù)必要小心謹(jǐn)慎,。交聯(lián) ChIP 非常適用于那些與 DNA 結(jié)合能力較弱或者間接結(jié)合的非組蛋白，因?yàn)榻宦?lián)會固定這些相互作用,。因?yàn)橄嗷プ饔梅€(wěn)定了,，交聯(lián)可與讓核小體重排降至最低，同時(shí)實(shí)驗(yàn)之間的差異性也會相應(yīng)減少,。對于酵母和其他不容易制備天然染色質(zhì)的生物體,，交聯(lián)ChIP 也是首選,。DNA 經(jīng)超聲處理而隨機(jī)片段化,。但是，抗原表位破壞可能導(dǎo)致的低效的抗體結(jié)合,，可能需要測試多種不同抗體,，找到最佳抗體。

瞬態(tài)相互作用被固定,，可能導(dǎo)致人為結(jié)果,。由于生成的染色質(zhì)片段更大，靶標(biāo)定位到更大的區(qū)域,，交聯(lián)ChIP 得到的靶標(biāo)定位分辨率更低,。接下來，我會講一下實(shí)驗(yàn)步驟和實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)以及實(shí)驗(yàn)要包含哪些對照,。ChIP 的實(shí)驗(yàn)步驟比較簡單明了,。如果要進(jìn)行交聯(lián)ChIP，需固定細(xì)胞使 DNA 和蛋白質(zhì)交聯(lián),。兩種技術(shù)中,，都要用裂解緩沖液制備單細(xì)胞懸浮液。然后,，分別通過微球菌核酸酶消化（N-ChIP）和超聲處理（X-ChIP）打碎染色質(zhì),。然后使用抗體對含靶標(biāo)染色質(zhì)片段進(jìn)行免疫沉淀,。隨后進(jìn)行 DNA 純化和分析，確定相對 Input DNA 的目標(biāo)富集區(qū)域,。如果進(jìn)行交聯(lián)ChIP,，第一步交聯(lián)可以穩(wěn)定蛋白質(zhì)/蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)/DNA 相互作用。組蛋白本身通常不需要交聯(lián),，但是如果目標(biāo)蛋白沒有特異性地結(jié)合到 DNA,，沒有交聯(lián)的話 ChIP 的效率會低一些。

交聯(lián)的目的是：將某個(gè)時(shí)間點(diǎn) 抗原與染色質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)相互作用固定住,。甲醛可以使蛋白質(zhì)/蛋白質(zhì)之間形成可逆的連接,，讓我們可以研究組蛋白和染色質(zhì)結(jié)合蛋白。如果染色質(zhì)沒有被固定,，那么結(jié)合在上面的蛋白很有可能丟失 ,。關(guān)于甲醛的工作濃度，如果是細(xì)胞培養(yǎng)夜我們用 0.75%甲醛,，如果是組織則用 1.5%甲醛,。對于細(xì)胞培養(yǎng)夜，我們將甲醛直接加入細(xì)胞中,，如果是組織,， 加入到解離組織后的細(xì)胞懸液中。固定時(shí)間范圍是 2-30 分鐘,，然后用冰置預(yù)冷的 PBS 清洗細(xì)胞,，最后用裂解緩沖液懸浮細(xì)胞。下一步是將染色質(zhì)片段化,。這一過程染色質(zhì)處于可溶狀態(tài),，同時(shí)我們還能確定檢測分辨率。分辨率就是指特定蛋白結(jié)合位點(diǎn)定位的準(zhǔn)確程度,，理想的片段大小介于 170 至 1,000 對堿基對之間,。片段化之前用裂解緩沖液制備單細(xì)胞懸浮液。如果進(jìn)行交聯(lián)ChIP,，染色質(zhì)經(jīng)超聲處理隨機(jī)片段化,，最佳片段大小介于 200 至 1,000 對堿基對之間。

超聲處理不宜過度,，如果過度核小體會從染色質(zhì)上解離,。為使解離的可能性降到最低，片段大小通常會比單個(gè)核小體稍微大一些,。如果進(jìn)行 自然ChIP,，使用微球菌核酸酶在 37 ℃ 下消化染色質(zhì)五分鐘，然后加入 EDTA 終止反應(yīng),。離心后上清中則包含更小的單個(gè)核小體片段,。用裂解緩沖液將沉淀物進(jìn)重懸后通過透析分離較大的片段,。自然ChIP 的優(yōu)勢在于我們可以分離單個(gè)核小體和寡聚核小體片段；也就是說,，我們可以將修飾過的組蛋白與核小體精確的結(jié)合在一起,。但操作起來有一定難度，要特別小心,，核小體在酶消化過程中可能發(fā)生重排,。這時(shí)候?qū)θ旧|(zhì)片段化條件進(jìn)行優(yōu)化就很有必要。下一步是進(jìn)行免疫沉淀,，純化含有靶標(biāo)的染色質(zhì)片段,。我們使用抗體來分離蛋白質(zhì)和 DNA 復(fù)合物。然后利用抗體結(jié)合固相基質(zhì)將整個(gè)復(fù)合物拉下來,。將片段化的染色質(zhì)樣品與靶標(biāo)的一抗一起孵育,，然后在 4 ℃ 下與抗體結(jié)合基質(zhì)旋轉(zhuǎn)孵育過夜?？贵w的使用量通常為 1 到 10 微克,。

