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【答疑·解惑】微生物實驗基礎(chǔ)操作常見問答薈萃

 食品微生物檢測 2023-04-04 發(fā)布于山東

食品微生物檢測

匯聚行業(yè)網(wǎng)友見解,,傳遞微生物檢測知識,本次列出的問題均是微生物實驗基礎(chǔ)操作常見問題,,食品微生物檢測小編咨詢專家老師后匯編,,希望可以幫助朋友們對于實驗室日常檢測問題有個新的理解。大家感興趣的,、比較關(guān)注的問題,,也可以后臺留言或直接微我,我們一起交流探討,!



老師,,幫我看看這個是金葡萄球菌嗎?

可能是雜菌,,金葡菌沒那么大,,而且這個看起來沒有溶血環(huán),,金葡菌在血平板上有溶血環(huán),,不過最好染色鏡檢判斷。

請問下,,營養(yǎng)瓊脂可以做環(huán)境監(jiān)測嗎,?之前用大豆酪蛋白測,這個和大豆酪蛋白效果有差距嗎,?
有差距,,建議用用TSA,如果沒有法規(guī)要求,,NA也能拿來作為環(huán)境監(jiān)測的培養(yǎng)基,。
   請教一下霉菌培養(yǎng)皿長在培養(yǎng)基里面的是厭氧菌嗎
培養(yǎng)基里面的菌是需氧菌或者兼性厭氧菌,,空氣在瓊脂培養(yǎng)基中有一定溶解度,,能滿足一般菌生長需要,,但不能培養(yǎng)嚴(yán)格厭氧菌;霉菌是好氧菌,,長在里面的可能是酵母,,挑出來染色鏡檢
   固體樣品稀釋倍數(shù)遞進能取1ml到9ml里嗎?
固體樣品稀釋當(dāng)然可以取1ml到9ml,。課件里是指當(dāng)液體樣品原液取樣1mL之后, 要做第一個10倍梯度稀釋時要取25mL加入225mL,,后面的梯度就按1ml到9ml。
  一次性牙簽的大腸菌群和霉菌,,應(yīng)該如何
制樣檢測,?
按照木牙簽國家標(biāo)準(zhǔn)(LY/T 1159-2006)中的相關(guān)規(guī)定,依照GB 14934-2016消毒餐(飲)具 進行制樣,,即棉簽擦拭法50cm2,,按GB 4789.3-2016 大腸菌群計數(shù)MPN法檢測。按GB 4789.15-2016 霉菌和酵母計數(shù),,即稱量25g+225mL稀釋液均質(zhì)后進行霉菌檢測,。
    標(biāo)準(zhǔn)儲存菌株可以傳代儲存菌株,再由儲存菌株變成工作菌株,?
標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株和儲備菌株一樣,,都是后代,只不過一個是第一代,。所以標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株也是儲備菌株,,也一樣可以拿去當(dāng)工作菌株
    采樣用鑷子和無菌盤都是用什么辦法滅菌的呢?
滅菌條件是什么,?
金屬材質(zhì)等耐高溫器皿首先采用高溫干熱滅菌,,160℃,2h
菌種每次傳代都需要做鑒定嗎,?
每批次按照方法驗收一下,,可以加一些項目 比如純度檢查(革蘭氏染色鏡檢看菌體的一致性,以及劃線分離后看看平板上是一種形態(tài)的菌還是幾種(大部分細(xì)菌出現(xiàn)2種以上菌落形態(tài)可能是污染的,,也有少部分同1種菌出現(xiàn)不同的形態(tài)),。
    工作菌種保存的問題,一般冷凍到零下70℃能保存多久,?
工作菌株 1批次放斜面管里 可以保存1-2個月(冷藏就好了,,個別菌不能冷藏那就室溫保存)自己規(guī)定1個月還是2個月,到期銷毀,,做好記錄,;冷凍保存的甘油管 不要長期冷藏保存,否則菌會死掉  甘油管不適合冷藏,;-80℃下一般細(xì)菌能放5年沒問題的
     如何辨別培養(yǎng)基細(xì)小的點是不是細(xì)菌,?是不是延長培養(yǎng)時間菌落就一定會變大,?

依據(jù)樣品是什么而定,下次冰箱保存一個剛稀釋的樣品做對照,;TTC,,是化妝品安全技術(shù)規(guī)范方法允許的,識別菌落方便,。

看形狀看凸起:通常菌落呈現(xiàn)圓形規(guī)則外觀,、突出于培養(yǎng)基瓊脂平面的,而樣品渣滓不定形,、凹陷于瓊脂內(nèi),。

看增殖:作好標(biāo)記繼續(xù)培養(yǎng),菌落會有擴張,。培養(yǎng)前提前拍照,,與培養(yǎng)后的對照。接種時多接種一份平板,,放4℃冰箱冷藏而不培養(yǎng),,用于與培養(yǎng)后的平板對照。

