活性氧 (Reactive Oxygen Species,，ROS) 是生物有氧代謝過程中的副產(chǎn)物，是一類含氧并且性質(zhì)活潑的物質(zhì)的總稱,。ROS 的主要來源之一是線粒體內(nèi)膜的呼吸鏈底物端,。在有氧呼吸中，線粒體中的電子傳遞鏈復(fù)合物將電子傳遞給 O₂,，有一部分 O₂ 被還原,，主要包括：超氧化物 (O₂^-)；過氧化氫 (H₂O₂),；單線態(tài)氧 (¹O₂),；羥基自由基 (HO^.)；氫過氧自由基 (ROO^.),；氧化物過氧亞硝基陰離子 (ONOO^-) 等,。

圖 1. ROS 對細(xì)胞的影響

經(jīng)典 HKSOX-1 系列

 HKSOX-1 系列是對 O₂^- 具有極好選擇性和敏感性的綠色熒光探針，可用于檢測活細(xì)胞及體內(nèi)的內(nèi)源性超氧化物,。HKSOX-1 (HY-130015) 為 HKSOX-1r (HY-130017) 升級版,，可更好滯留在胞內(nèi)，反映胞內(nèi)信號,。HKSOX-1m (HY-D1156) 則可特異性靶向線粒體,，用于監(jiān)測線粒體內(nèi)O₂^-。 

圖 2. 受精后斑馬魚胚胎中內(nèi)源性 O₂^- 的共聚焦成像^[1]

經(jīng)典 HKOC1 系列 

HKOCl 系列是以銠為基礎(chǔ),、特異性檢測 HOCl 的熒光探針,。HKOCl-3 (HY-130025) 為綠色熒光探針,，而 HKOCl-4 (HY-130027) 為黃色熒光探針，具有更長的吸收波長和更好的 pH 穩(wěn)定性,。HKOCl-4m (HY-D1158) 特異靶向線粒體,，可用于監(jiān)測線粒體內(nèi) HOCl。 

圖 3. HKOCl-3 在多種細(xì)胞類型中檢測內(nèi)源性 HOCl^[2]

ROS 染色實(shí)驗(yàn)簡要流程 (以 HKOCl-3 為例 ）   

HKOCl-3染色液配制：

• 儲存液的配制

用 DMSO 配制 10 mM 的 HKOCl-3,。如用 203 μL DMSO 溶解 1 mg HKOCl-3,。(注：HKOCl-3 儲存液建議分裝后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存)

• 工作液的配制

用預(yù)熱好的無血清細(xì)胞培養(yǎng)基或 PBS 稀釋儲存液，配制成 1-10 μM 的 HKOCl-3 工作液,。(注：請根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整 HKOCl-3 工作液濃度,，且現(xiàn)用現(xiàn)配)

• 細(xì)胞染色

懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，加入 PBS 洗滌兩次,，每次 5 分鐘,。貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，加入胰蛋白酶消化細(xì)胞,。離心棄去上清后,，加入 PBS 洗滌兩次，每次 5 分鐘,。加入 1 mL HKOCl-3 工作液,，室溫孵育 30 分鐘。400 g,，4 ℃ 離心 3-4 分鐘,，棄去上清。加入 PBS 洗滌細(xì)胞兩次,，每次 5 分鐘,。用 1 mL 無血清培養(yǎng)基或 PBS 重懸細(xì)胞后，使用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察,。 MCE 的所有產(chǎn)品僅用作科學(xué)研究或藥證申報,，我們不為任何個人用途提供產(chǎn)品和服務(wù)

參考文獻(xiàn)

1. Jun Jacob Hu, et al. Fluorescent Probe HKSOX-1 for Imaging and Detection of Endogenous Superoxide in Live Cells and In Vivo. J Am Chem Soc. 2015 Jun 3;137(21):6837-43. 

2. Hu JJ, Yang D, et al. HKOCl-3: a fluorescent hypochlorous acid probe for live-cell and in vivo imaging and quantitative application in flow cytometry and a 96-well microplate assay. Chem Sci. 2016 Mar 1;7(3):2094-2099.