迄今為止,，與傳統(tǒng)的抗癌治療策略相比，免疫治療被認(rèn)為是最有前景的全身性腫瘤治療方法,，在提高治療效果方面發(fā)揮著不可或缺的作用,，尤其是對(duì)難治性癌癥的治療。新興的癌癥免疫療法包括癌癥疫苗,、嵌合抗原受體的T細(xì)胞（CAR-T）治療,、細(xì)胞因子治療,、免疫檢查點(diǎn)抑制劑和腫瘤靶向單克隆抗體（mAbs）。其中,，單克隆抗體因其特異性靶向分子的能力,，已成為癌癥治療中一種關(guān)鍵和有效的治療方式。然而,，由于腫瘤復(fù)雜的疾病發(fā)病機(jī)制,，針對(duì)單一靶點(diǎn)的單克隆抗體往往不足以表現(xiàn)出足夠的治療效果。因此,，針對(duì)多個(gè)靶點(diǎn)的雙特異性抗體（bsAbs）應(yīng)運(yùn)而生,，它的發(fā)展改變了腫瘤免疫治療的領(lǐng)域。

由于能夠同時(shí)針對(duì)腫瘤細(xì)胞或腫瘤微環(huán)境（TME）中的兩個(gè)表位,，bsAbs逐漸被成為下一代治療性抗體的一個(gè)重要和富有前景的組成部分,。目前正在開發(fā)的大多數(shù)bsAbs被設(shè)計(jì)成通過將免疫細(xì)胞，特別是細(xì)胞毒性T細(xì)胞,，與腫瘤細(xì)胞緊密相連,，從而形成一個(gè)人工免疫接觸，最終導(dǎo)致靶向腫瘤細(xì)胞的選擇性攻擊和裂解,。雖然存在多種bsAb形式,，但根據(jù)FC片段的存在與否，可將其大致分為兩類：IgG樣和非IgG樣,。Fc片段的存在顯著地發(fā)揮了額外的效應(yīng)器功能,。目前，許多臨床前和臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中,。然而,， bsAb藥物在腫瘤治療中的應(yīng)用仍然面臨著巨大的挑戰(zhàn)，包括腫瘤異質(zhì)性和突變負(fù)荷,、難以控制的腫瘤微環(huán)境、激活T細(xì)胞的共刺激信號(hào)不足,、持續(xù)注射的必要性,、致命的全身副作用和脫靶的毒性作用。針對(duì)這些問題,，本文提出了多種策略來解決這些問題,，包括制備多特異性bsAb、發(fā)現(xiàn)新抗原,、將bsAb與其他抗癌藥物結(jié)合,、開發(fā)基于NK細(xì)胞的bsAb和原位制備bsAb。

bsAb通過同時(shí)結(jié)合不同的抗原或表位而表現(xiàn)出雙重特異性,，它們?cè)谀[瘤治療領(lǐng)域受到了廣泛的關(guān)注,，主要有四種作用：（a）重新定向特異性免疫效應(yīng)細(xì)胞,，選擇性地破壞癌細(xì)胞；（b）靶向多種細(xì)胞表面抗原,，從而提高靶向特異性,；（c）向腫瘤內(nèi)輸送藥物；以及（d）通過阻斷兩種生物學(xué)途徑來提高治療效力和持久性,。在這些功能中,，最常用的一種功能是使免疫效應(yīng)細(xì)胞靠近癌細(xì)胞，從而降低全身毒性,，規(guī)避耐藥性,，bsAb大致分為兩組：（a）IgG樣（有Fc區(qū)）和（b）非IgG樣（無Fc區(qū)）。

具有Fc區(qū)的IgG樣bsAb由于其較大的尺寸和FcRn介導(dǎo)的再循環(huán)過程,，比沒有Fc區(qū)域的bsAb具有更長(zhǎng)的循環(huán)半衰期,。純化更方便，溶解度和穩(wěn)定性提高,。更重要的是,，它可能具有更大的臨床治療潛力，以保留多種Fc介導(dǎo)的效應(yīng)器功能,，包括抗體依賴性細(xì)胞毒性（ADCC),、補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)和Ab依賴性細(xì)胞吞噬作用。

非IgG樣bsAb片段相比之下,，顯示出相對(duì)較低的循環(huán)動(dòng)力學(xué),，但具有更好的組織穿透能力，較低的免疫原性,，以及較低的固有免疫系統(tǒng)的非特異性激活,。這種形式的bsAb主要依賴于其抗原結(jié)合能力發(fā)揮多種功能。

為了延長(zhǎng)非IgG樣結(jié)構(gòu)的半衰期,，同時(shí)保持其原有的生物活性,、安全性和低免疫原性，可采用多種策略來增加其分子量并延長(zhǎng)其在血清中的半衰期：（a）用肽接頭使Ab片段形成多聚體,；（b）與其他分子如人血清白蛋白,、聚乙二醇（PEG）、碳水化合物,、N-（2-羥丙基）甲基丙烯酰胺（HPMA）和葡聚糖偶聯(lián),。Ab片段的多聚化，以多聚單鏈抗體為例,，是非IgG類似形式的核心策略,。

bsAb的歷史可以追溯到1961年，當(dāng)時(shí)Nisonoff和Rivers首次提出通過混合不同的Ab片段來產(chǎn)生多特異性Abs的概念,。在雜交瘤技術(shù)和化學(xué)重組方法分別于1975年和1985年建立的早期階段,，BSAb的產(chǎn)生依賴于雜交瘤體細(xì)胞融合產(chǎn)生四瘤體或兩個(gè)不同單抗的F(ab′)₂分子的化學(xué)異共軛,。然而，因?yàn)榛瘜W(xué)偶聯(lián)可能使bsAb失活,、展開或聚集,，bsAb的進(jìn)一步發(fā)展受到阻礙。同時(shí),，四元體技術(shù)常常錯(cuò)誤地組裝重鏈和輕鏈,，從而導(dǎo)致所需配對(duì)的產(chǎn)率降低，并產(chǎn)生意想不到的免疫反應(yīng),。從本質(zhì)上講,，正確的重鏈-輕鏈配對(duì)通常包括兩個(gè)方面：（a）兩個(gè)不同的重鏈的正確配對(duì)；（b）輕鏈與相應(yīng)的正確重鏈相結(jié)合,。這些問題迫切需要改進(jìn)方法來產(chǎn)生正確配對(duì)的bsAb,。最初，重鏈/輕鏈的錯(cuò)配問題是在1995年通過創(chuàng)造一個(gè)嵌合的鼠/鼠源四聯(lián)體來解決的,，這保證了同源重鏈的正確配對(duì),。例如，臨床批準(zhǔn)的catumaxomab由小鼠IgG2a抗CD3半抗原與大鼠IgG2b抗上皮細(xì)胞粘附分子（EpCAM）半抗原組成,。1998年,，相同的輕鏈配對(duì)兩個(gè)重鏈的應(yīng)用也顯示出了效果。然而,，重鏈錯(cuò)配和免疫原性仍然存在,，臨床應(yīng)用范圍有限，需要更好的解決方案,。

