冷凝集是全血細胞計數(shù)（簡稱為血常規(guī)）常見的一種現(xiàn)象,，特別常見于冬春季，嚴(yán)重者表現(xiàn)為EDTA抗凝血常規(guī)試管的管壁上紅細胞凝集呈細沙狀,，常采用37℃溫浴30min后再次上機檢測獲得結(jié)果,。隨著科學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展，許多新型技術(shù)應(yīng)用于全血細胞計數(shù)檢測中,，本文就血常規(guī)標(biāo)本冷凝集幾種常用處理方法進行比較分析,。

患兒，男,，5歲,，2022年3月30日就診，發(fā)熱5天,，咳嗽3天,。患兒5天前疑似受涼后出現(xiàn)發(fā)熱,，最高體溫40℃,，自行口服頭孢克洛顆粒、布洛芬等,，體溫反復(fù),，無明顯好轉(zhuǎn)，3天前咳嗽明顯,，陣咳無痰,。胸部攝片示：兩下肺滲出性病變考慮，擬“雙下支氣管肺炎”收住院,。

入院查體：體溫37.9℃,，心律112次/分，呼吸28次/分,，神志清楚，精神尚可,，呼吸平穩(wěn),，面色紅潤，扁桃體稍腫大,，雙肺呼吸音粗糙,，可聞及濕啰音,，腹軟，無壓痛及反跳痛,，肝脾肋下未觸及,，神經(jīng)系統(tǒng)檢查陰性。

輔助檢查：血常規(guī)WBC 14.89×10⁹/L,，NEUT 71.0%,，LYM 20%，RBC 1.11×10¹²/L（4.3-5.8）,，HCT 11.1%（34.0-43.0）,，HGB 118g/L，MCV 100.0fl（76.0-88.0）,，MCH 106.3pg（24.0-37.0）,，MCHC 1063g/L（310-355），hs-CRP 8.44mg/L（0.00-5.00）,，ESR 46mm/h（0-10）,，PCT 0.116μg/L（0.00-0.250）。

呼吸道病原譜：呼吸道合胞病毒（+）,、流感病毒B型（±）,、副流感病毒（±），肺炎支原體IgG(-),、肺炎支原體IgM（+）,。

血生化：總膽紅素6.3μmol/L（0-26），直接膽紅素3.7μmol/L（0-7.1）,，免疫球蛋白IgG 8.20g/L（7.00-16.00）,，IgM 1.4g/L（0.4-2.3），IgA 1.25g/L（0.7-4.0）,。

3月30日胸片檢查示：雙下肺野見大片狀模糊影,，左側(cè)肋膈角模糊。4月2日肺部CT提示：右肺中葉,、左上肺及兩肺下葉多發(fā)感染灶,，右肺中葉局部不張，左側(cè)胸腔積液,，局部組織壓迫不張,。臨床診斷為重癥肺炎、胸腔積液（左側(cè)）,、肺炎支原體感染,。

遵照國際血液學(xué)復(fù)檢專家組推薦的41條復(fù)檢規(guī)則《關(guān)于自動化全血細胞計數(shù)和WBC分群分析后行為的建議規(guī)則》^[1]第13條：MCHC≥參考范圍上限20g/L，需檢查標(biāo)本血漿狀況,、紅細胞聚集及球形紅細胞,。

因本案例MCHC異常增高,，達到1063g/L（原始檢查數(shù)據(jù)見圖1），故對原標(biāo)本外觀檢查未見異常,、并進行涂片及離心后血漿外觀檢查,，無脂血及溶血（涂片鏡檢見圖2）。聯(lián)合呼吸道病原譜及胸片,，肺部CT檢查,，本案例臨床診斷為肺炎支原體引起重癥肺炎，冷凝集素過高引起標(biāo)本冷凝集造成紅細胞聚集成團,。

圖1 血細胞計數(shù)儀原始數(shù)據(jù)

圖2 紅細胞凝集

Land于1913年首次對冷凝集素進行報道^[2],，冷凝集素是一種自身抗體，主要是免疫球蛋白M（IgM）完全抗體,，少數(shù)為IgG或IgＡ,，但其效價多＜1:16，通常不會導(dǎo)致自身血細胞的凝集,。

在某些病理情況下,，冷凝集素的效價可異常增高而引起比較嚴(yán)重的臨床癥狀，稱為冷凝集素綜合征,。當(dāng)血液溫度低于某一特定溫度（通常低于25℃,，在4℃反應(yīng)最為明顯）時，循環(huán)中冷凝集素就會與血細胞抗原結(jié)合,，促使RBC發(fā)生可逆性凝集,，阻塞微循環(huán)而使患者出現(xiàn)發(fā)紺，嚴(yán)重者發(fā)生自身免疫性溶血,，當(dāng)升溫至37℃時,，凝集消失。

主要繼發(fā)于支原體肺炎,、傳染性單核細胞增多癥,、慢性肝炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡,、慢性淋巴細胞白血病及骨髓瘤等,。甚至某些患者在冷環(huán)境下可表現(xiàn)鼻尖、口唇,、耳廓,、手指及足趾發(fā)紺，加溫后消失,，可出現(xiàn)雷諾現(xiàn)象,。

Finland等提出了在37℃溫浴作為一種消除細胞計數(shù)中冷凝集素干擾的方法。近些年來也提出了許多其他方法，如血漿置換,、預(yù)稀釋以及標(biāo)本與試劑雙重溫浴等方法，37℃溫浴法仍是最廣泛的方法之一^[3],。