與抗體結(jié)合的基質(zhì)通常是偶聯(lián)有蛋白 A 或蛋白 G 的瓊脂糖、瓊脂糖凝膠微珠或磁珠,。確切的基質(zhì)選擇取決于抗體的種類和亞型,。第二天，對免疫共沉淀 復(fù)合物進(jìn)行洗滌,，排除任何非特異性結(jié)合,。這里我們要設(shè)置 Input DNA，因?yàn)镮nput DNA代表了 免疫共沉淀中所用的染色質(zhì)的量,。下一步是從免疫沉淀復(fù)合物中純化 DNA,，量化靶標(biāo)所結(jié)合的位置,。如果樣品已交聯(lián),，那么就有必要對蛋白質(zhì)/蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)/DNA 進(jìn)行解交聯(lián)處理。這個(gè)步驟同樣包括 Input DNA解交聯(lián),，Input DNA代表了用來與抗體孵育的樣本中所含有的總?cè)旧|(zhì),。我們 一般使用含有 1% SDS 和 100 mM 碳酸氫鈉溶液將蛋白質(zhì)/DNA 抗體復(fù)合物從微珠上洗脫下來。如果細(xì)胞已交聯(lián),，那么洗脫的 復(fù)合物 會與蛋白酶 K,、核糖核酸酶 A、或氯化鈉在 65 ℃ 下孵育四到五小時(shí)解交聯(lián),。解交聯(lián)的影響因素很多,。如果是自然ChIP實(shí)驗(yàn)，無需進(jìn)行解交聯(lián),，但與蛋白酶 K 孵育有時(shí)可以提高 DNA 提取量,。最后用 PCR 純化試劑盒或苯酚氯仿提取純化 DNA,。

我們通過DNA 分析來確認(rèn)靶標(biāo)的富集程度或結(jié)合位置。富集程度通過結(jié)合 DNA 或免疫沉淀 DNA 與 Input DNA的比值來計(jì)算,。這是因?yàn)榘袠?biāo)的富集程度取決于多個(gè)因素,，例如抗原的可及性、抗體親和力,、 免疫共沉淀 條件,、起始材料或樣品量。因此,，在介紹的所有分析方法中,，總是用特異性抗體結(jié)合的 DNA 量與 Input DNA量相比即與起始樣品中 DNA 的總量相比。DNA 分析有三種關(guān)鍵方法：ChIP (PCR) ,，ChIP芯片和 ChIP測序?，F(xiàn)在我將詳細(xì)介紹這些方法。ChIP (PCR) 中,，用實(shí)時(shí)定量PCR 對分離的 DNA進(jìn)行定量,，通常是采用 TaqMan 或 SYBR Green 技術(shù)實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增，并通過測量熒光的變化來同步定量目標(biāo) DNA 分子,。ChIP（PCR)可以在多個(gè)樣品中分析指定區(qū)域,，與 ChIP芯片或 ChIP測序相比，這種方法更快,、更實(shí)惠,。熒光水平與目標(biāo) DNA 量成正比可以用來檢測抗體的結(jié)合，靶蛋白的存在,。

這個(gè)例子里,，U20S 細(xì)胞的 ChIP 中，我們使用了能夠檢測組蛋白 H3 9號位賴氨酸三甲基化 的特異性抗體,，貨號是 ab8898,。 我們用活性、非活性和異染色質(zhì)基因區(qū)域設(shè)計(jì)的特異性 DNA 引物,，以免疫沉淀DNA 和 Input DNA作為模板進(jìn)行PCR,。從而得到 Input 和 ChIP 樣品中目標(biāo) DNA 的實(shí)際量。該圖顯示了相對于 Input 的 DNA 量,， 我們在異染色質(zhì)基因中可以觀察到更多的 DNA擴(kuò)增,。這說明了組蛋白 H3 9號位賴氨酸三甲基化修飾的組蛋白在這些基因中富集。ChIP芯片采用了微陣列技術(shù),，為蛋白質(zhì)和修飾過的蛋白質(zhì)在全基因組定位提供了高分辨率,。通過將純化 的DNA 進(jìn)行熒光染料標(biāo)記。然后將熒光標(biāo)記 DNA 應(yīng)用于到陣列,，通過后續(xù)的圖像分析,，記錄每個(gè)基因位點(diǎn)上目標(biāo)蛋白相對于 Input 的富集程度,。