迅速發(fā)展的基因工程技術(shù)為克服上述缺點(diǎn)提供了機(jī)會(huì),，這促進(jìn)了第二波bsAb的開發(fā)。這些新開發(fā)的bsAb的生產(chǎn)主要依靠重組DNA技術(shù),，在控制bsAb的大小,、親和力、雙特異性,、半衰期,、穩(wěn)定性、溶解度和生物分布等屬性的同時(shí),，能夠產(chǎn)生嵌合或人源化的抗體，以滿足所需目標(biāo)產(chǎn)品的不同需求,。1996年,，Ridgway等人描述了利用CH3結(jié)構(gòu)域突變產(chǎn)生人源化抗CD3×CD4雜交的“knobs into holes”（KiH）方法。這種方法是通過在bsAb的一個(gè)重鏈中用一個(gè)小的氨基酸替換大的氨基酸（hole）,，在bsAb的另一個(gè)重鏈（knob）中反之,，最終根據(jù)靜電導(dǎo)向理論引導(dǎo)形成異源二聚體而不是同源二聚體,。利用噬菌體展示技術(shù)篩選出形成穩(wěn)定異二聚體的CH3突變體。此外,，為了減少單體或同源二聚體雜質(zhì),，一些研究人員進(jìn)一步設(shè)計(jì)重鏈的CH3結(jié)構(gòu)域，以添加鏈間二硫鍵,，進(jìn)一步提高異二聚體并提供純化的可能性,。該技術(shù)還可通過將肽、蛋白質(zhì)配體或Ab片段融合到Fc鏈的兩端來產(chǎn)生各種類型的異二聚體蛋白質(zhì),。之后,，稱為CrossMab的新技術(shù)的出現(xiàn)進(jìn)一步減少了重鏈/輕鏈配對(duì)的副產(chǎn)物。這是通過在一個(gè)Abs的Fab區(qū)內(nèi)交換重鏈和輕鏈結(jié)構(gòu)域來實(shí)現(xiàn)的,，從而導(dǎo)致VH-VL和CH1-CL之間界面的分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,，以完整的Fc和抗原結(jié)合域構(gòu)建了抗血管生成素-2和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子a的CrossMab-bsAb，其穩(wěn)定性和親和力均高于其親本抗體,。CrossMab形式可進(jìn)一步分為三個(gè)亞型,，CH1配CL（CrossMabCH1-CL），VH配VL（CrossMabVH-VL）,，或VL-CL配VH-CH1（CrossMabFab）,。CrossMab不需要序列優(yōu)化或附加接頭，成為設(shè)計(jì)新型bsAb的一種有吸引力的方法,。此外,，它可以與KiH結(jié)合，以確保重鏈的正確配對(duì),。

隨著基因工程技術(shù)的進(jìn)步,，以及噬菌體展示、蛋白質(zhì)工程,、轉(zhuǎn)基因小鼠等多種方法的出現(xiàn),，目前已發(fā)展出100多種bsAb形式。這些新開發(fā)的形式規(guī)避了以前的制造問題,，如不穩(wěn)定,、低收率和免疫原性，從而加速了從試驗(yàn)臺(tái)到臨床的速度,。如上所述,，通用的bsAb格式可以簡(jiǎn)單地分為兩類。一方面,，除了quadromas,、KiHs和CrossMab外，IgG-like形式還包括雙可變域Ig（DVD-Ig）,、IgG單鏈Fv（IgG-scFv）,、二合一或雙作用Fab抗體（DAF）和κλ-body等形式,。

另一方面，非IgG樣形式包括單鏈抗體,、納米抗體,、dock and lock（DNL）方法和其他多價(jià)分子。單鏈抗體是指兩個(gè)來自親本Ab輕鏈和重鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域的組合,，即VH和VL,。它們通過一個(gè)肽接頭連接，通常是(G4S)₃序列,?；趩捂溈贵w的形式包括scFvs、sdAb,、ta-scFv,、diabodies、TandAbs和DART,。在這種格式中,，BiTE是最典型和應(yīng)用最廣泛的一種。美國(guó)食品和藥物管理局（FDA）和歐洲藥品管理局（EMA）分別于2014年12月和2015年12月批準(zhǔn)了抗CD19×CD3的blinatumomab（Blincyto,；Amgen）,，用于治療費(fèi)城染色體陰性的復(fù)發(fā)或難治性前體B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病（B-ALLs）,。迄今為止,，各種bsAb形式已在其他多個(gè)綜述中都有總結(jié)。

bsAb的首次臨床試驗(yàn)是在1990年進(jìn)行的,。利用化學(xué)偶聯(lián)的抗CD3單抗OKT3和抗膠質(zhì)瘤單抗NE150治療惡性膠質(zhì)瘤,。1995年，bsAb首次通過靜脈注射抗CD3×CD19的bsAb治療化療耐藥的非霍奇金淋巴瘤（NHL）,。令人失望的是,，雖然觀察到有限的全身毒性，但該試驗(yàn)沒有臨床反應(yīng),，只觀察到血清中腫瘤壞死因子(TNF-α)和CD8+T細(xì)胞增加,。同年，第一個(gè)BiTE,，由兩個(gè)靶向CD3和17-1A的單鏈抗體連接而成,，也就是抗CD19×CD3的blinatumab的前體。1997年,，針對(duì)FcγRIII（CD16）和霍奇金相關(guān)抗原CD30激活NK細(xì)胞的bsAb在臨床I/II期研究中顯示出令人鼓舞的抗腫瘤活性,。利用重組DNA技術(shù)，blinatumomab避開了以前產(chǎn)量低,、副產(chǎn)品不明確和純化程序復(fù)雜的問題,。一年后，Blinatumomab在德國(guó)和瑞典進(jìn)入了人類研究的第一個(gè)階段,，其中21例復(fù)發(fā)或難治性NHL患者接受短期靜脈注射,。直到2004年，NHL患者才首次觀察到blinatumomab有意義的臨床反應(yīng),，劑量為每天15μg/m2,。幾年后，blinatumomab被用于廣泛的臨床試驗(yàn),，直到最后通過FDA和EMA的批準(zhǔn),。在隨后的幾年里，blinatumomab的治療范圍進(jìn)一步拓寬,，2018年,，隨著FDA批準(zhǔn)其用于首次或第二次完全緩解后MRD≥0.1%的pre-B ALL患者群體的治療，bsAb領(lǐng)域經(jīng)歷了爆炸式增長(zhǎng),，未來臨床發(fā)展前景廣闊,。

