活性氧（ROS）參與許多退行性神經(jīng)系統(tǒng)病癥,，如阿茲海默癥,、帕金森癥、萎縮性脊髓側(cè)索硬化以及年老或外傷導(dǎo)致的腦功能紊亂等,。此外活性氧是植物體內(nèi)正常代謝的信號小分子,，在植物的生長發(fā)育和抗逆反應(yīng)中具有重要作用。目前各領(lǐng)域中常見的四種ROS的檢測分析方法有：化學(xué)發(fā)發(fā)光法,、熒光探針法,、分光光度法,、電子順磁共振法。

CheKine? 活性氧（ROS）檢測試劑盒提供了一種簡單,、靈敏,、快速的ROS檢測方法，其原理是利用熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測,。DCFH-DA（二氯二氫熒光素-乙酰乙酸酯）可自由透過活細(xì)胞膜進入細(xì)胞內(nèi),，并被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解，形成DCFH,，DCFH無熒光且不能通透細(xì)胞膜,，其可以被細(xì)胞內(nèi)的活性氧（ROS）氧化生成有熒光的DCF，使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測和觀察活細(xì)胞內(nèi)DCF的熒光信號強度,，即可以分析細(xì)胞活性氧的水平,。

CheKine? 活性氧（ROS）檢測試劑盒的操作步驟如下：

對于刺激時間較短（通常為2 h以內(nèi)）的細(xì)胞，建議先裝載探針,，后用活性氧陽性對照或感興趣的藥物刺激細(xì)胞,；對于需要較長時間刺激（通常為6 h以上）的細(xì)胞，建議先用活性氧陽性對照或感興趣的藥物刺激細(xì)胞,，后裝載探針,。

1.原位裝載探針 (僅適用于貼壁細(xì)胞)

2.收集細(xì)胞后裝載探針 (適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞)

3.熒光顯微拍照

4.流式細(xì)胞分析操作方法

注意事項：

1.陽性對照H2O2一般使用濃度為100 μM （推薦濃度50-200 μM，具體依細(xì)胞類型而定） ,。通常刺激后30 min-4 h可以觀察到顯著的活性氧水平升高,。對于不同的細(xì)胞，活性氧陽性對照的效果可能有較大的差別,。如果在刺激后30 min內(nèi)觀察不到活性氧的升高,，可延長誘導(dǎo)時間或適當(dāng)提高活性氧陽性對照的濃度。如果熒光信號過強,，可縮短誘導(dǎo)時間或適當(dāng)降低活性氧陽性對照的濃度,。

2.實驗過程中，如果陰性對照細(xì)胞熒光也比較強,，可以按照1:2000-1:5000 稀釋熒光探針DCFH-DA,，使DCFH-DA的終濃度為 2-5 μM。探針裝載的時間可在15-60 min 內(nèi)適當(dāng)進行調(diào)整,，盡量縮短讀片時的曝光時間,，并且試驗組,、對照組曝光時間需保持一致,。

活性氧陽性對照 (H2O2) 僅僅用于作為陽性對照的樣品，并非所有試驗組樣品中都需加入活性氧陽性對照,。

3.探針裝載后,，一定要洗凈未進入細(xì)胞內(nèi)的探針,，否則會導(dǎo)致背景較高。

4.盡量縮短探針裝載后到檢測所用的時間（刺激時間除外）,，以減少各種可能的誤差,。

文章來源：Abbkine