|
導(dǎo)讀： 眾所周知,，免疫組化檢測(cè)及質(zhì)控“沒(méi)那么簡(jiǎn)單”,；本期請(qǐng)看CD30表達(dá)評(píng)估中的陷阱及相關(guān)質(zhì)控問(wèn)題,。 CD30表達(dá)評(píng)估中的陷阱 01檢測(cè)前問(wèn)題需要注意的是，免疫組化結(jié)果取決于檢測(cè)前組織處理和檢測(cè)所用方法,。就檢測(cè)前的問(wèn)題來(lái)說(shuō),，手術(shù)過(guò)程或組織取材過(guò)程可能會(huì)造成細(xì)胞被擠壓，此時(shí)常見(jiàn)與所用抗體無(wú)關(guān)的非特異性著色,。標(biāo)本因運(yùn)送延遲,、固定液不足、固定時(shí)間不足,、組織較大等也可導(dǎo)致固定欠佳,。不過(guò)，過(guò)度固定可導(dǎo)致色素沉積并干擾抗原修復(fù),。用B5固定液及Zenker固定液也會(huì)影響對(duì)CD30著色的評(píng)估,。 02檢測(cè)問(wèn)題 從方法學(xué)來(lái)說(shuō)，免疫組化檢測(cè)出現(xiàn)問(wèn)題的可能因素有：對(duì)染色模式不了解,、陽(yáng)性及陰性對(duì)照的應(yīng)用不合理,、所用試劑或設(shè)備改變、所用抗體覆蓋面不足,、所用試劑過(guò)期等,。不過(guò)，本文原作者表示,，針對(duì)CD30的檢測(cè)并無(wú)標(biāo)準(zhǔn)化校對(duì)品,、無(wú)標(biāo)準(zhǔn)化外部驗(yàn)證方案，病理醫(yī)師也深受其害,；而這樣的標(biāo)準(zhǔn)化會(huì)有助于實(shí)驗(yàn)室校正其CD30免疫組化步驟,，并提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。類似的,，目前也沒(méi)有可追溯至關(guān)鍵臨床結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)化參照組織,。這些問(wèn)題都妨礙了CD30免疫組化的標(biāo)準(zhǔn)化。值得慶幸的是,，對(duì)于諸如間變性大細(xì)胞淋巴瘤和經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤這樣的病種來(lái)說(shuō),，CD30表達(dá)的水平較高，由此可以讓實(shí)驗(yàn)室在相關(guān)檢測(cè)性能方面達(dá)到極為接近的程度,。 影響免疫組化結(jié)果的技術(shù)因素更是非常多,。最常見(jiàn)技術(shù)問(wèn)題與組織處理和抗原修復(fù)有關(guān)。不過(guò),，其他比較重要（且常被忽視）的問(wèn)題還有脫鈣對(duì)抗原的影響,、內(nèi)源酶（過(guò)氧化物酶）活性、親和素與內(nèi)源性生物素的不恰當(dāng)結(jié)合,、CD30抗體不同克隆及顯色劑,、檢測(cè)系統(tǒng)的差異等,。實(shí)驗(yàn)室對(duì)上述問(wèn)題的處理一定會(huì)影響免疫組化染色質(zhì)量、并最終影響診斷的準(zhǔn)確性,。盡管自動(dòng)染色和標(biāo)準(zhǔn)化組織處理已成為免疫組化檢測(cè)中的常規(guī),，但臨床實(shí)驗(yàn)室必須考慮到相關(guān)局限性并理解,，且對(duì)免疫組化相關(guān)問(wèn)題進(jìn)行驗(yàn)證,，以確保相關(guān)結(jié)果可靠。 實(shí)驗(yàn)室免疫組化檢測(cè)中所用抗體大部分是分析物特異性試劑（analyte-specific reagents）,，屬于美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局規(guī)定為1類體外診斷（in vitro diagnostic,，IVD）試劑。