為了同時(shí)處理兩個(gè)靶點(diǎn)，同時(shí)保持它們的效力,，產(chǎn)生bsAb的第一步是確定合適的靶抗原,。與傳統(tǒng)的Abs類似，bsab的靶點(diǎn)應(yīng)滿足以下標(biāo)準(zhǔn)：（a）它們?cè)诎屑?xì)胞而不是鄰近的正常細(xì)胞中有明顯的表達(dá),，以避免非特異性毒性（也稱為“靶向非腫瘤”毒性）,；（b）它們與惡性腫瘤表型或防止抗原突變引起的免疫耐受的信號(hào)通路密切相關(guān)。目前,，只有一小部分腫瘤相關(guān)抗原（TAA）被識(shí)別并嚴(yán)格滿足上述標(biāo)準(zhǔn),，這一點(diǎn)令人沮喪。其中CD19最具代表性,，CD19在大多數(shù)B-ALL上表達(dá),，對(duì)B細(xì)胞的發(fā)育和功能是必不可少的，因此是CAR-T細(xì)胞或基于bsAb的免疫治療的重要靶點(diǎn),。然而,，有報(bào)道稱，CD19特異性CAR-T細(xì)胞或抗CD19×CD3的BiTE在B-ALL治療中的失敗歸因于CD19的基因突變,，導(dǎo)致CD19細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的丟失,，構(gòu)象變化，向細(xì)胞表面的轉(zhuǎn)運(yùn)受損,，或從ALL到急性髓細(xì)胞白血?。?/span>AML）的表型轉(zhuǎn)化。因此，如果只有一個(gè)TAA靶向癌細(xì)胞,，所選TAA的基因改變可能會(huì)對(duì)免疫治療的效果構(gòu)成威脅,，這給我們帶來了一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)。

策略1：發(fā)展多特異性抗體,；以避免單一靶點(diǎn)相關(guān)的免疫無效,，一些研究者提出多靶點(diǎn)抗體的想法，以同時(shí)識(shí)別靶癌細(xì)胞表面的多種抗原,，提高親和力,。例如，產(chǎn)生促紅細(xì)胞生成素的肝細(xì)胞（Eph）受體家族的三個(gè)成員EphA2,、EphA4和EphB4參與了許多惡性腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移,，它們都是很有吸引力的抗腫瘤治療靶點(diǎn)。在此基礎(chǔ)上,，通過將抗EphB4/EphA4雙抗體連接到完整的抗EphA2抗體的C端,，設(shè)計(jì)了一種三特異性抗體。這一策略的另一個(gè)例子是雙靶向單鏈抗體的三特異性抗體同時(shí)識(shí)別AML癌細(xì)胞上的CD123和CD33,。與單靶向藥物相比,，它表現(xiàn)出明顯更強(qiáng)的抗腫瘤活性。此外,，靶向內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）,、HER2、HER3和VEGF的四特異性Abs在體外和體內(nèi)也顯示出比單靶向藥物更有效的抗腫瘤效果,，并且能夠破壞其親本bsAb誘導(dǎo)的耐藥性,。

策略2：新抗原的發(fā)現(xiàn)；由于其高突變負(fù)荷和對(duì)當(dāng)前腫瘤免疫治療明顯的耐藥性傾向,，因此識(shí)別新抗原并確定相關(guān)內(nèi)在機(jī)制為改進(jìn)抗腫瘤策略鋪平道路是一項(xiàng)挑戰(zhàn),，但也是緊迫的任務(wù)。簡(jiǎn)而言之,，新抗原,，也稱為腫瘤特異性抗原（TSA）來源于非同步體細(xì)胞突變，在腫瘤細(xì)胞中特異性表達(dá),，而在正常細(xì)胞中完全缺失,。以前，大多數(shù)免疫療法針對(duì)的是TAA,，因?yàn)樗鼈兺ǔＴ谝唤M腫瘤類型中過度表達(dá),，因此覆蓋了更廣泛的患者群體，如CD19,。然而,，基于TAA治療的累積研究報(bào)告了正常組織潛在的損傷,，同時(shí)臨床療效不理想。相反,，TSAs在腫瘤細(xì)胞中有選擇性的表達(dá),，并且在不同的個(gè)體之間存在差異，從而為TSA依賴的免疫治療提供了個(gè)性化的機(jī)會(huì),。

一般來說,，Ab靶點(diǎn)的選擇大致分為三代：（a）第一代由“已驗(yàn)證抗原”組成，這些抗原已被廣泛的實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)所證實(shí),；（b）第二代包括修飾肽，這意味著要么是與“驗(yàn)證抗原”不同的表位,，要么是屬性改進(jìn)的相同表位,；（c）第三代包括根據(jù)基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)或基于細(xì)胞的功能策略篩選出的那些新發(fā)現(xiàn)的抗原,。顯然,，TSAs的識(shí)別與第三代Ab靶點(diǎn)密切相關(guān)。從技術(shù)上講,，全外顯子組測(cè)序與快速發(fā)展的軟件算法相結(jié)合是目前識(shí)別新抗原最有趣和最有前途的方法,。全外顯子組測(cè)序是基因組相關(guān)技術(shù)中最重要的一種，包括獲取DNA樣本,、將其拆分成碎片,、篩選提取編碼片段，擴(kuò)增片段,，測(cè)序片段,，最后用參考基因組分析結(jié)果。根據(jù)DNA密碼子配對(duì)原理,，突變的DNA序列被轉(zhuǎn)化為抗原中的氨基酸交替,。隨后，各種算法可用于預(yù)測(cè)對(duì)MHC分子具有高結(jié)合親和力的新抗原,?；诩?xì)胞的方法利用整個(gè)癌細(xì)胞作為平臺(tái)，選擇性地生成相應(yīng)的單克隆抗體,。篩選出與癌細(xì)胞表面抗原結(jié)合活性高的抗原,。

