CRC簡介

結(jié)直腸癌（colorectal cancer, CRC），是全球女性中第二常見,，男性中第三常見的癌癥,，也是全球第三大與癌癥相關(guān)的死亡因素。CRC的發(fā)生是由一些關(guān)鍵基因的突變積累所致,，包括CTNNB1,、BRAF、PIK3CA,、PDGFRL,、TP53、APC等[1],。腫瘤轉(zhuǎn)移（metastasis）是CRC患者死亡的主要原因,。最常見的轉(zhuǎn)移部位是肝臟，此外也有肺和腹膜的轉(zhuǎn)移,。CRC在男性和女性中都很普遍,，且50歲后患病風(fēng)險顯著增加[2]。絕大多數(shù)CRC是由結(jié)直腸內(nèi)壁形成的息肉（colorectal polyps）發(fā)展而來,，因此,，做結(jié)腸鏡篩查十分重要，其能檢測出結(jié)直腸中有無異常結(jié)構(gòu)（例如息肉）,，是目前預(yù)防CRC最有效的方法,。如果在早期階段發(fā)現(xiàn)CRC，只需手術(shù)切除腫瘤即可,；但如果在晚期階段發(fā)現(xiàn),，通常需要用到化療、放療或靶向藥物聯(lián)合治療,。

Notice

建議大家從50歲起定期篩查CRC,，早發(fā)現(xiàn)，早治療~

CRC與EGFR

表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor,，EGFR）在包括結(jié)直腸癌,、肺癌、乳腺癌,、膀胱癌等多種腫瘤的進(jìn)展中起重要作用,。Spano等人的研究表明CRC患者中EGFR的過表達(dá)與腫瘤-淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（tumor–node–metastasis，TNM） T3期顯著相關(guān)[3]。

靶向EGFR的單抗,，例如西妥昔單抗（cetuximab，CET）,，已被批準(zhǔn)在晚期CRC患者中使用,。這些單抗能阻礙EGFR與其配體EGF的結(jié)合，抑制其下游信號通路的激活,，從而延長CRC患者的生存期,。但與此同時，CRC患者EGFR信號通路中的一些關(guān)鍵的抑癌基因（tumour suppressor genes）和原癌基因（oncogenes）常常存在突變,，例如RAS和BRAF等,。這些突變的存在導(dǎo)致EGFR單抗治療效果顯著下降。

Case study：在荷瘤BRGS小鼠中移植人源UCB-NK進(jìn)行治療

盡管上天給EGFR單抗半掩了一下門,，但研究者們發(fā)現(xiàn)了一扇窗戶：除了可以阻斷腫瘤細(xì)胞上EGFR與EGF的結(jié)合外,，EFGR單抗也可以通過與NK細(xì)胞相互作用，激活抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,，ADCC） ,，對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行殺傷。但是有研究表明,，盡管CRC組織中的趨化因子和細(xì)胞因子水平很高,，但不管是哪個疾病階段的CRC組織，其中浸潤的NK細(xì)胞都很少[4],。因此Veluvhamy等人開始研究通過將人臍帶血干細(xì)胞來源的NK細(xì)胞（umbilical cord blood stem cell-derived NK cells,，UCB-NK）過繼性轉(zhuǎn)移（adoptive transfer）至荷瘤的重度免疫缺陷小鼠體內(nèi)，觀測UCB-NK單獨(dú)以及與CET聯(lián)合給藥對帶有RAS突變的腫瘤的治療效果[5],。