另一方面,，2類或3類體外診斷用試劑盒或系統(tǒng),，則需使用的實(shí)驗(yàn)室按照制造商設(shè)計(jì)的方法精確、精準(zhǔn)的進(jìn)行相關(guān)檢測(cè),。CD30抗體克隆號(hào)及生產(chǎn)商眾多,，具體可能也會(huì)影響相關(guān)檢測(cè)的結(jié)果。由于CD30免疫組化檢測(cè)的結(jié)果可能對(duì)患者的相應(yīng)靶向治療直接產(chǎn)生影響,，因此如果相關(guān)檢測(cè)無(wú)法做到最優(yōu)化,，也要考慮必要時(shí)更換抗體。 解讀問(wèn)題免疫組化染色結(jié)果的解讀,，主要取決于組織處理及所用染色方法,；結(jié)果解讀中需要考慮的其他問(wèn)題還有： 1、擠壓的細(xì)胞常出現(xiàn)非特異性著色,； 2,、壞死和凋亡的細(xì)胞常因氧化酶的存在而有假陽(yáng)性著色； 3,、組織固定不均常影響著色并導(dǎo)致同一組織切片中著色的性質(zhì)和著色數(shù)量之間有差異,； 4、同一患者的蕈樣肉芽腫,，不同病變之間CD30的表達(dá)可能有差異,，甚至同一病變本身也可能存在CD30的表達(dá)差異； 5,、不同的專業(yè)病理醫(yī)師之間對(duì)CD30表達(dá)的解讀也會(huì)有差異,。有研究表明，蕈樣肉芽腫和Sezary綜合征病例中,，43%的會(huì)存在CD30解讀的差異,。 病理醫(yī)師的肉眼評(píng)估本就會(huì)有差異，制定相關(guān)病例的評(píng)估指南有助于將這一問(wèn)題最小化,，如具體規(guī)定評(píng)估的細(xì)胞類型（是腫瘤細(xì)胞,、還是所有細(xì)胞）,、相關(guān)比例（以10%為界）、可以視為陽(yáng)性的著色模式,。不過(guò),，即使這樣做，評(píng)分一致性也仍然存在問(wèn)題,。更為激進(jìn)的,，以后可以考慮圖像信息學(xué)技術(shù)上的蛋白定量分析。 CD30的NordiQC質(zhì)控 北歐免疫組化質(zhì)控中心（NordiQC）是獨(dú)立于經(jīng)濟(jì)和政治之外的歐洲專業(yè)學(xué)術(shù)團(tuán)體,，其目的在于通過(guò)周期性免疫組化能力驗(yàn)證并提供參考方案,、組織對(duì)照、其他相關(guān)信息（如抗原表位的描述,、技術(shù)操作的參數(shù)）從而推進(jìn)免疫組化流程的標(biāo)準(zhǔn)化和實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化,、推廣其臨床應(yīng)用。 十余年來(lái),，NordiQC質(zhì)控關(guān)于CD30評(píng)估的能力驗(yàn)證已經(jīng)進(jìn)行了5輪（2004-2017年數(shù)據(jù)）,，結(jié)果表明進(jìn)行CD30免疫組化檢測(cè)的比例是穩(wěn)步下降的：2004年是92%，2017年只有82%的實(shí)驗(yàn)室得到了充分的標(biāo)記,。 2015年的驗(yàn)證中,，相當(dāng)多的實(shí)驗(yàn)室因著色不足而未能通過(guò)檢測(cè)，一般是因?yàn)橹?、或完全假陰性結(jié)果,。有鑒于此，本文原作者結(jié)合NordiQC質(zhì)控相關(guān)建議提出了改善CD30檢測(cè)的相關(guān)建議和指南,。 