在宿主免疫監(jiān)視過程中，T細(xì)胞是抗原提呈細(xì)胞向T細(xì)胞受體（TCR）遞呈MHC肽復(fù)合物,、提供二級(jí)共刺激信號(hào)激活原始T細(xì)胞,、促進(jìn)效應(yīng)T細(xì)胞增殖的重要前哨細(xì)胞。相反,，如果共刺激分子缺失或被共抑制分子替代,，即免疫檢查點(diǎn),，T細(xì)胞功能失活或無能，從而無法特異性地清除腫瘤細(xì)胞,。在眾多免疫檢查點(diǎn)中,，程序性死亡受體1（PD-1，也稱為CD279）是最重要的以及廣泛研究的分子,。它在TME的T細(xì)胞上表達(dá),，并與其配體PD-L1相互作用于腫瘤細(xì)胞或腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞，介導(dǎo)腫瘤免疫抑制,。同時(shí),，已觀察到bsAb依賴性治療的臨床療效不足可能部分歸因于TME中的免疫抑制，尤其是通過PD-1/PD-L1通路,。例如,，一項(xiàng)針對(duì)diabody格式的抗AC133×mCD3 bsAbs的研究報(bào)告了放療誘導(dǎo)腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TIL）的凋亡以及隨后腫瘤的生長(zhǎng)，這是由PD-1途徑介導(dǎo)的,。因此,，額外的PD-1阻斷劑對(duì)增加TIL的數(shù)量非常有益，恢復(fù)抗腫瘤免疫效果,，提高生存率,?？偟膩碚f,，組合策略主要包括免疫檢查點(diǎn)阻斷、CAR-T細(xì)胞和迄今為止的其他策略,。

策略1：同時(shí)應(yīng)用BSAB和免疫檢查點(diǎn)抑制單克隆抗體,；免疫檢查點(diǎn)抑制劑的應(yīng)用促進(jìn)了T細(xì)胞協(xié)同抗腫瘤免疫治療的發(fā)展,，特別是聯(lián)合應(yīng)用，招募和動(dòng)員T細(xì)胞對(duì)抗癌癥,。在一項(xiàng)研究中,，在小鼠模型中應(yīng)用抗CD33×CD3的BiTE（AMG330）可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞PD-1上調(diào)，并顯示出顯著受損的T細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞溶解,。相反,，阻斷PD1/PD-L1相互作用增強(qiáng)了AMG330介導(dǎo)的細(xì)胞溶解。在另一項(xiàng)研究中,，在anti-CEA×CD3的BiTE前雙重給藥抗PD-1和抗PD-L1單抗可有效地阻斷TME中的免疫抑制,，并使效應(yīng)T細(xì)胞的細(xì)胞毒性最大化。在臨床試驗(yàn)中,，聯(lián)合應(yīng)用bsAb和免疫檢查點(diǎn)抑制劑也可以協(xié)同作用,，提高抗腫瘤效果和患者生存率。此外,，在先前的抗藥性HER2+乳腺癌治療研究中,，觀察到使用HER2-TDB（一種基于曲妥珠單抗的T細(xì)胞招募bsAb）以及PD-L1抑制劑時(shí)的抗腫瘤效果,。這些益處包括增強(qiáng)腫瘤生長(zhǎng)抑制和增強(qiáng)反應(yīng)持久性。最近,，通過DNL方法構(gòu)建新型三價(jià)T細(xì)胞重定向bsAb,，即，(E1)-3s和(14)-3s,，分別針對(duì)Trop-2和CEACAM5,，與PD-L1阻斷劑聯(lián)合應(yīng)用，在體外和體內(nèi)均顯示出增強(qiáng)的抗腫瘤活性,。

策略2：以免疫檢查點(diǎn)為靶點(diǎn)的bsAb,；這是同時(shí)利用免疫檢查點(diǎn)阻斷和bsAb技術(shù)的另一個(gè)有吸引力的選擇，結(jié)果是設(shè)計(jì)同時(shí)針對(duì)免疫檢查點(diǎn)和腫瘤抗原的bsAb,，這在策略上優(yōu)于免疫檢查點(diǎn)抑制劑和bsAb的組合,。從機(jī)制上講，這是通過與TAA陽性癌細(xì)胞中的PD-1/PD-L1阻斷劑結(jié)合來實(shí)現(xiàn)的,。例如，一種抗PD-L1×EGFR bsAb來激活EGFR過表達(dá)腫瘤細(xì)胞中的PD-L1阻斷劑,。它具有對(duì)稱的四價(jià)taFv-Fc形式的結(jié)構(gòu),，具有一個(gè)Fc域來介導(dǎo)相關(guān)功能。已證實(shí),，抗PDL1×EGFR-bsAb可增強(qiáng)腫瘤部位的Ab積聚,，同時(shí)預(yù)防多種上皮性惡性腫瘤（如結(jié)直腸癌和非小細(xì)胞肺癌）的嚴(yán)重系統(tǒng)性自身免疫相關(guān)不良事件。同樣,，一些研究人員設(shè)計(jì)了兩種新的bsAb：抗PD-1×c-Met DVD-Ig和IgG單鏈抗體,，這兩種抗體在體外和體內(nèi)均表現(xiàn)出有效的抗腫瘤免疫活性。同樣,，另一種靶向PD-L1和硫酸軟骨素蛋白多糖4（CSPG4）的bsAb用于治療黑色素瘤和其他CSPG4+惡性腫瘤時(shí),，在維持PD-1/PD-L1的安全性的同時(shí)，也有助于提高抗腫瘤的療效和選擇性,。此外,，使用抗CD33×CD3的BiTE作為支架，將PD-1的胞外區(qū)域融合到該支架上,，以產(chǎn)生一種三特異性抗體,，招募T細(xì)胞到CD33+AML細(xì)胞，并阻斷PD-1的免疫檢查點(diǎn)通路,。