在下面這個(gè)例子中，帶有GFP 標(biāo)簽蛋白已經(jīng)定位在釀酒酵母微陣列中了,。我們在ChIP芯片技術(shù)中使用了貨號為ab290的GFP抗體,，得到的 DNA 應(yīng)用于酵母微陣列。GFP 抗體的樣品顯示為綠色,，沒有標(biāo)簽的對照顯示為紫色,。陣列中兩個(gè)特異性基因啟動子區(qū)域的 DNA 水平明顯增加，說明目標(biāo)蛋白在這些區(qū)域富集,。ChIP測序中,，將分離的 DNA 利用二代測序技術(shù)直接進(jìn)行測序，得到全基因組曲線,。從而知道抗原在基因組上的分布,。免疫沉淀的 DNA 比對到基因組中，幾天內(nèi)完成對大量 DNA 的測序,。這個(gè)例子中,，在 ChIP 中使用了5號位絲氨酸磷酸化RNA 聚合酶 II特異性抗體，直接對分離 DNA 進(jìn)行測序,。從圖上可以看到在兩個(gè)基因啟動子處 DNA 富集水平達(dá)到峰值,，說明 5號位絲氨酸磷酸化RNA 聚合酶 II 在這兩個(gè)啟動子處富集。這只是基因組上特定區(qū)域的截圖,，但利用 ChIP測序,，我們可以研究基因組中的任何區(qū)域。

在ChIP 實(shí)驗(yàn)中為了保證實(shí)驗(yàn)按預(yù)期進(jìn)行,，我們需要設(shè)置幾個(gè)對照,。陰性對照可以反映實(shí)驗(yàn)的背景。只使用微珠或使用帶有同型免疫球蛋白的微珠,。例如,，如果我們用的是目標(biāo)蛋白兔IgG 一抗，我們就用兔IgG做陰性對照,。我們ab27478兔 IgG,。陽性對照就是已知蛋白或修飾過的蛋白與基因組某區(qū)域結(jié)合,，陰性對照就是已知蛋白或修飾過的蛋白與基因組某區(qū)域不結(jié)合,。這應(yīng)當(dāng)從全基因組圖譜上進(jìn)行審查，或者設(shè)計(jì)特異性引物并用實(shí)時(shí) PCR 檢測,。這能告訴我們所觀察到的富集是否具有特異性,。有些抗體能產(chǎn)生非特異性富集，這可以通過陽性和陰性對照位點(diǎn)的信號來確定,。PCR中始終要設(shè)置不加模板的對照,，它會幫助我們排除污染的影響,，因?yàn)椴患幽０鍖φ罩胁粦?yīng)有擴(kuò)增。最后,，使用已知靶標(biāo)結(jié)合位點(diǎn)的陽性對照抗體,。利用PCR分析基因組中陽性靶標(biāo)結(jié)合的區(qū)域是否富集，這樣可以確保實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行,。

如果研究活性區(qū)域,，我們可以使用對四號位賴氨酸三甲基化H3組蛋白特異性的抗體，例如 ab8580,。它在轉(zhuǎn)錄活躍區(qū)域富集,。如果研究非活性區(qū)域，我們可以使用27號位賴氨酸三甲基化H3組蛋白抗體,，例如ab6002,。這兩只抗體我們都可以用來做陽性對照確保實(shí)驗(yàn)的每一步順利進(jìn)行，如果這些修飾過的組蛋白結(jié)合區(qū)域不是您感興趣的,，那么它們就不適和,，因此對照必須具有特異性。接下來我們通過四號位賴氨酸三甲基化H3組蛋白特異性的抗體ChIP結(jié)果來說明使用對照的方法,。黃色的是微珠的陰性對照,，它為我們提供背景水平，應(yīng)該比抗體的信號要低得多,。像 GAPDH,、LPL30 和 ALDOA等多種活性基因區(qū)域可以作為陽性對照，因?yàn)樵谶@些區(qū)域發(fā)現(xiàn)了四號位賴氨酸三甲基化H3組蛋白的結(jié)合,。像MYO-D,、SERPINA 和 AFM 等非活性基因區(qū)域可以作為陰性對照，因?yàn)樵谶@些區(qū)域沒有四號位賴氨酸三甲基化H3組蛋白的結(jié)合,。這里雖然沒有顯示不加模板對照,，但我們進(jìn)行了 PCR，結(jié)果沒有觀察到擴(kuò)增,。我們已經(jīng)知道ab8580抗體靶標(biāo)在活性基因區(qū)域富集,，因此，我們可以用它作為研究染色質(zhì)結(jié)合蛋白或其他修飾過的組蛋白陽性對照抗體,。

接下來,，我將討論如何選擇合適的抗體。ChIP 中,，抗體用于捕捉特異性 DNA 結(jié)合蛋白,，成功與否取決于抗體的質(zhì)量如何。有各種ChIP級別的抗體，接下來我會向大家介紹選擇合適抗體的一些竅門,。有些抗體即使它可有效應(yīng)用于 IP,，也可能無法有效應(yīng)用于 ChIP 。這主要是受交聯(lián)的影響,，因?yàn)榻宦?lián)可以使特異性表位能產(chǎn)生或丟失,。理想情況下，抗體應(yīng)當(dāng)進(jìn)行親和純化,，以避免交叉反應(yīng),。修飾過的組蛋白相關(guān)抗體應(yīng)通過WB測試與其他修飾的組蛋白交叉反應(yīng)。在這個(gè)例子中,，貨號為ab8898,，27號位賴氨酸三甲基化 H3組蛋白已經(jīng)用一系列多肽進(jìn)行了競爭實(shí)驗(yàn)測試，檢查其是否與其他修飾的組蛋白結(jié)合,。這個(gè)實(shí)驗(yàn)中,，所測試的大多數(shù)多肽的交叉反應(yīng)均處于低水平。與該抗體發(fā)生輕微的交叉反應(yīng)是9號位賴氨酸三甲基化修飾多肽,，這是符合預(yù)期的,，因?yàn)?K9 附近的氨基酸與 K27 附近的相同。我們也可以通過 ELISA 多肽陣列檢查交叉反應(yīng),。

