案例：一個(gè)兔單克隆中和抗體的誕生

兔源抗體以其高親和力和多樣性而熟知，這使其成為檢測分析中研究試劑的有用來源,。過去,，兔單克隆抗體是使用雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)；然而,，目前是由更強(qiáng)大的單B細(xì)胞培養(yǎng)和分子克隆方法驅(qū)動,。

（單B細(xì)胞兔單抗開發(fā)流程）

對于單B細(xì)胞抗體開發(fā)的理解，我們以一個(gè)客戶開發(fā)項(xiàng)目為案例來給大家展示參考看看：基于單B細(xì)胞抗體開發(fā)平臺,，研發(fā)一個(gè)阻斷型中和兔單抗的過程（由于隱私原因,，靶標(biāo)A相關(guān)詳細(xì)信息不作披露）。

第一階段：抗原制備

該項(xiàng)目抗原靶標(biāo)A為分泌型胞外蛋白,，有明確的受體蛋白B,，考慮后期對于重組蛋白A的活性質(zhì)控測試，以及后續(xù)中和抗體的阻斷檢測篩選需要，所以選擇真核哺乳細(xì)胞重組表達(dá)系統(tǒng),，同時(shí)分別表達(dá)靶標(biāo)A蛋白和其受體蛋白B,，并基于Elisa進(jìn)行互作檢測驗(yàn)證。

（靶標(biāo)A及受體B蛋白SDS-PAGE&Elisa互作檢測數(shù)據(jù)）

第二階段：免疫及陽性B細(xì)胞篩選

通過第一階段獲得的靶標(biāo)A抗原重組蛋白對兔子進(jìn)行免疫,，包括免疫途徑,、佐劑和加強(qiáng)免疫策略。在第三,、四次免疫后,，將對兔血清進(jìn)行分析（血清將基于抗原ELISA檢測進(jìn)行評估），以確定應(yīng)答動物,。由確定的陽性應(yīng)答兔子提供PBMC和脾臟來進(jìn)行B細(xì)胞的差異化篩選富集和培養(yǎng),，然后對培養(yǎng)上清進(jìn)行Elisa檢測驗(yàn)證，確定陽性B細(xì)胞克隆,，再進(jìn)行競爭性Elisa檢測篩選中和抗體克隆,。

（靶標(biāo)A陽性B細(xì)胞Elisa檢測及中和抗體競爭Elisa篩選部分?jǐn)?shù)據(jù)）

第三階段：陽性單B細(xì)胞抗體序列及結(jié)構(gòu)分析

針對二階段單B細(xì)胞培養(yǎng)上清檢測結(jié)果，挑選25個(gè)優(yōu)選中和抗體克隆完成抗體基因序列擴(kuò)增,，同時(shí)測序進(jìn)行分析,。

（靶標(biāo)A的25個(gè)陽性抗體可變區(qū)序列框架）

基于獲取的抗體可變區(qū)序列信息，構(gòu)建抗體結(jié)構(gòu)模型,，并預(yù)測抗體和靶標(biāo)A的結(jié)合模型,，基于靶標(biāo)A和其受體B的互作模型，并綜合階段3的檢測數(shù)據(jù),，選擇合適克隆,。

（左：靶標(biāo)A與其受體B互作模型；右：陽性克隆抗體與靶標(biāo)A的結(jié)合模型）

第四階段：抗體重組表達(dá),、鑒定

從25個(gè)優(yōu)選中和抗體克隆中挑選1個(gè)克隆進(jìn)行重組表達(dá),，及二次中和檢測驗(yàn)證。

（靶標(biāo)A的中和抗體重組表達(dá)檢測驗(yàn)證）

至此,，一個(gè)針對靶標(biāo)A的中和型重組兔單抗便完成開發(fā)及交付,。