雖然目前關(guān)于bsAb和免疫檢查點(diǎn)阻斷的聯(lián)合研究大多集中在PD-1/PD-L1通路上,，但其他免疫檢查點(diǎn)，如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白4（CTLA-4,，CD152）和T細(xì)胞Ig粘蛋白3（TIM-3）也在免疫抑制性TME中發(fā)揮著不可或缺的作用,。為進(jìn)一步降低外周毒性而僅對(duì)腫瘤區(qū)域進(jìn)行免疫檢查點(diǎn)阻斷,，正在創(chuàng)造性地設(shè)計(jì)一組新的bsAb，以同時(shí)針對(duì)兩個(gè)不同的免疫檢查點(diǎn),，例如CrossMab格式的抗PD-1/TIM-3 bsAb,，或靶向檢查點(diǎn)抑制劑和T細(xì)胞共刺激受體，以IgG1形式的anti-CTLA-4×OX40bsAb（命名為ATOR 1015）,。

策略三：結(jié)合CAR-T細(xì)胞療法提供共刺激信號(hào),；除上述T細(xì)胞免疫抑制信號(hào)外，在缺乏共刺激信號(hào)的情況下,，通過CD28或4-1BB（CD137）分子持續(xù)刺激TCR-CD3信號(hào)通路是效應(yīng)器T細(xì)胞無能或凋亡的另一個(gè)重要解釋,。最初，這個(gè)問題是通過使用抗4-1BB的單克隆抗體或4-1BBL的胞外域或抗CD28單抗作為佐劑輔助bsAb治療來解決的,，顯示出效應(yīng)T細(xì)胞激活時(shí)間的延長(zhǎng),。此外，通過將腫瘤壞死因子超家族的兩個(gè)成員（包括CD40L,、CD27L,、OX40L和4-1BBL）融合到一個(gè)T細(xì)胞重定位的diabody，最終增強(qiáng)T細(xì)胞刺激并提高抗腫瘤活性,。然而,，這些解決方案顯示效應(yīng)T細(xì)胞的持續(xù)時(shí)間相對(duì)較短。為了解決這一問題,，一組研究人員提出了一種新型的T細(xì)胞靶向復(fù)合物來根除AML細(xì)胞,，該復(fù)合物包括一個(gè)抗CD3×肽表位（E5B9）bsAb，即一個(gè)通用效應(yīng)器模塊和一個(gè)目標(biāo)模塊,，該模塊由一個(gè)與肽表位（E5B9）融合的抗CD33單鏈抗體和一個(gè)4-1BBL的胞外域組成,。與傳統(tǒng)的抗CD33×CD3的bsAb相比，該復(fù)合物不僅在激活T細(xì)胞和誘導(dǎo)CD33+腫瘤細(xì)胞溶解方面具有更高的療效,，而且通過額外的共刺激信號(hào)增強(qiáng)對(duì)CD33低表達(dá)細(xì)胞的殺傷作用,。更重要的是，這種新穎,、靈活的模塊化系統(tǒng)可使抗腫瘤功能長(zhǎng)期增強(qiáng),，在腫瘤中具有廣泛的應(yīng)用潛力。此外,，為了提供長(zhǎng)效效應(yīng)T細(xì)胞功能,，其他研究人員已經(jīng)制定了一種優(yōu)化策略，將bsAb策略與CAR-T細(xì)胞策略相結(jié)合,，產(chǎn)生了一組新的bsAb,。這種新的bsAb，命名為frBsAb,，是由兩個(gè)單抗的化學(xué)異共軛,，融合葉酸受體（FR）和所選擇的TAA,。相應(yīng)地，轉(zhuǎn)化的T細(xì)胞被稱為BsAb-IR28z,，其細(xì)胞外FR結(jié)構(gòu)域連接到CD8α-鉸鏈和跨膜區(qū),；細(xì)胞內(nèi)CD3z部分與CD28融合,。因此,，當(dāng)frBsAbs將腫瘤細(xì)胞（通過對(duì)TAA的識(shí)別）交聯(lián)到介導(dǎo)的T細(xì)胞時(shí)，它們不僅誘導(dǎo)短暫的T細(xì)胞活化,，而且通過同時(shí)刺激共刺激分子CD28防止無能或抗原誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡,，最終發(fā)揮增強(qiáng)的抗腫瘤能力。在共刺激分子中,，CAR-T細(xì)胞和bsAbs的結(jié)合也提供了許多優(yōu)點(diǎn),，并且作為一種有前途的治療惡性腫瘤的方法正在獲得發(fā)展,。最近,，人們又設(shè)計(jì)了一種用于治療多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）的單一基因修飾T細(xì)胞產(chǎn)物CAR-T-EGFRvIII,。BiTE-EGFR細(xì)胞分泌額外的抗EGFR×CD3,，同時(shí)保持傳統(tǒng)的CAR-T細(xì)胞骨架,，并在T細(xì)胞表面表達(dá)EGFRvIII,。由于EGFR和EGFRvIII都是GBM腫瘤細(xì)胞的關(guān)鍵靶點(diǎn)，這種創(chuàng)新性的發(fā)明比CAR-T細(xì)胞和bsAb作為單一療法更具優(yōu)勢(shì),，因?yàn)樗粌H證實(shí)了抗原陽性腫瘤亞型的有效抗腫瘤反應(yīng),，而且對(duì)健康組織相對(duì)安全，而且還避免了其親本技術(shù)的缺點(diǎn),，如腫瘤抗原異質(zhì)性、全身應(yīng)用相關(guān)非特異性毒性,、持續(xù)注射的必要性,、出現(xiàn)免疫抑制、T細(xì)胞衰竭等,。

本質(zhì)上,，到目前為止，一組創(chuàng)新的通用或模塊化的CAR-（modCAR-）T細(xì)胞及其各自的適配器分子（CAR適配器）已經(jīng)被用來規(guī)避傳統(tǒng)CAR-T細(xì)胞的一些致命的副作用,。該策略將TAA識(shí)別和T細(xì)胞激活分為兩部分,，并依賴于CAR適配器作為橋梁,，將modCAR-T細(xì)胞重定位于多個(gè)TAA，并使用相同的modCAR-T細(xì)胞來靶向多種腫瘤類型,，這樣可以精細(xì)調(diào)節(jié)效應(yīng)T細(xì)胞的功能而無需清除掉它們,。目前，CAR適配器可根據(jù)其結(jié)構(gòu)分為幾個(gè)亞型,，包括小分子（如葉酸和異硫氰酸熒光素）,、單價(jià)和二價(jià)納米體、單鏈抗體,、Fabs和Abs,。