在這個(gè)例子中,，我們對 ab8580 抗體進(jìn)行了不同位置修飾的H3 組蛋白多肽陣列測試其交叉反應(yīng)。在這個(gè)多肽陣列里有4號位,，9號位或27號位賴氨酸單雙三甲基化修飾組蛋白修飾多肽,。我們將每種抗體稀釋六個(gè)不同稀釋度同時(shí)在多肽陣列上做三個(gè)平行，平均結(jié)果后繪制成圖,。結(jié)果顯示 ab1342 與4號位賴氨酸三甲基化 H3組蛋的結(jié)合程度高,，說明這種抗體特異性地識別四號位三甲基化修飾的組蛋白。免疫沉淀,、免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)是 ChIP 成功的良好指標(biāo),。在這些技術(shù)中，抗體能在復(fù)雜實(shí)驗(yàn)環(huán)境下識別接近天然構(gòu)象的抗原表位,。蛋白質(zhì)印跡中,，抗原表位變性了，所以實(shí)驗(yàn)環(huán)境不同,，表位存在的方式也不同,。因此，如果抗體可有效應(yīng)用于 IP,、IHC 或 ICC,，它很可能也可應(yīng)用于 ChIP,。

那么多克隆抗體或單克隆抗體應(yīng)用于 ChIP 那種更好,？這還有爭議,。因?yàn)楦饔欣住６嗫寺】贵w含有識別靶標(biāo)的混合抗體群,，所以它在 ChIP 中起作用的可能性增加了,。因?yàn)槿绻粋€(gè)抗原表位被遮擋了，抗體群中的其他抗體會識別沒有被遮擋的抗原表位,，并與之結(jié)合,。這與單克隆抗體相反，單克隆抗體從單個(gè)克隆獲得,，只識別單個(gè)抗原表位,。如果該表位被改變或遮擋，那么抗體就不會與之結(jié)合,，抗體就不能起作用,。但是，單克隆抗體表現(xiàn)的批次間偏差更小,，因?yàn)樗诟髋沃凶R別的表位相同,。而多克隆抗體群在批次之間有差別，表位識別可能改變,。最后,，對于一些高質(zhì)量的抗體，選用單克隆還是多克隆抗體并不是選擇抗體的關(guān)鍵決定性因素,。要得到最優(yōu)結(jié)果,，條件優(yōu)化是比不可少的一個(gè)環(huán)節(jié)，在下一節(jié)我會指出需要特別注意的部分,。

甲醛用作交聯(lián)劑來固定蛋白質(zhì)/蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)/DNA 相互作用,。如果我們發(fā)現(xiàn)樣品固定的時(shí)間太長，我們需要要加入甘氨酸來終止交聯(lián),。固定時(shí)間范圍在 2-30 分鐘,，通常我們摸索條件時(shí)從10-15 分鐘開始進(jìn)行優(yōu)化。組織樣品可能需要的固定時(shí)間長一些,，因?yàn)闈B透水平要慢些,。交聯(lián)過度會導(dǎo)致抗體結(jié)合率下降，降低免疫沉淀效率,，因?yàn)榭乖杉靶越档土?。交?lián)過度還會導(dǎo)致靶蛋白結(jié)合率下降。交聯(lián)不充分則會導(dǎo)致蛋白質(zhì)解離,，因?yàn)?DNA 與蛋白質(zhì)之間沒有穩(wěn)定的連接,。最好以標(biāo)準(zhǔn)條件為起點(diǎn),，然后根據(jù)需要進(jìn)行優(yōu)化，在一個(gè)時(shí)間段內(nèi)用不同濃度的甲醛進(jìn)行優(yōu)化,。

優(yōu)化 DNA 片段化同樣也很重要,，最理想的片段大小是 150 至 1,000 對堿基對。超聲處理的條件受到泡沫和細(xì)胞密度的影響,，因?yàn)檫@會影響溶液中的能量轉(zhuǎn)移,。交聯(lián)影響溶液的密度。有些細(xì)胞類型和細(xì)胞系比其他類型更容易進(jìn)行超聲處理,，因此,，有必要針對所用的每種細(xì)胞類型優(yōu)化染色質(zhì)片段化，然后在重復(fù)所有結(jié)果時(shí)保持參數(shù)不變,。右手邊的這個(gè)例子中顯示了超聲處理不同的時(shí)間,。U2OS 細(xì)胞經(jīng)超聲處理的時(shí)間各為 5、10,、15 和 20 分鐘后進(jìn)行節(jié)交聯(lián),，純化DNA，瓊脂糖凝膠電泳,。隨著時(shí)間的遞增片段大小遞減,，最優(yōu)片段大小出現(xiàn)在 15 分鐘。在 20 分鐘時(shí),，在超聲處理過程中,，DNA 可能由于超聲處理過度而丟失了蛋白質(zhì)；這會導(dǎo)致核小體從 DNA 上脫離出來,。