在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,，研究者們使用了缺乏功能性T、B,、NK細(xì)胞,，且轉(zhuǎn)入了NOD背景Sirpa的BALB/c Rag2–/– Il2rg–/– SirpaNOD（BRGS）重度免疫缺陷小鼠（BRGSF小鼠的前身），并將帶有熒光標(biāo)簽,、表達(dá)EGFR,，且RAS基因帶有突變（EGFR+ RASmut），同時對CET有抗性的SW480人結(jié)腸腺癌細(xì)胞通過尾靜脈接種至小鼠體內(nèi),，給予不同的治療（圖1）,。結(jié)果顯示，CET單藥并無明顯抗腫瘤效果（藍(lán)線）,，但是單獨(dú)使用UCB-NK細(xì)胞治療則可顯著降低腫瘤負(fù)荷（綠線）,。此外，值得注意的是,，CET聯(lián)合UCB-NK細(xì)胞并不能增加抗腫瘤效應(yīng),，這說明CET并不能有效激活UCB-NK的ADCC效應(yīng),，但同時，這也進(jìn)一步證實(shí)了CET治療攜帶RAS突變腫瘤的無效性,。

圖1. UCB-NK具有顯著的抗腫瘤效果[5],。

此外，在移植SW480腫瘤細(xì)胞后第35天的熒光活體成像結(jié)果也顯示,，對比陰性對照組和CET單藥組的小鼠,，單獨(dú)給予UCB-NK或UCB-NK和CET聯(lián)合治療的小鼠體內(nèi)腫瘤生長受到明顯抑制。另外,，為了證明CET單藥的療效,，研究人員也在BRGS小鼠體內(nèi)接種了帶熒光標(biāo)簽、過表達(dá)EGFR,，且攜帶野生型RAS基因（EGFR+++RASwt）的A431人皮膚鱗癌細(xì)胞,。結(jié)果顯示，CET對EGFR+++RASwt的腫瘤細(xì)胞系具有強(qiáng)效的殺傷作用,。

圖2. 熒光活體成像結(jié)果顯示UCB-NK具有顯著的抗腫瘤效果[5],。

另外，小鼠生存曲線結(jié)果也顯示,，UCB-NK治療能顯著延長SW480（具有CET抗性且攜帶RAS突變的腫瘤）荷瘤小鼠的生存期,。但CET聯(lián)合UCB-NK細(xì)胞治療相對于UCB-NK單獨(dú)治療并沒有顯著差異性。

圖3. UCB-NK治療能顯著延長荷瘤（具有CET抗性且攜帶RAS突變的腫瘤）小鼠的生存期[5],。

綜上,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在體內(nèi),，UCB-NK對CRC細(xì)胞具有顯著的抗腫瘤效果,，且該效果在EFGR下游通路蛋白RAS突變后依然存在。這為攜帶RAS突變的CRC患者帶來了新的治療希望,。

小結(jié)

過繼性NK細(xì)胞療法是一種非常有前景的細(xì)胞療法,。與T細(xì)胞療法相比，其具有以下幾個優(yōu)點(diǎn)：

①更高的安全性：自體（autologous）移植時基本不產(chǎn)生細(xì)胞因子釋放綜合征（cytokine release syndrome,，CRS）和神經(jīng)毒性,，而在同種異體（allogenic）移植時，基本不產(chǎn)生移植物抗宿主?。╣raft-versus-host disease,，GvHD）；

②具有多種機(jī)制來激活細(xì)胞毒性功能,；

③由于發(fā)生GvHD的風(fēng)險低,，NK細(xì)胞治療可以使用同種異體的NK細(xì)胞，這極大的拓寬了免疫治療細(xì)胞的來源，提高了治療可行性[6],。

那么如果要對過繼性NK細(xì)胞療法進(jìn)行抗腫瘤效果的體內(nèi)研究,，我們應(yīng)該如何選擇小鼠模型呢？首先,，我們需要明確NK細(xì)胞的來源：如果你所用的NK細(xì)胞是小鼠來源的,，那么一般你可以選擇相同遺傳背景的，免疫系統(tǒng)功能健全的,，荷有鼠源腫瘤的小鼠（syngeneic tumor model）[7]，又或者是荷有鼠源腫瘤的免疫缺陷小鼠[8],；如果你所用的NK小鼠是人源的,，那么一般你可以選擇荷有人源腫瘤的免疫缺陷小鼠（參考本文中的case study），又或者是移植了人CD34+造血干細(xì)胞的,，荷有人源腫瘤的免疫系統(tǒng)人源化小鼠[9],。