但是在臨床實際工作中遇到冷凝集素效價較高的標(biāo)本時,，37℃溫浴法并不能完全消除干擾。解鴻翔等^[3],，孫秋瑾等^[4]研究均發(fā)現(xiàn)：37℃溫浴不同時間后,，RBC、HCT,、MCH,、MCHC均得到明顯改善，但鏡檢仍有紅細胞聚集成團現(xiàn)象,，41℃溫浴30min后,，RBC明顯升高，HCT,、MCH和MCHC亦趨于正常,，鏡檢可見RBC分布均勻。

在遇到冷凝集素效價較高的標(biāo)本時,，預(yù)稀釋法也不能完全消除標(biāo)本干擾,，稀釋還會增加檢驗數(shù)據(jù)隨機誤差；標(biāo)本與試劑雙重溫浴法既溫浴標(biāo)本,，還要溫浴試劑,，又要排去儀器內(nèi)原有試劑，檢測空白標(biāo)本,，操作繁瑣,，耽誤時間。

血漿置換法雖然能對紅細胞參數(shù)很好地修正作用,，但會引起白細胞與血小板損失,，且多次置換丟失現(xiàn)象更嚴(yán)重。對于含有高效價冷凝集素的血常規(guī)標(biāo)本,，如何獲得更加真實的檢測結(jié)果仍是值得探究的問題,。

王鑫等^[2]研究發(fā)現(xiàn)：SYSMEX XN9100血液分析儀網(wǎng)織紅（RET）通道研究參數(shù)——激光散射法紅細胞計數(shù)（RBC-O）在處理冷凝集標(biāo)本中具有良好的應(yīng)用價值。本案例啟用網(wǎng)織紅通道進行RBC-O檢測,，結(jié)果顯示：RBC 3.93×10¹²/L（4.3-5.8）,，HCT 35.4%（34.0-43.0），HGB 118g/L,，MCV 90.0fl（76.0-88.0）,，MCH 30.0pg（24.0-37.0），MCHC 333g/L（310-355）,。

電阻抗法血細胞計數(shù)原理：血細胞相對于等滲電解質(zhì)溶液為不良導(dǎo)體,，其電阻大于等體積的電解質(zhì)溶液,，當(dāng)血細胞通過血細胞分析儀計數(shù)小孔時，可造成電流回路的電阻值瞬間增大,，產(chǎn)生脈沖峰,，脈沖數(shù)量和大小反映細胞數(shù)量和體積。

理論上是希望細胞一個個地通過寶石微孔,，紅,、白細胞的直徑一般是7~15μm，單核細胞也只有20μm左右,，而寶石微孔的孔徑卻為100μm,，實際上可能會存在兩個、三個甚至更多細胞,、一同或前后尾隨進入小孔,，但只能產(chǎn)生一個信號脈沖，使計數(shù)有所丟失,。由于冷凝集標(biāo)本在電阻抗方法血液分析儀上檢測時,，大量聚集的RBC通過計數(shù)小孔常被認(rèn)為是大紅細胞，或不計入有效體積紅細胞,，進而引起RBC總數(shù)嚴(yán)重減少,。

SYSMEX XN9000血液分析儀網(wǎng)織紅通道有40℃液體加熱器硬件的特性，因此其測出的研究參數(shù)RBC-O可以幫助排除大部分冷凝集干擾,，也可將RET通道的另一個研究參數(shù)HGB-O（網(wǎng)織通道血紅蛋白）作為判斷條件,，RET通道的HGB-O與正常HGB無明顯差別（CV<3.5%），RBC-O結(jié)果可直接采用^[2],。本案例運用RET通道研究性參數(shù)RBC-O獲得血常規(guī)紅細胞計數(shù)結(jié)果較為滿意,。

現(xiàn)有血液分析儀基本上都是以電阻抗法進行血細胞計數(shù)為基礎(chǔ)，綜合運用了流式細胞術(shù),、鞘流,、激光、化學(xué)染色等等技術(shù),，對RBC,、PLT、WBC及分類等計數(shù)和分析,，除了常規(guī)獲得上述參數(shù)外,，還有許多研究參數(shù)，比如本文RBC-O,，還有光學(xué)法血小板（PLT-O）,、未成熟粒細胞（IG）、有核紅細胞（NRBC）、網(wǎng)織紅細胞血紅蛋白量（RET-He）等等在臨床相關(guān)疾病診治中具有重要意義,。本文RBC-O較37℃溫浴,、41℃溫浴、血漿置換,、標(biāo)本試劑雙重溫浴四種處理方式減少了許多操作,，所獲得的研究參數(shù)可直接使用，值得臨床借鑒和推廣,。

參考文獻

[1]尚紅，王毓三,，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].第四版.北京：人民衛(wèi)生出版社,，2015,17.

[2]王鑫，李建英,，陳倩,，等.兩種全血細胞分析儀研究參數(shù)在冷凝集標(biāo)本處理中的應(yīng)用價值[J].中國醫(yī)學(xué)裝備，2020,17（11）：42-45.

[3]解鴻翔,，沈燕,，龐珍珍，等.41℃溫浴對高效價冷凝集素樣本血常規(guī)檢測結(jié)果的影響[J].中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報,，2021,43（4）：507-512.

[4]孫秋瑾,，王宇，鐘璐.冷凝集素干擾血細胞分析結(jié)果水浴前后結(jié)果均失真研究[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,，2019,16（5）：613-617.