同樣,，用微球菌核酸酶消化時(shí)，要優(yōu)化核酸酶使用濃度和孵育時(shí)間,。高濃度和長時(shí)間的消化可能會讓染色質(zhì)過度消化,，生成亞核小體和顆粒。在使用新的酶母液和樣品時(shí),，我們都需要優(yōu)化,，因?yàn)闂l件會有所不同。在使用抗體時(shí),，我們要確定每個(gè)抗體的最優(yōu)使用濃度,，以提高信噪比。通常在25 微克染色質(zhì)我們加入1 到 10 微克抗體,；我們可以從5 微克開始優(yōu)化,。在所示例子中，在 2 微克和 10 微克水平上測試了 貨號為ab12089 的抗 TBP 抗體,。TBP 定位活性基因區(qū)域,；使用 2 微克時(shí),，信號和背景相似，活性基因與非活性基因區(qū)域之間幾乎沒有區(qū)別,。但是,，使用 10 微克時(shí)，信號顯著增加,，尤其是活性基因區(qū)域,，因此在這些 ChIP 條件下,，應(yīng)使用 10 微克抗體,。

值得注意的是，每個(gè)用戶都要優(yōu)化抗體用量,，因?yàn)榭赡茉谄渌脩舻膶?shí)驗(yàn)條件下 2 微克就夠了,，沒有適用于每個(gè)人的標(biāo)準(zhǔn)用量。不同的抗體對其靶標(biāo)有不同的親和力,，因此,，我們可能需要在清洗步驟中對不同鹽濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)方案中,，使用含 150 mM 氯化鈉的緩沖液將抗體蛋白 DNA 復(fù)合物清洗三次,，然后使用含 500 mM 氯化鈉的更強(qiáng)效的清洗緩沖液清洗。使用強(qiáng)效清洗緩沖液時(shí)親和抗體可能會與目標(biāo)蛋白分離,，所以需要用相對較低鹽濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn),，以確保不影響特異性抗體結(jié)合。這是舉一個(gè)TBP 抗體,，貨號為ab818 的例子,。當(dāng)最終清洗液的鹽濃度為 500 mM 時(shí)，特異性抗體 ChIP 與只用微珠的對照之間的區(qū)別較低,，大約是六倍豐度,。

但是，將最終清洗液鹽濃度降低到 250 mM 時(shí),，特異性抗體結(jié)合率增加,，然而背景并沒有增加。我們應(yīng)盡可能地優(yōu)化清洗液中鹽離子濃度,，以得到高信噪比,，同時(shí)不影響特異性抗體結(jié)合。接下來,，我會重點(diǎn)說一些常見問題以及解決方案,。我們可能在只用微珠或使用同型免疫球蛋白對照中觀察到了高背景。這可能是蛋白 A 或 G 微珠有非特異性的結(jié)合,。我們可以通過預(yù)清洗步驟進(jìn)行改善,。我們將微珠加入到樣品中孵育一小時(shí),，然后在加入抗體前移除。這樣我們可以消除對微珠的任何非特異性結(jié)合,。ChIP 緩沖液也有可能被污染,，所以我們需要制備新鮮的裂解緩沖液和清洗液。有些蛋白 A 或 G 微珠會產(chǎn)生高背景,。我們可以嘗試不同的微珠,，使用在非特異性對照中能提供最清晰結(jié)果和低背景的微珠。我們可以考慮用磁珠代替瓊脂糖,、瓊脂糖凝膠微珠,，因?yàn)檫@可以降低結(jié)合到微珠的背景。

如果染色質(zhì)碎片太大,，大片區(qū)域中我們可能觀察到低分辨率,、高背景。在使用不同細(xì)胞時(shí)我們都要優(yōu)化 DNA 片段化,，因?yàn)槌曁幚砗兔阜跤龡l件都可能改變了,。如果DNA 片段大小超過 1,500 對堿基對。我們要考慮增加超聲處理或消化的時(shí)間,。如果你們觀察到所有樣品的信號低,，可能是染色質(zhì)片段可能太小了。這時(shí)需要減少超聲處理或消化的時(shí)間,，將染色質(zhì)片段大小增加到 500 對堿基對以上,。用超聲處理得到更小的片段可能會使核小體解離，因?yàn)楹诵◇w間 DNA 被消化了,。我們用Ripa裂解細(xì)胞通常會得到較好的裂解效果,。通常稍微提高裂解液中去污劑的濃度可能會改善信號。同時(shí)過度交聯(lián)能降低表位的可及性,，使得抗體結(jié)合率降低,。如果進(jìn)行交聯(lián)ChIP，我們需要減少甲醛交聯(lián)的時(shí)間,，用 PBS 清洗細(xì)胞,。有時(shí)我們還需要用甘氨酸來終止甲醛交聯(lián)。