迄今為止，增強(qiáng)抗腫瘤免疫的大多數(shù)嘗試都集中在通過CAR-T細(xì)胞或bsAb來增強(qiáng)T細(xì)胞的反應(yīng),，特別是在blinatumomab成功后,。然而，值得注意的是,，這種T細(xì)胞靶向治療受到一些毒副作用的限制,，其中最具挑戰(zhàn)性的是致命的細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）。盡管人們已經(jīng)做出很大努力通過阻斷IL-6或抑制單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞活化來逆轉(zhuǎn)CRS,，但在保持充分治療潛力的同時(shí)實(shí)現(xiàn)最佳毒性管理仍然是一個(gè)挑戰(zhàn),。此外，由于大多數(shù)T細(xì)胞重定位靶向bsAb旨在對(duì)抗血液惡性腫瘤,，bsAb介導(dǎo)的關(guān)于實(shí)體瘤的治療還需要進(jìn)一步的研究,。NK細(xì)胞作為天然免疫抗腫瘤的一線戰(zhàn)士，在過去的幾十年里也引起了廣泛的關(guān)注,。在人類中,，各種研究表明NK細(xì)胞功能受損或缺失與腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的高風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān),。值得注意的是,，高比例的NK細(xì)胞浸潤(rùn)實(shí)體瘤與更好的臨床療效相關(guān)，這已在結(jié)直腸癌,、乳腺癌,、透明細(xì)胞腎癌、頭頸癌和咽部癌中得到證實(shí),。因此,，通過免疫治療靶向NK細(xì)胞是一種很有吸引力的抗腫瘤策略。

從機(jī)制上講,，活化的NK細(xì)胞可以通過三種直接或間接的策略清除腫瘤細(xì)胞：（a）釋放顆粒,，如分泌性溶酶體，其中含有穿孔素和顆粒酶，誘導(dǎo)細(xì)胞膜溶解或凋亡,；（b）通過腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體和Fas配體在腫瘤細(xì)胞上的相互作用來激活靶細(xì)胞caspase,；（c）分泌多種因子調(diào)節(jié)其他免疫細(xì)胞功能，間接殺傷腫瘤細(xì)胞,?；谶@些理論，NK細(xì)胞接合器（NKCEs）和CAR-NK細(xì)胞被設(shè)計(jì)用來利用NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性來對(duì)抗腫瘤,。NKCE是通過連接抗NK細(xì)胞受體（主要是CD16）和一個(gè)TAA (bispecific killer engagers, BiKEs）或兩個(gè)TAA（trispecific killer engagers, TriKEs）的單鏈抗體來構(gòu)建的,。到目前為止，抗CD16的BiTEs已經(jīng)被有效地用于針對(duì)廣泛的TAA,，包括CD19,、CD20、CD30,、CD33,、CD133和EPCAM。

抗CD30×CD16A的BiKE（AFM13）的治療復(fù)發(fā)或難治性CD30+霍奇金淋巴瘤或NHL的I/II期臨床試驗(yàn)結(jié)果已發(fā)表,。有趣的是,，在一項(xiàng)骨髓增生異常綜合征（MDS）的研究中，抗CD16×CD33的BiKE不僅能根除CD33+MDS細(xì)胞,，而且還能靶向CD33+髓源性抑制細(xì)胞,，以逆轉(zhuǎn)TME中的免疫抑制，提高抗腫瘤的療效,。相比之下,，使用額外的單鏈抗體，TriKEs通過靶向更多的taa或共同作用更多的NK細(xì)胞激活受體靶獲得了更多的益處,。最近,，報(bào)道了一種顯著的三功能NKCE，它與NK細(xì)胞上的CD16和NKp46（一種天然細(xì)胞毒性受體（NCR））以及腫瘤細(xì)胞上的TAA共同作用,。在侵襲性和實(shí)體性B細(xì)胞淋巴瘤的小鼠模型中，這種設(shè)計(jì)巧妙的TriKE導(dǎo)致NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性充分激活和增強(qiáng),，并顯示出比分別激活CD16和NKp46的BiKE更有效的抗腫瘤功能,。此外，另外一個(gè)設(shè)計(jì)增加了IL-15交聯(lián)劑,，將抗CD16×CD33的BiKE升級(jí)為TriKE,，由于NK細(xì)胞自我持續(xù)增殖，從而提高了腫瘤細(xì)胞殺傷效率,。值得注意的是,，抗CD16×IL-15×CD33的TriKE（GTB-3550）的單中心I/II期臨床試驗(yàn)已經(jīng)在進(jìn)行中，用于治療CD33+高危MDS,，難治性/復(fù)發(fā)性AML,，或晚期全身性肥大細(xì)胞增多癥,。除了優(yōu)越的抗腫瘤作用外，BiKE和TriKE還比T細(xì)胞接合器具有更低的毒性和更高的安全性,，這意味著CRS或非靶向細(xì)胞毒性的風(fēng)險(xiǎn)更低,，在實(shí)體腫瘤中的應(yīng)用前景更廣闊。與NKCE類似,，成熟的NK細(xì)胞也可以作為一個(gè)有趣的候選細(xì)胞來表達(dá)CARs,，對(duì)抗豐富的TAA，如CD19,、CD20,、CD244和HER2。

盡管bsAb取得了巨大的成功,，但外源性給藥的治療潛力受到了短循環(huán)動(dòng)力學(xué)和靶向非腫瘤毒性的阻礙,。因此，研究人員提出了原位生成bsAb的概念,，以克服免疫抑制性TME,，避免持續(xù)的藥物輸注。目前,，在腫瘤組織中制備bsAb的方法主要有工程溶瘤病毒（OVs）,、轉(zhuǎn)染T細(xì)胞和轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）。

