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抗體雞尾酒療法（antibody cocktail）是有別于傳統(tǒng)抗體組合聯(lián)用的一種新形式，是通過不同的比例和組合把不同的抗體混合為一個藥物，彌補單一抗體作用的不足,，實現(xiàn)“1+1>2”的藥效作用。 雖然抗體雞尾酒療法和抗體組合聯(lián)用有很多共通之處,，但仍存在許多不同,。其中最顯著的區(qū)別在生產(chǎn)制造環(huán)節(jié)，抗體組合是分別生產(chǎn)上市,，臨床上聯(lián)合使用,；抗體雞尾酒是在制造環(huán)節(jié)就將抗體混合在一起，組成單一制劑包裝,。另一個區(qū)別就是在抗體的設計上,，抗體組合聯(lián)用的開發(fā)階段都是將單一抗體作為藥物單獨開發(fā)后申報上市，上市后再聯(lián)合使用,，在開發(fā)設計階段更多關(guān)注抗體自身的療效和安全性,，而抗體雞尾酒設計的初衷就是為了聯(lián)合不同抗體的優(yōu)勢，開發(fā)設計階段更多關(guān)注抗體之間的相互作用和功能互補,。當然如果聯(lián)合作用機制明確,，抗體在臨床聯(lián)合使用也可以轉(zhuǎn)為開發(fā)成抗體雞尾酒療法，最成功的案例就是Roche的Perjeta和Herceptin,，目前兩個抗體均已獲批,，并在臨床上聯(lián)合使用，Roche進一步開發(fā)了固定劑量組合抗體雞尾酒制劑配方,，目前該雞尾酒療法已經(jīng)提交上市申請,。 抗體制藥能夠快速發(fā)展成為生物制藥的龍頭，得益于單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展,。單克隆抗體克服了諸多多抗的弊端,，單抗藥物的市場規(guī)模遠超多抗。開發(fā)抗體雞尾酒療法既發(fā)揮了單抗的組分明確,、質(zhì)量可控,、副作用低等優(yōu)點，又兼顧了多抗結(jié)合位點多,、親合力強,、逃逸可能性低等優(yōu)點，有效利用單抗和多抗各自的優(yōu)勢,，充分發(fā)揮不同抗體的功效,，能夠成為抗體制藥的有利補充,。
2019年9月印度藥監(jiān)局批準了狂犬抗體雞尾酒療法藥物RabiMabs的上市申請，開辟了抗體雞尾酒療法的新局面,。但歐美主流市場目前還沒有抗體雞尾酒療法獲批的產(chǎn)品,，多種抗體雞尾酒療法已經(jīng)在不同疾病中得到應用，歐美市場進展較快的品種已經(jīng)處于臨床試驗晚期或上市申請階段,。2020年2月25日Roche提交了Perjeta與Herceptin固定劑量組合（FDC）皮下制劑上市申請,，還有Regeneron公司的Ebola抗體雞尾酒組合REGN-EB3，F(xiàn)DA已經(jīng)在4月16日接受其BLA申請并授予優(yōu)先評審資格,。目前抗體雞尾酒療法研究主要集中在抗感染和腫瘤領域，之所以在這兩個領域研究較多,，是因為這兩個領域能最大程度的發(fā)揮雞尾酒療法的優(yōu)勢,。抗感染領域的藥物很多，產(chǎn)品迭代也較快,，產(chǎn)品研發(fā)面臨的兩個主要問題是廣譜性和耐藥性,。以狂犬病毒為例，不同來源的狂犬病毒毒株的序列有所差異,，一種單克隆抗體難以對全部的毒株并起到保護作用,。由于狂犬病毒是100%致死性病毒，給予的單抗若不能中和病毒就意味著患者死亡,，這一點大大限制了單抗的使用和開發(fā),。抗體雞尾酒療法由結(jié)合不同抗原表位的抗體組成,，最大程度的覆蓋全部毒株,，極大地降低了不同毒株感染帶來的風險。除了天然的感染類病原體不同亞型（毒株）序列的不同,，導致抗體保護效力存在差異,，抗感染抗體開發(fā)的另一個難點是逃逸（耐藥）。由于感染類病原體的復制周期短,，突變頻率高,，藥物在使用過程中經(jīng)常會面臨耐藥的問題。而此時如果使用雞尾酒療法,，不同抗體針對的抗原表位不同,，當其中一種抗體發(fā)生耐藥時，其他抗體依然能夠起到保護作用,。本次新冠疫情的藥物研發(fā),，除了大家最關(guān)注的疫苗外，中和抗體是另一類藥物研發(fā)的重點,。2020年6月1日,，Eli Lilly公司與AbCellera合作開發(fā)的新冠病毒中和抗體LY-CoV555進入臨床研究,，是全球第一進入臨床研究階段的新冠病毒中和抗體藥物。國內(nèi),，君實生物于2020年6月7日宣布其新冠病毒中和抗體JS016進入臨床研究階段,。Eli Lilly和君實生物的新冠病毒中和抗體均來源于康復患者外周血分離的單個B細胞?？紤]到新冠病毒已經(jīng)發(fā)生突變及抗體臨床使用潛在的逃逸風險,，中國疾控中心、軍科院等研究團隊均將抗體雞尾酒療法放在了新冠病毒中和抗體藥物研發(fā)的首位,。Regeneron公司利用其獨有的VelocImmune平臺結(jié)合康復患者外周血分離的單個B細胞分離技術(shù),，開發(fā)了兩款中和活性高，且無競爭的新冠病毒抗體,，組成抗體雞尾酒REGN-COV2,，對目前已知的突變毒株具有中和作用，該抗體雞尾酒已于2020年6月11日進入臨床研究階段,。