對于 ChIP我們也需要優(yōu)化實(shí)驗(yàn)用的染色質(zhì)的量,。標(biāo)準(zhǔn)而言,，每次 IP 我們使用 25 微克染色質(zhì)，但這可能需要增加,。同時(shí)我們也要優(yōu)化抗體量,，我們可以從3 至 5 微克抗體開始優(yōu)化，但如果沒有觀察到信號或者觀察到的信號低,，我們就可以增加到 10 微克,。清洗可能減弱特異的抗體結(jié)合,；所以清洗緩沖液中所用的氯化鈉濃度不要超過 500 mM，過于強(qiáng)效的清洗緩沖液會消除特異性抗體結(jié)合,。通常我們使用含 250 mM 氯化鈉的最終清洗液,。有時(shí)候目標(biāo)可能沒有在目標(biāo)區(qū)域富集，所以我們要設(shè)置一個(gè)陽性對照抗體來確認(rèn)實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行,。我們也需要選擇合適的微珠,，如果使用了錯(cuò)誤的抗體親和微珠，抗體不會結(jié)合,。蛋白 A 和 G 是能以不同親和力結(jié)合多種免疫球蛋白的細(xì)菌蛋白,，所以有必要檢查其相容性。如果沒有同型結(jié)合偏好,，我們可以使用偶聯(lián)有蛋白 A 和蛋白 G 混合物的微珠,。

如果抗原表位不可及或者發(fā)生變化,，我們需要考慮更換抗體,。如果進(jìn)行的是交聯(lián)ChIP，可以試一下 自然ChIP,，因?yàn)楸砦辉谄涮烊恍问较率强杉暗?。如果進(jìn)行的是 N-ChIP，靶標(biāo)蛋白的 DNA 親和力可能較低,，或者不在組蛋白附近,。可能需要交聯(lián)來實(shí)現(xiàn)有效的 IP,。免疫沉淀 DNA 可能存在 PCR 擴(kuò)增問題,，你們可能看到 PCR 后所有樣品的信號增加，甚至包括不加模板對照,。這可能是由于PCR體系受到了污染,，我們需要重新配置新的體系。如果樣品中沒有 DNA 擴(kuò)增,，我們需要通過標(biāo)準(zhǔn)品和 Input DNA來確認(rèn)引物是否工作正常,，并針對過個(gè)位點(diǎn)設(shè)計(jì) PCR 引物?；蚪M的某些區(qū)域會比其他區(qū)域純化得更好,，有些核小體可能在酶片段化過程中發(fā)生重排。現(xiàn)在,，我把時(shí)間交給 Miriam,，她會進(jìn)一步介紹實(shí)驗(yàn)方案和我們的常見問題排除指南。

MF：謝謝,，Karen,。大家好,，我想利用這次機(jī)會向各位介紹下 Abcam 為表觀遺傳學(xué)研究提供的一些資源和產(chǎn)品，重點(diǎn)講講 ChIP,。大多數(shù)人可能都知道,，我們的“ChIP 入門指南手冊”對 ChIP 用戶來說都極具指導(dǎo)意義。它包含了來自頂尖研究人員（包括我們的內(nèi)部研發(fā)科學(xué)家）的建議和疑難問題解答,，對整個(gè)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行逐步指導(dǎo),。Karen 剛剛討論的有些主題也包括在本書中。最近,，我們加入了兩大新應(yīng)用,，它們享受我們的 Abpromise質(zhì)保。RIP 表示 RNA 免疫沉淀,，CLIP 表示紫外線交聯(lián)和免疫沉淀,。這些都是以抗體為基礎(chǔ)的技術(shù)，用來研究 RNA 和蛋白質(zhì)相互作用,。

如果您想了解這些應(yīng)用的詳情,，請?jiān)?abcam.com/protocols 查閱我們的應(yīng)用方案，或者在abcam.com/epigenetics 訪問我們的表觀遺傳學(xué)微型網(wǎng)站,。如果您對今天討論內(nèi)容或者 Abcam 產(chǎn)品有任何疑問,，您可以隨時(shí)聯(lián)系我們的科學(xué)支持團(tuán)隊(duì)。他們很高興為您解答任何問題,。如果您在美國,、加拿大或者南美洲，請聯(lián)系我們的美國團(tuán)隊(duì),。如果您在中國香港,、中國內(nèi)陸或亞洲，請聯(lián)系我們的中國團(tuán)隊(duì),。如果您在英國或歐洲,，請聯(lián)系我們的英國團(tuán)隊(duì)。如果您在日本,，請聯(lián)系我們的日本團(tuán)隊(duì),。我還想強(qiáng)調(diào)一下，我們有多語種支持,，所以請不要猶豫隨時(shí)聯(lián)系我們,。正如我剛剛提到的，abcam.com/epigenetics 是我們最新的表觀遺傳學(xué)微型網(wǎng)站,，這是一個(gè)包含遺傳學(xué)相關(guān)的所有主題一站式服務(wù)點(diǎn),。在這個(gè)微型網(wǎng)站，您可以看到表觀遺傳學(xué)相關(guān)產(chǎn)品、實(shí)驗(yàn)方案,、和即將舉行的會議的最新消息,。