2015年,，F(xiàn)DA批準(zhǔn)了Imlygic,，即轉(zhuǎn)基因溶瘤HSV療法 talimogene laherparepvec（T-VEC），并表達(dá)GM-CSF,，用于治療晚期黑色素瘤,。這代表了OVs的一個(gè)里程碑，并促進(jìn)了大量的臨床前研究和臨床試驗(yàn),。由于腫瘤特異性表達(dá)和病毒介導(dǎo)的T-cell募集的優(yōu)勢(shì),，OVs是一個(gè)誘人的bsAb輸送平臺(tái)。目前,，這些攜帶BiTEs的OVs正在進(jìn)行臨床前評(píng)估：產(chǎn)生抗CD3×EphA2 BiTE的EphA2-T細(xì)胞疫苗病毒,；抗EGFR×CD3 BiTE的腺病毒（ICOVIR-15K）；抗CD3×CEA/CD20 BiTE的麻疹病毒（MV-BiTE）,；抗EpCAM×CD3 BiTE的工程化溶瘤B組腺病毒Enadenoutucirev（EnAd）,。第一個(gè)攜帶BiTE的OV是一個(gè)雙清除的痘苗病毒（western reverse Straine），其被設(shè)計(jì)為編碼EphA2靶向BiTE,，在A549肺癌異種移植模型中,，加入外源性IL2可提高T細(xì)胞的體外活化和增殖，并提高存活率。后來,，研究人員對(duì)腺病毒ICOVIR-15K進(jìn)行了修飾,，以產(chǎn)生抗EGFR×CD3的BiTE，成功地在不增加IL-2的情況下促進(jìn)T細(xì)胞增殖,。另一個(gè)類似的結(jié)構(gòu),，MV-BiTE，為免疫功能正常的小鼠和實(shí)體瘤異種移植模型提供持續(xù)的免疫保護(hù),，并促進(jìn)腫瘤的長(zhǎng)期消退而不復(fù)發(fā),。攜帶抗EpCAM×CD3 BiTE的EnAd進(jìn)一步顯示了殺死靶細(xì)胞的能力，同時(shí)克服了人類原發(fā)惡性腹水樣本中的免疫抑制性TME,?？偟膩碚f，工程化產(chǎn)生BiTE的OVs可以通過非特異性的直接溶瘤或感染抗原陽性的癌細(xì)胞來攻擊和殺死癌細(xì)胞,，然后是BiTE的復(fù)制依賴性表達(dá),，激活內(nèi)源性CD4+和CD8+T細(xì)胞，從而對(duì)這些癌細(xì)胞產(chǎn)生免疫介導(dǎo)的細(xì)胞毒性,。這種改進(jìn)的溶瘤病毒療法由于其優(yōu)于傳統(tǒng)的OVs或bsAb而具有光明的前景：（a）來自修飾OVs的biTEs選擇性地靶向抗原陽性的癌細(xì)胞,，而不依賴于MHC/TCR分子呈現(xiàn)或其他共刺激信號(hào)，因此,，即使在癌細(xì)胞失去MHC表達(dá)的情況下,，也能提高抗腫瘤T細(xì)胞反應(yīng)的效力并激發(fā)免疫。（b） 在晚期病毒啟動(dòng)子的控制下,，通過限制病毒感染癌細(xì)胞的持續(xù)BiTE產(chǎn)生,，不僅使系統(tǒng)毒性最小化，而且使BiTE在TME中的濃度大大提高,，同時(shí)也解決了BiTE的半衰期短的問題,。（c） OVs主要在癌細(xì)胞中感染和復(fù)制，并在細(xì)胞間傳播,，減輕了鄰近健康組織的損傷,。（d）BiTE既可以針對(duì)病毒感染的癌細(xì)胞，也可以針對(duì)未感染抗原陽性的癌細(xì)胞,。（e） 改良OVs可刺激CD4+和CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)免疫,，同時(shí)規(guī)避免疫抑制。（f） 該方法安全性高,，毒副作用小，應(yīng)用方便,。此外,，與靶向腫瘤抗原的改良OVs類似，攜帶BiTEs靶向間質(zhì)細(xì)胞抗原的OVs對(duì)難治性、富間質(zhì)性腫瘤有較好的療效,。編碼以成纖維細(xì)胞活化蛋白（FAP）為靶點(diǎn)的基因工程酶,，不僅可以殺死感染和復(fù)制的腫瘤細(xì)胞，而且還可以利用隨后產(chǎn)生的抗FAP的BiTE激活T細(xì)胞,，選擇性地耗盡FAP+癌相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）,。它們最終逆轉(zhuǎn)CAF介導(dǎo)的免疫抑制，打破間質(zhì)屏障,，使OVs滲透到腫瘤部位,，并協(xié)同使TME恢復(fù)到免疫反應(yīng)狀態(tài)。

轉(zhuǎn)染自體腫瘤特異性T細(xì)胞,；目前,，轉(zhuǎn)染的自體腫瘤特異性T細(xì)胞由于實(shí)現(xiàn)了CAR-T細(xì)胞與bsAb的理論結(jié)合，并克服了兩者的局限性而備受關(guān)注,。近十年前,，當(dāng)人類外周血淋巴細(xì)胞，尤其是CD3+T細(xì)胞,，被工程化的基于HIV-1的慢病毒載體轉(zhuǎn)染,，在體內(nèi)產(chǎn)生抗CEA×CD3 diabody的細(xì)胞時(shí)，淋巴細(xì)胞首次被認(rèn)為是bsAb的載體,。最近,，CD123-ENG T細(xì)胞可以證明這一點(diǎn)，它是由一種編碼雙特異性接合器分子的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)的,，該分子靶向AML和CD3+T細(xì)胞的CD123+腫瘤細(xì)胞,。從機(jī)制上講，ENG T細(xì)胞不僅識(shí)別和殺死CD123+腫瘤細(xì)胞,，而且通過抗原依賴性的BiTE分泌,，將未修飾的旁觀者T細(xì)胞重定向并激活到腫瘤部位，協(xié)同產(chǎn)生強(qiáng)大的抗腫瘤免疫反應(yīng),。此外,，為了避免對(duì)正常造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞的意外和過度殺傷，CD20.CD123-ENG T細(xì)胞被設(shè)計(jì)為包含自殺基因CD20,，它允許在利妥昔單抗和補(bǔ)體存在下選擇性耗竭,。其他類似的ENG T細(xì)胞包括EphA2-ENG T細(xì)胞和CD19-ENG T細(xì)胞。此外,，一些研究人員通過mRNA電穿孔技術(shù)和快速T細(xì)胞擴(kuò)增方案構(gòu)建了CD19-BiTE轉(zhuǎn)移的T細(xì)胞,，在體外和侵襲性Nalm6白血病小鼠模型中，與CAR RNA轉(zhuǎn)染的T細(xì)胞相比,，其抗腫瘤免疫能力也得到增強(qiáng),。轉(zhuǎn)基因T細(xì)胞顯示出明顯的優(yōu)越性,，因?yàn)橐坏┍患せ睿蜁?huì)產(chǎn)生增強(qiáng)的BiTE,，將駐留的T細(xì)胞重新定向到腫瘤部位,。為了進(jìn)一步提高抗腫瘤效率，將共刺激分子CD28和/或4-1BBL引入ENG T細(xì)胞表面,，即CD19-ENG.4-1BBL/CD80,，顯著增加抗原依賴性細(xì)胞因子（IL-2和IFNγ）的產(chǎn)生，并促進(jìn)T細(xì)胞的增殖,，最終在體內(nèi)外表現(xiàn)出最佳反應(yīng),。

轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）除了腫瘤細(xì)胞和T細(xì)胞外,，MSC也可以作為一種細(xì)胞載體,，實(shí)現(xiàn)bsAb的原位穩(wěn)定表達(dá)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有免疫原性低,、向腫瘤部位遷移的趨勢(shì),、追蹤顯微轉(zhuǎn)移的能力以及易于通過病毒載體進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。在一項(xiàng)研究中,，通過慢病毒載體對(duì)永生化人源性MSC系（SCP-1）進(jìn)行了基因修飾,，以產(chǎn)生完全人源化的抗CD33×CD3 bsAb提高共刺激分子4-1BBL的表達(dá)。增強(qiáng)的抗抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)使MSCs成為bsAb靶向腫瘤的有效傳遞者,，從而延長(zhǎng)腫瘤消退時(shí)間,。另一項(xiàng)研究使用轉(zhuǎn)染的人臍帶來源的MSCs分泌抗CD19×CD3 TandAbs，同時(shí)使用吲哚胺2,3-雙加氧酶（IDO）途徑抑制劑,，D-1MT,，證明這種組合是一種很有前途的治療策略。此外,，E1A修飾的MSCs也可以被設(shè)計(jì)成病毒轉(zhuǎn)運(yùn)體和放大器,，釋放工程腺病毒并在到達(dá)腫瘤部位或轉(zhuǎn)移灶后重新感染腫瘤細(xì)胞，它們分泌bsAb并激活T細(xì)胞對(duì)腫瘤的反應(yīng),。這是一個(gè)雙重病毒裝載MSC（命名為MSC.CD3-HAC.E1A）攜帶雙功能融合蛋白CD3-HAC,，由抗CD3單鏈抗體和高親和力共識(shí)（HAC）PD-1組成，最終促進(jìn)腫瘤的消除和逆轉(zhuǎn)TME的免疫耐受,。

Minicircle（MC）,；MC是體內(nèi)生產(chǎn)bsAb的另一種有前途的替代品。它是一組非病毒性的DNA載體,，通過流體動(dòng)力學(xué)過程將轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物輸送到小鼠肝臟后,，能夠持續(xù)高水平地表達(dá)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物。一些研究人員利用MC設(shè)計(jì)了MC-bsAb,，生成了抗CD20×CD3-bsAb,，在體外和異種移植小鼠模型中介導(dǎo)T細(xì)胞殺傷人類B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞,。這種方法非常有吸引力，因?yàn)樗鄬?duì)穩(wěn)定,，價(jià)格低廉，并且能夠在數(shù)周甚至更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)維持血液循環(huán)中的bsAb的治療濃度,。

在過去的30年里,，人們目睹了一個(gè)巨大的轉(zhuǎn)變，從僅僅開發(fā)和改造基本的Abs,，發(fā)展到更復(fù)雜的Ab衍生物,，其形狀和尺寸多種多樣，尤其是bsAb,。bsAb技術(shù)在臨床應(yīng)用中具有非凡的前景,，吸引了研究人員的注意并已發(fā)展出極為豐富的形式，為基于BSAB的癌癥免疫治療奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ),。截至2019年9月20日,，NCBI的官方網(wǎng)站上共發(fā)布了183項(xiàng)bsAb的臨床試驗(yàn)（大多數(shù)在癌癥領(lǐng)域）。然而,，盡管有上述各種各樣的策略,，商業(yè)化生產(chǎn)bsAb藥物的過程仍然受到各種障礙的阻礙。更具體地說,，bsAb的制造既耗時(shí)又昂貴,。它需要合適、安全,、經(jīng)濟(jì)的細(xì)胞系生產(chǎn),、程序、分析和純化方法來獲得所需的產(chǎn)品,。此外,，Ab生產(chǎn)后的一系列問題，包括但不限于Abs的降解,、聚集,、變性、破碎和氧化,，必須在給到患者之前解決,。同時(shí)，還需要更多的臨床試驗(yàn)來探索最佳給藥途徑和最佳劑量,，以提高靶組織的濃度,，減少全身副作用，甚至是控釋制劑,。

總體而言,，據(jù)估計(jì),，目前臨床試驗(yàn)中的大多數(shù)bsAb（67%）旨在對(duì)抗血液惡性腫瘤。相比之下,，靶向?qū)嶓w腫瘤的bsAb值得進(jìn)一步研究,，因?yàn)槠鋵?duì)正常組織或其他復(fù)雜因素（包括免疫耐受性癌間質(zhì)、新生血管紊亂,，bsAb藥物的滲透不足）有不可避免的不良影響,。因此，人們對(duì)正在進(jìn)行的實(shí)體腫瘤中的bsAb研究充滿熱情,，這些研究有望在不久的將來產(chǎn)生有希望的結(jié)果,，盡管將bsAbs轉(zhuǎn)化為臨床適用的藥物可能耗時(shí)且需要大量的努力?？傊?，bsAb研究的結(jié)果證明了這些分子在新的藥物設(shè)計(jì)和隨后的癌癥治療臨床應(yīng)用中的前景。

參考文獻(xiàn)：

Challenges and strategies for next-generation bispecific antibody-based antitumor therapeutics. Cell Mol Immunol. 2020 May;17(5):451-461.