圖4 抗體雞尾酒對新冠突變逃逸毒株有保護作用[4]腫瘤領域的抗體幾乎已經(jīng)占據(jù)抗體藥物的半壁江山,，以Keytruda，Opdivo,，Avastin,，Rituxan，Herceptin為代表的抗腫瘤抗體藥物已經(jīng)成為抗腫瘤藥物中最暢銷的品種,。Keytruda在2019年的銷售更是首次突破百億美元,。盡管作用機制明確，毒性可控,，但抗腫瘤單克隆抗體離完全攻克癌癥依然很遠,，腫瘤對抗體的耐受主要是由于腫瘤的異質(zhì)性和適應性引起的?？贵w雞尾酒療法在腫瘤中的應用可以克服腫瘤的異質(zhì)性和適應性,。目前，大部分抗體公司還是以單抗開發(fā)為主,，在單抗的療效得到初步臨床驗證后,，才會考慮單抗聯(lián)合和抗體雞尾酒療法，而絕大多數(shù)抗體公司手中并沒有Roche這樣頂級公司豐富的產(chǎn)品線,，因此限制了抗體雞尾酒療法的開發(fā),。以Symphogen為代表的一批致力于抗體雞尾酒研發(fā)的創(chuàng)新型公司，從項目立項之初就著眼于抗體雞尾酒療法,，這或許是me better抗體藥物研發(fā)的另一種思路,。視頻：抗體雞尾酒在克服腫瘤異質(zhì)性和適應性方面的優(yōu)勢 抗體雞尾酒療法研發(fā)初衷是聯(lián)合不同的抗體協(xié)同進行疾病治療，所以抗體雞尾酒療法中各種組合的抗體不能存在相互抑制干擾,。Roche的Pertuzumab和Trastuzumab就是一對互不干擾的抗體組合,，雖然兩個抗體都結(jié)合HER2抗原,，但兩者的結(jié)合表位不同，沒有競爭關(guān)系,，兩者在體內(nèi)互不影響,。圖5 Pertuzumab和Trastuzumab結(jié)合表位示意圖[5]圖6 Pertuzumab藥代曲線w/wo trastuzumab[6]如果組成雞尾酒療法的抗體具有不同的代謝性質(zhì)或者抗體的毒性反應差別較大，則需調(diào)整給藥方式和劑量,、優(yōu)化抗體配伍比例,、優(yōu)化制劑配方組成等，以平衡不同抗體在體內(nèi)的代謝并降低毒性,。準確可靠的生物分析方法對抗體雞尾酒療法的研發(fā)至關(guān)重要,。抗體雞尾酒療法中的抗體可能針對的是同一抗原,，僅在結(jié)合表位上有所區(qū)別,，因而傳統(tǒng)的基于抗原結(jié)合的間接免疫法并不適用。為了區(qū)別針對同一抗原不同表位的組合抗體,，需要使用抗獨特型（anti-idiotype）抗體?？躬毺匦涂贵w是針對抗體可變區(qū)的抗原決定簇（獨特型）產(chǎn)生的特異性抗體,，能夠直接識別、結(jié)合抗體可變區(qū),，能夠特異性的區(qū)別針對同一抗原的不同抗體,，是雞尾酒療法生物分析中不可或缺的關(guān)鍵試劑。REGN-EB3為3個抗Ebola單克隆抗體雞尾酒療法,，3個抗體均靶向病毒糖蛋白,。通過抗獨特型抗體的使用，能夠?qū)崿F(xiàn)對單一抗體的檢測,。圖9 REGN-EB3與Ebola病毒糖蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)示意圖[8]基于抗獨特型抗體的免疫分析方法是抗體雞尾酒分析的首選,。當抗獨特型抗體不可獲得時，LC-MS/MS方法則是有利的補充方法,。LC-MS/MS方法越來越多的被應用和接受,，質(zhì)譜對于特征片段的鑒定完美匹配了雞尾酒療法對單一抗體進行區(qū)分的要求。Perjeta和Herceptin固定組合制劑（FDC）是目前研究最為成熟的抗體組合,，兩個抗體的靶點都是HER2抗原,，利用LC-MS/MS方法可以實現(xiàn)同時檢測這兩個抗體，并且兩者檢測互不干擾,。圖11 Trastuzumab色譜圖(RT=2.67) [10]圖12 Pertuzumab色譜圖(RT=2.95)[10]圖13 Infliximab(IS)色譜圖(RT=2.84) [10]表1 LC-MS/MS同時檢測血清中Perjeta和Herceptin隨著對疾病治療更優(yōu)方案的需求增加,，單抗藥物的組合使用幾乎成為抗體研發(fā)進程中的一個重要階段，也將有更多的抗體雞尾酒療法被應用到臨床,。2020年下半年歐美市場即將迎來抗體雞尾酒療法的首次批準,，預計會大大刺激抗體市場,，帶起一波抗體雞尾酒研發(fā)熱潮。生物分析對于了解抗體雞尾酒的不同抗體的代謝屬性,，研究抗體-抗體相互作用,，指導抗體雞尾酒制劑配伍具有重要作用。伴隨著抗體雞尾酒療法的興起,，其生物分析方法也將成為藥企和監(jiān)管機構(gòu)關(guān)注的重點,。
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北京陽光德美醫(yī)藥科技有限公司是一家集大/小分子藥物臨床前/臨床PK/PD服務于一體的綜合性研究平臺，可提供全方位的藥代動力學-藥效學和GLP生物分析服務,，專注于解決客戶藥代藥效研究及生物分析中所遇到的挑戰(zhàn),。
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