如果您計(jì)劃大量使用某個(gè)產(chǎn)品，您可能需要批量購買,。批量購買能助您節(jié)省成本,，將實(shí)驗(yàn)中的易變性降至最低。如果您希望了解我們所有的批量購買選項(xiàng),，請發(fā)郵件至 [email protected] 聯(lián)系我們的銷售團(tuán)隊(duì)?，F(xiàn)在，我想集中講下 Abcam 新系列表觀遺傳學(xué)試劑盒,，EpiSeeker 系列,。這種試劑盒由研究人員精心開發(fā)而成，為您節(jié)省了做實(shí)驗(yàn)的時(shí)間,，因此您可把更多時(shí)間花在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析上,。我們的 EpiSeeker 系列包含了多種不同產(chǎn)品，今天我只講一下我們的 ChIP 試劑盒系列,。要指出的是,，我們所有的 EpiSeeker ChIP 試劑盒都用于交聯(lián) ChIP，不能用于自然 ChIP,。我們的一步式 ChIP 和植物 ChIP 試劑盒分別為哺乳動物 DNA 和植物 DNA 而優(yōu)化,。這些試劑盒不含有任何抗體，所以適用于任何靶標(biāo),。無論起始材料是細(xì)胞還是組織，EpiSeeker 系列也包含為甲基化或乙?；揎椊M蛋白優(yōu)化的試劑盒,。我們還有用于甲基化 DNA免疫沉淀的試劑盒，稍后我會稍微介紹下這種試劑盒,。關(guān)于這些試劑盒及 EpiSeeker 產(chǎn)品的更多詳情可以訪問這里出現(xiàn)的頁面鏈接　abcam.com/EpiSeeker,。

那么用EpiSeeker ChIP試劑盒代替?zhèn)鹘y(tǒng)的 ChIP 方法有哪些好處呢？首先,，反應(yīng)在 96 孔板上進(jìn)行,，所以很容易標(biāo)準(zhǔn)化，也容易以高通量的檢測方式進(jìn)行,。這種試劑盒只需要五小時(shí),，而使用傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方案則要耗費(fèi)兩天。除了交聯(lián)步驟,，它包含了 ChIP 反應(yīng)所需的所有試劑,。除了通用 ChIP 試劑盒，我們所有的 ChIP 試劑盒都包含針對檢測進(jìn)行了優(yōu)化預(yù)選ChIP 級抗體,。最后一點(diǎn),，同時(shí)也是非常重要的一點(diǎn),，一旦獲得 DNA 沉淀，就可以直接用于下游實(shí)驗(yàn),。正如剛剛提到的,，我們提供甲基化 DNA 免疫沉淀試劑盒。這兩個(gè)試劑盒包含了甲基化和羥甲基化 DNA 的特異性抗體,。這些修飾對基因差異表達(dá)發(fā)揮了重要作用,，因此，有合適的工具來研究它們的功能很重要,。我們的免疫沉淀試劑盒對于補(bǔ)充所有 DNA 甲基化實(shí)驗(yàn)也很有用,，例如亞硫酸氫鹽修飾試劑盒，無法區(qū)分 5-甲基胞嘧啶和 5-羥甲基胞嘧啶,。

最后,，我想感謝各位參與本次講座，我們現(xiàn)在為所有的講座參與者提供 EpiSeeker ChIP 試劑盒七五折的特別折扣,。而且,，如果您能給我們反饋這些 ChIP 試劑盒的數(shù)據(jù)，您還能以七五折的優(yōu)惠購買到 ChIP 級一抗,。本次講座后,，頁面會跳轉(zhuǎn)到我們的網(wǎng)站，您可以了解有關(guān)這次特別折扣的詳情,，也可下載本次講座的視頻,。我就不再耽誤了，將時(shí)間交給 Karen,，她已經(jīng)準(zhǔn)備好回答我們在本次講座中收到的問題了,，非常感謝各位的關(guān)注。

KH：謝謝,，Miriam,。在講座中我們收到了很多問題，現(xiàn)在我來回答其中一些問題,。所有沒有回答的問題會在講座后通過電子郵件回復(fù),。其中一個(gè)問題來自 Maria，她問：是否有必要用甘氨酸來猝滅甲醛,？是的,，沒有必要用甘氨酸來猝滅甲醛。但是如果我們用的組織樣品太厚了,，滲透很困難,，交聯(lián)時(shí)間可能要長一些，之后沒有辦法全部清洗干凈，用甘氨酸來猝滅就很有用了,。所以,，對于沒有使用細(xì)胞培養(yǎng)或細(xì)胞懸液的情況我們推薦用甘氨酸來淬滅。下一個(gè)問題來自 Aaron Dam,，問到微球菌核酸酶消化是否可用于 ChIP 交聯(lián),？是的，可以在交聯(lián)后用酶來消化染色質(zhì),。但由于蛋白質(zhì)和 DNA 會交聯(lián),，核酸酶滲透可能更難。我們需要進(jìn)行一些優(yōu)化來獲得合適條件,。

