Molecular Probes? 熒光細(xì)胞追蹤劑和神經(jīng)示蹤劑是用于跟蹤復(fù)雜環(huán)境中細(xì)胞的重要工具,，已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞遷移、創(chuàng)傷愈合及干細(xì)胞分化研究,。這些探針在工作濃度下穩(wěn)定無毒,，可在細(xì)胞內(nèi)保留完好(從幾小時到幾天)，并在生理pH值下發(fā)出亮熒光,。

此外,，Life Technologies可提供覆蓋光譜的各種熒光發(fā)射光顏色，能夠同時檢測細(xì)胞運動及其他重要的細(xì)胞功能,。更多詳情,，請登錄 lifetechnologies.com/celltracing。

表 1. Molecular Probes? 熒光細(xì)胞追蹤探針和示蹤劑,。

一,、 鈣黃綠素 AM 探針

傳統(tǒng)的非固定鈣黃綠素探針是適用于細(xì)胞示蹤和活性研究的示蹤劑,。這些示蹤劑含有可阻斷分子上負(fù)電荷的乙酰氧基甲酯(AM)基團，便于其穿過細(xì)胞膜,。進(jìn)入細(xì)胞后,，非特異性的酯酶會切掉AM，生成細(xì)胞非透過性的極性分子,，高效保留在細(xì)胞內(nèi)數(shù)小時,。與下述的 CellTracker?和 CellTrace?探針不同，鈣黃綠素AM探針只能保留在活細(xì)胞內(nèi),。當(dāng)與細(xì)胞非透過性的核酸染料(如SYTOX? Green染料或PI) 結(jié)合使用時,，鈣黃綠素示蹤劑可利用顯微鏡或流式細(xì)胞儀高效區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。鈣黃綠素探針易于操作,，有效時間為2-8 小時,，具體取決于細(xì)胞類型。

二,、 CellTracker? 探針

CellTracker? 熒光探針可自由通過細(xì)胞膜,，轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)胞非透過性的反應(yīng)產(chǎn)物,。這種細(xì)胞非透過性質(zhì)可在細(xì)胞中存留多代，但不會轉(zhuǎn)移至群體中相鄰的細(xì)胞內(nèi),。導(dǎo)入CellTracker?探針的細(xì)胞通?？砂l(fā)出熒光，至少24小時內(nèi)均可觀察到,，因此,，這些探針是極佳的長期細(xì)胞示蹤劑,。此外,，采用甲醛或戊二醛可固定染色形態(tài),，長期保存標(biāo)記細(xì)胞或組織，有利于潛在的病原體樣本的安全處理,，且與抗染料抗體結(jié)合使用時,，可實現(xiàn)信號放大,。CellTracker?探針不會轉(zhuǎn)移至群體中相鄰的細(xì)胞內(nèi)，是適用于移植細(xì)胞或組織的長期示蹤劑,。通常采用熒光顯微鏡監(jiān)測 CellTracker?探針的信號,，探針有多種熒光顏色可供選擇，適用于多色分析,。

三、 CellTrace? 探針

CellTrace?探針亦可極好地保留在細(xì)胞內(nèi),，一旦它們與蛋白質(zhì)或其他含有胺基的生物分子反應(yīng)，經(jīng)甲醛固定后,，仍可存留在細(xì)胞內(nèi),。這些胺基反應(yīng)性細(xì)胞示蹤劑——包括CellTrace? Violet、CellTrace? CFSE和 CellTrace? Far-Red DDAO-SET探針——均含有琥珀酰亞胺酯,，可與細(xì)胞內(nèi)外的伯胺反應(yīng),。采用CellTrace? Violet探針染色明亮均勻，群體中細(xì)胞間的熒光差異極小，可在熒光直方圖上觀察增殖細(xì)胞的不同代數(shù),。

四,、 Qtracker? 探針

Qtracker?細(xì)胞標(biāo)記試劑盒——提供七種顏色的Qdot?納米晶體——包含將Qdot?納米晶體導(dǎo)入活細(xì)胞所需的試劑，為長期實時追蹤研究提供了一種高效的方法,。這些Qdot?納米晶體含有一種目標(biāo)多肽，可被細(xì)胞選擇性地攝取,，分布于整個細(xì)胞質(zhì)的囊泡內(nèi)。

在細(xì)胞內(nèi),，Qdot?納米晶體可發(fā)出光穩(wěn)定性的強熒光，在連續(xù)照明下可觀察到,，且不會因光漂白作用或降解而消失,。在復(fù)雜的細(xì)胞環(huán)境以及不同的生物學(xué)狀態(tài)下(包括細(xì)胞內(nèi)pH 值,、溫度和代謝活性的改變)均能保持熒光，且可以傳遞至子代細(xì)胞內(nèi),，至少7代,，或者維持至少8天(U2OS細(xì)胞)。Qtracker?細(xì)胞標(biāo)記試劑盒可用于各種應(yīng)用領(lǐng)域,，包括造血干細(xì)胞的體內(nèi)追蹤,、注入神經(jīng)移植物后Schwann細(xì)胞的追蹤以及感染的皮膚創(chuàng)傷內(nèi)的中性粒細(xì)胞存活檢測,。在小動物的體內(nèi)血管成像應(yīng)用中,，可將Qtracker?非靶向量子點注射至小鼠的尾靜脈,，利用小動物體內(nèi)成像(SAIVI?)技術(shù)進(jìn)行血管結(jié)構(gòu)研究,。這些納米晶體可發(fā)出強熒光,，并出現(xiàn)發(fā)射光紅移,，使組織穿透性增加,，消除本底自發(fā)熒光,，PEG表面包覆可使非特異性反應(yīng)最小化,，降低免疫應(yīng)答反應(yīng)。由于 PEG 表面包覆不含反應(yīng)性功能基團,，因此Qtracker?非靶向量子點可以更長時間保留在循環(huán)系統(tǒng)內(nèi),，一次注射的成像時間達(dá)3小時，多次注射則可維持更長時間,。