【原】基因敲入小鼠是什么?基因敲入小鼠詳細(xì)介紹

生物學(xué)渣 2021-03-05

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CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是最新出現(xiàn)的一種由sgRNA指導(dǎo)Cas核酸酶對靶向基因進(jìn)行特定DNA修飾的技術(shù),。在這一系統(tǒng)中，sgRNA引導(dǎo)序列靶定位點剪切雙鏈DNA達(dá)到對基因組DNA 進(jìn)行修飾的目的,。CRISPR/Cas9系統(tǒng)能夠?qū)π∈蠛痛笫蠡蚪M特定基因位點進(jìn)行精確編輯,。

運用

適用于cre工具小鼠模型的建立，與條件性基因敲除小鼠進(jìn)行交配用于研究目的基因在特定組織或細(xì)胞中的功能等,；
適用于攜帶報告基因和標(biāo)簽的小鼠模型的建立,，用于研究目的基因在特定組織中的定位或表達(dá)等；
適用于人源化基因工程小鼠模型的建立,，模擬人類致病機制,，用于疾病治療的藥物研發(fā)和藥效評價；

條件性基因敲入

利用CRISPR/Cas9基因敲入技術(shù),，針對靶基因設(shè)計,、構(gòu)建相應(yīng)的gRNA質(zhì)粒和donor質(zhì)粒，將外源基因或特定突變敲入引入到基因組目的基因的特定位點,。 研發(fā)周期 4-6個月運用

通過控制cre重組酶的時空特異性表達(dá)從而特異性地啟動敲入目的基因的表達(dá),；

Rosa26位點定點敲入 根據(jù)Rosa26基因序列設(shè)計合成sgRNA，將構(gòu)建包含同源序列和目的序列的片段與Cas9,、sgRNA共同顯微注射入受精卵中,，Cas9/sgRNA復(fù)合體與基因組靶序列結(jié)合并切割雙鏈DNA，以含目的片段的同源序列為模版修復(fù)基因組DNA,，最終獲得在Rosa26基因intron中定點插入片段的小鼠,。

H11位點定點過表達(dá)

H11位點（也叫Hipp11）位于小鼠第11號染色體，是 Eif4enif1與Drg1 這兩個基因之間的一個位點,，由于H11位點位于兩個基因之間,，外源基因插入后對內(nèi)源基因表達(dá)的影響很小,，同時H11位點所在的Eif4enif1與Drg1這兩個基因的側(cè)翼序列區(qū)域具有廣泛的空間和時間EST表達(dá)模式，能夠使整合在此的外源基因受指定啟動子的驅(qū)動而穩(wěn)定表達(dá),。該位點的純合敲入小鼠可正常發(fā)育和繁殖,。利用CRISPR/cas9系統(tǒng)可以在H11位點構(gòu)建條件性基因過表達(dá)小鼠模型，即廣泛型強啟動子pCAG與外源目的基因cDNA之間用loxP-stop-loxP結(jié)構(gòu)隔開,，只有與組織特異性Cre工具鼠交配后,，才會在特異細(xì)胞或組織中表達(dá)目的基因。

研發(fā)周期

4-7個月

技術(shù)優(yōu)勢