有個(gè)問題來自 Sallem,，問你會為 X-ChIP 推薦哪種超聲儀？根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn),，超聲波水浴更好,，因?yàn)樗鼈兙哂懈玫目芍貜?fù)性。與使用超聲探頭相比,，幾乎沒有泡沫,。超聲過程中要保持樣品低溫；我們可以采用冰浴,。為了使樣品保持低溫,，超聲處理時(shí)間要短，不要連續(xù)超聲處理,，中間要停一下,；超聲處理 30 秒，休息 30 秒,，間歇性地處理,。下一個(gè)問題來自 Jens：是否能用組織樣品進(jìn)行 ChIP？是的,，可以。我們需要將組織磨得很細(xì),，制成單細(xì)胞懸液,。就如我剛剛講的淬滅，可能還需要延長交聯(lián)時(shí)間,，或增加甲醛的用量,。在 Miriam 提到的實(shí)驗(yàn)方案書中詳細(xì)記錄了組織樣品制備方法。制備好樣品得到懸浮液后,，就可以繼續(xù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn) X-ChIP 實(shí)驗(yàn)方案了,。

那么，還有個(gè)問題來自 Nina，是關(guān)于 ChIP 中使用植物樣品的問題,，那有沒有可能也將其作為一種樣品類型,？是的，這也是可能的,。將幼苗作為樣品,，用杵和砂漿把材料磨碎，讓樣品分散,。使用一系列提取緩沖液進(jìn)行超聲處理,，按照標(biāo)準(zhǔn) ChIP 實(shí)驗(yàn)方案繼續(xù)操作。在我們的方案書中也有這種方案,，也提供植物材料　ChIP 試劑盒,，所以可以用它作為你的起始材料。下一個(gè)問題是關(guān)于對照,，來自 Jan,，如果一抗沒有可用的 IG 對照，舉個(gè)例子,，是很罕見的一抗,，應(yīng)該用什么對照？可以用 IG 對照,，也可以用只用微珠的對照,，這會提供檢測的背景。也可以用來自同種類的抗體或來源于親緣關(guān)系較遠(yuǎn)物種的同型抗體,。舉個(gè)例子,，樣品中不會出現(xiàn)的表達(dá)標(biāo)簽，只提供一些背景水平并作為對照,，所以這是你可以使用的,。

這個(gè)問題來自 Todd，問有可能使用全抗血清抗體嗎,？是的,，可以使用全抗血清抗體。但你要明白,，使用這些抗體會得到高背景,，因?yàn)樵谌芤褐杏蟹翘禺愋钥贵w。如果這是唯一的選擇,，還是值得一試,。你也可以考慮純化全抗血清，得到 IgG 片段,，這是更純的產(chǎn)物,。你可以使用蛋白 A 或蛋白 B 微珠,。這絕對值得試一試，如果沒有可選擇的其他 ChIP 抗體或親和純化抗體,。最后一個(gè)問題,，來自 Joe，問如果一個(gè)抗體能用于 ChIP,，那是不是也能用于 ChIP-seq,？是的，可以,。流程基本上一樣,，只是輸出和分析不同。所以,，如果一個(gè)抗體在 ChIP 中測試了,，適用于這種檢測，那么它也能提供適用于 ChIP-seq 的 DNA,，所以答案是肯定的,。我把時(shí)間交給 Lucy，再次感謝各位抽空參加今天的講座,，我們會盡快回復(fù)您提出的問題,。

LP：大家好，感謝 Karen,。我謹(jǐn)代表 Abcam 感謝各位參加本次講座,。希望大家能覺得有所收獲，對您的工作有所幫助,。沒有回答的問題,，我們的科學(xué)支持團(tuán)隊(duì)稍后會聯(lián)系您，答復(fù)您的問題,。剛剛進(jìn)行的講座可下載 PDF 版本,。當(dāng)您離開本次在線講座頁面時(shí)，會跳轉(zhuǎn)至一個(gè)網(wǎng)頁,，在那里你可以下載本次講座的 PDF,，還有針對所有講座參與者的 ChIP 試劑盒及抗體的獨(dú)家促銷信息。如果您有任何關(guān)于 ChIP 的問題或者需要科學(xué)咨詢,，就像之前提到的,，我們的科學(xué)支持團(tuán)隊(duì)很高興為您服務(wù)，請發(fā)送郵件至 [email protected],。如果您有任何有關(guān)在線講座的問題，請發(fā)郵件至 cn[email protected] 聯(lián)系 Abcam 活動團(tuán)隊(duì),。最后,，我們始終歡迎對我們在線講座的反饋,，非常感謝您能抽時(shí)間完成簡短的反饋調(diào)查，當(dāng)您從本次在線講座注銷時(shí),，屏幕上會彈出反饋調(diào)查問卷,。希望能在下一次在線講座中再次與您相約，再次感謝各位的參與,，祝各位研究順利,。