染色鏡檢:挑取可疑物,,涂片子鏡檢觀察是否是菌,。

    速凍生制品(非即食的生制品)是否需要出廠檢測微生物?19295-2021中說非即食沒說要求檢測微生物,,速凍食品生產(chǎn)許可證審查細(xì)則要求出廠檢測微生物,?
菌落總數(shù)與大腸菌群指標(biāo)實際上屬于指示菌指標(biāo),即其是食品生產(chǎn)過程衛(wèi)生控制水平的表征,;所以無論出廠及型式檢驗項目中是否設(shè)定相應(yīng)指標(biāo),,均有必要作為監(jiān)測項目;出廠檢驗按照你執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)來操作,,生產(chǎn)許可證辦理按照審核細(xì)則來檢測,。
冷凍食品,需要怎么解凍呢,?
45℃以下不超過15min,或2-5℃以下不超過18小時解凍,。條件滿足可以。
       像PCA,、孟加拉紅這類的培養(yǎng)基需要加熱煮沸后再滅菌,只需要煮沸一次就可以了嗎,?VRBA也是只需要煮沸一次嗎,?

需要高壓鍋滅菌的PCA、孟加拉紅,,只需加熱幫助達到溶解,,形成均勻液體,,入鍋滅菌。而VRBA,,是煮沸滅菌,,看標(biāo)準(zhǔn)的配制方法,要保持沸騰2min ,。

      標(biāo)準(zhǔn)菌株的用途,?
1:制備人工污染樣品;2:驗收培養(yǎng)基,,培養(yǎng)基做成了平板,,有些是選擇性的,某種菌在上面有特殊的形態(tài),。所以菌選擇了培養(yǎng)基,,培養(yǎng)基也選擇了菌;3:培訓(xùn)新人方面,。讓其了解什么培養(yǎng)基上面菌是什么樣子的,;4:驗收生化試劑。和培養(yǎng)基差不多,,也是有特征反應(yīng),。5:實驗時候做質(zhì)量控制。已知菌在某培養(yǎng)基或生化上面“應(yīng)該”某種現(xiàn)象(概率),,做出來后(事件)是,,那就沒問題,做出來后(事件)現(xiàn)象不對,,那么就可以反推是不是哪里出了問題,,包括菌是不是原來的菌,大膽假設(shè)懷疑,,小心求證找到原因,。提高自己。
      微生物檢測各種菌,,是否要做不確定度和回收率,?
要做 依據(jù)RB/T 151-2016 食品微生物定量檢測的測量不確定度評估指南和SN/T 4091-2015 食品微生物學(xué)測量不確定度評估指南
      平板計數(shù)瓊脂和營養(yǎng)瓊脂都是用來測菌落的,是不是買哪一個都可以呀,?
要看你用的國標(biāo)是哪一版的,,不同的國標(biāo)用的培養(yǎng)基是不同的,?營養(yǎng)瓊脂和平板計數(shù)瓊脂營養(yǎng)成分不一樣,,你要看你們執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)后面有培養(yǎng)基的成分要求,,可以按照這個執(zhí)行要求來選擇培養(yǎng)基,一般4789.2都是用平板計數(shù)瓊脂
     食品車間的環(huán)境空氣沉降菌和食品接觸面的微生物指標(biāo),有人知道是參考哪個標(biāo)準(zhǔn)嗎,?
參考GB15975和GBT16294兩個標(biāo)準(zhǔn),,具體數(shù)值要通過檢測靜態(tài)和動態(tài)的數(shù)據(jù)后看看產(chǎn)品合格時其數(shù)值大概范圍是多少。
     培養(yǎng)基檢查和方法適用性檢查怎么體現(xiàn)在實驗記錄中,?
這兩個適用性不放在日常檢驗記錄里,,要單獨起草培養(yǎng)基適用性記錄和方法適用性方案和報告。
     一次性的接種環(huán)分區(qū)劃線每次分區(qū)都需更換一根嗎,?
不需要更換,,劃完一區(qū)后可以將接種環(huán)插進培養(yǎng)基以減少環(huán)上的菌,然后再繼續(xù)劃后面的區(qū),。
       單增李斯特菌的翻轉(zhuǎn)運動,,用1600倍能看到嗎?具體詳細(xì)做法怎么做,?
可以看到,。將細(xì)菌懸液滴于蓋玻片(四周先涂上少量凡士林)中央,將凹玻片的凹窩對準(zhǔn)蓋玻片中央的菌液蓋下,,翻轉(zhuǎn),,鏡檢。由于細(xì)菌不受蓋玻片的壓力影響,,所以此法常用于觀察區(qū)別細(xì)菌運動的方式,。100倍油鏡下觀察。
       菌落計數(shù)如結(jié)果是連續(xù)三個稀釋度的結(jié)果是351,、368,、36、29,、4,、5,如何計數(shù),?
取在30-300范圍內(nèi)的計數(shù),,本例(36+29)/2=32.5, 假設(shè),連續(xù)三個梯度分別是10倍,、100倍,、1000倍,結(jié)果報告為3300,。

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