01 針對(duì)免疫組化CD30評(píng)估中的檢測(cè)前因素,，具體建議如下： 01 含鋅固定液及B5固定液可影響CD30免疫組化結(jié)果；建議用福爾馬林固定液,； 02 組織應(yīng)采用10%的中性緩沖福爾馬林固定液,、至少固定8小時(shí)；固定時(shí)間超過(guò)24小時(shí)則可能固定過(guò)度,；03 理想狀態(tài)下,，推薦采用切除活檢以確保有足夠的組織來(lái)進(jìn)行形態(tài)學(xué)評(píng)估和分子檢測(cè)；粗針穿刺活檢也是可以接受的,；細(xì)針穿刺活檢組織可能標(biāo)本不足,、無(wú)法得出準(zhǔn)確診斷及分型；細(xì)針穿刺標(biāo)本所做細(xì)胞塊中CD30免疫組化結(jié)果的解讀尚無(wú)標(biāo)準(zhǔn)化方案,； 04 應(yīng)告知臨床醫(yī)師標(biāo)本不足或不合適的情況,，并告知其原因。 02 針對(duì)免疫組化CD30評(píng)估中的檢測(cè)因素，具體建議如下（參考了NordiQC質(zhì)控）： 01 染色不足的最常見(jiàn)原因,，是熱修復(fù)不足（加熱時(shí)間過(guò)短,、溫度過(guò)低）、一抗?jié)舛冗^(guò)低,、所用檢測(cè)系統(tǒng)的敏感性低,； 02 針對(duì)熱修復(fù)不足，需用堿性緩沖液,、或改良的低pH值緩沖液,； 03 針對(duì)一抗?jié)舛冗^(guò)低，建議對(duì)一抗應(yīng)仔細(xì)的驗(yàn)證,、選擇效果最好的CD30抗體,；這方面較好的抗體克隆號(hào)有Ber-H2,、CON6D/5,、1G12、JCM182,、EP154,； 04 CD30免疫組化的驗(yàn)證與校驗(yàn)方面：所用檢測(cè)方案必須是經(jīng)驗(yàn)證的、專門(mén)針對(duì)特異抗原的,；該方案是針對(duì)特殊組織或標(biāo)本類型的,；同一實(shí)驗(yàn)室換其他經(jīng)驗(yàn)證的檢測(cè)方法、或其他實(shí)驗(yàn)室選擇經(jīng)驗(yàn)證的方法時(shí),，需至少25次單獨(dú)組織標(biāo)本校驗(yàn),；其中至少10個(gè)樣本是靶抗原水平較高的標(biāo)本，至少10個(gè)樣本是靶抗原中等水平至低水平的標(biāo)本,，至少5個(gè)樣本在免疫組化方面無(wú)靶抗原證據(jù),；鑒于免疫組化檢測(cè)的復(fù)雜性與日俱增，建議需用更大數(shù)量的標(biāo)本進(jìn)行免疫組化檢測(cè)校驗(yàn),。 03 針對(duì)免疫組化CD30檢測(cè)的敏感性問(wèn)題,，具體建議如下（參考了NordiQC質(zhì)控） 01 選擇恰當(dāng)?shù)膶?duì)照組織極為關(guān)鍵：CD30免疫組化檢測(cè)中，推薦用扁桃體做陽(yáng)性組織對(duì)照,；部分淋巴瘤的CD30表達(dá)為中等程度至低水平,；經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤標(biāo)本對(duì)檢測(cè)極限方面不會(huì)提供有用信息，不要用作陽(yáng)性對(duì)照,；經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤標(biāo)本做陽(yáng)性對(duì)照的話,，會(huì)影響對(duì)CD30低水平表達(dá)腫瘤的評(píng)估能力； 02 相關(guān)檢測(cè)方案在濾泡間B細(xì)胞和T細(xì)胞,、濾泡旁生發(fā)中心B細(xì)胞必須有弱至中等程度,、但卻是明確的細(xì)胞膜著色；幾乎所有的其他細(xì)胞都必須是陰性,； 03 漿細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞,、內(nèi)皮細(xì)胞可為陽(yáng)性，具體取決于所用一抗：Ber-H2者,，漿細(xì)胞可著色,；ICM182、IG12者內(nèi)皮細(xì)胞可著色,；IG12者,，巨噬細(xì)胞可著色。 全文完 |
|
|
