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細胞周期是細胞內一種隱藏時鐘,，精心安排著細胞的一生——生長與分裂周期。細胞周期作為細胞內外信號交互作用的精密調控過程,，其驅動運轉的引擎就是以CDKs和Cyclins為核心的細胞周期蛋白與細胞周期蛋白依賴性蛋白激酶,。 
在細胞周期的不同時期，不同的Cyclin-CDK復合物驅動著細胞周期的運轉,。
然而,，細胞一旦跳出此輪回，必然會處于增殖失控的狀態(tài),，給機體造成不可避免地傷害,，腫瘤細胞便是如此。那么為了避免細胞無限制增殖,，細胞周期中必然也存在著剎車系統(tǒng),。而CDKs抑制蛋白（CDKIs）就對細胞周期起著抑制的作用。
細胞周期的完成,，最直觀的結果,，就是細胞一分為二。為了保證細胞分裂的忠實性,，細胞設置了一系列關卡,，就是所謂的細胞周期檢查點（check point）。
通常在研究某個基因表達或者藥物對細胞周期的影響,，要么檢測相關明星分子（如Cyclin,、CDK、CKI以及Rb通路和p53通路的明星核心分子）；
要么進行PI（碘化丙啶）染色實驗,，PI是一種插入性核酸熒光染料,，能選擇性地嵌入核酸DNA雙鏈螺旋的堿基之間并發(fā)出熒光。至于后者,，因PI結合的量與DNA的含量成正比例關系,，可通過流式細胞儀來了解細胞周期各個階段的DNA分布狀態(tài)，從而計算出各個細胞周期時相的百分含量,，了解細胞的增殖能力,。在腫瘤病理學研究中，通常以S期細胞比率作為判斷腫瘤增殖狀態(tài)的指標,。
1,、將對數(shù)期的細胞接種于6孔板中（2×105個/孔，根據(jù)細胞大小,、增殖速度適當調整）,，每孔加2 ml培養(yǎng)基培養(yǎng)，分別加入培養(yǎng)基配置的不同濃度藥物1 ml孵育,。2,、藥物作用結束后，懸浮細胞直接離心（1500 rpm,，4 min）收集細胞,，用預冷PBS洗細胞2-3次；而貼壁細胞,，用胰酶消化后,，輕柔吹打細胞，避免細胞受損,、細胞黏連,；離心棄上清（1500 rpm，4 min）,，用預冷PBS洗細胞2-3次,，以去除培養(yǎng)基,、藥物殘留及細胞碎片,。3、細胞沉淀中加入少量 PBS,，輕柔充分重懸細胞,。然后將重懸的細胞加入到 4℃預冷的 70％冰乙醇中固定，輕輕吹打均勻（切記?。,。〔灰獙⒈掖技尤氲郊毎校@樣會造成細胞黏連,，嚴重影響結果）,，封口膜封口，4℃過夜,。1,、從冰箱中拿出細胞，2000 rpm 離心 4 min,，去上清液,，PBS 洗兩次，去上清液,。2,、100ul 100ug/ml RNase A和0.2% Triton X-100重懸細胞，37℃水浴中30 min3,、加入400ul 50ug/ml PI,，渦旋振蕩混勻，室溫避光孵育 30 min,。4,、流式細胞儀檢測細胞周期，一般計數(shù)10萬個細胞,，在激發(fā)波長488nm波長處檢測紅色熒光,，而后用FlowJo 軟件分析細胞周期時相分布，分析時,，使用FL2-w和FL2-A顯示,，去除粘連在一起的細胞。上機檢測時,，必須重懸成細胞懸液再檢測,，否則容易堵儀器管道；如果細胞過多或聚團嚴重,，可先用300目（孔徑40-50um）尼龍網(wǎng)過濾,，再上機檢測。常用的流式檢測法分析細胞周期的方法是根據(jù)橫坐標的細胞DNA含量結合縱坐標的有效細胞數(shù)量來分析的,，如以下細胞周期分布圖：
G0/G1期：流式檢測結果圖的第一個峰,；G1期是DNA含量最少的時期，DNA復制還沒有開始,；G0期是細胞靜止期,，不復制DNA，無法與G1期分開,；而左側第一個峰的左側的一片區(qū)域則為sub-G1期,，該期的細胞都是發(fā)生凋亡的細胞,，和細胞周期沒有關系。S期：在流式結果圖中顯示為第二個不高但很寬的峰,；此時期細胞開始復制到完成復制,，是一個一倍DNA到二倍DNA的過程；G2/M期：流式檢測結果圖的第三個峰,。G2期是DNA復制完成至分裂的一段時間,，此時細胞內含二倍DNA；M期是細胞分裂的過程,，此時細胞內是二倍DNA,，無法與G2期分開。數(shù)據(jù)分析區(qū)（右側紅方框）各時期比值：Dip G1-73.32% at 49.57表示G1期DNA含量平均值為49.57（2N）,，占細胞總數(shù)的73.32%,。
同理，Dip G2-9.58% at 99.15則表示G2期DNA含量平均值為99.15（4N）,，占細胞總數(shù)的9.58%,。CV：表示峰的變異系數(shù),，其分辨率由G0/G1峰的CV來反映。一般CV越小,，峰形越好,，越尖銳；能控制在5%左右是比較好的結果,，一般小于10%就被認可了,。這個指數(shù)在DNA檢測中很重要，因為不同物種之間細微的DNA差別都有很重要的意義,。而影響CV的因素主要包括樣品制備染色過程的人為影響和儀器,，所以建議同一個實驗盡量由一個人在同一臺機器上完成。其他：Aggregates：表示細胞聚集體;Modeled events：表示儀器檢測到的總細胞數(shù)；All cycle events：表示在細胞周期中分析的細胞數(shù)（即排除了細胞碎片和聚集體）細胞周期的檢測常用于研究藥物或者基因等對細胞周期阻滯的影響,，以藥物處理MDA-MB231細胞后的周期分布圖為例,，通過比較Control組和藥物組，發(fā)現(xiàn)藥物處理組的G2/M期峰值變高,，即G2/M期細胞數(shù)量增多,，即藥將其阻滯在G2/M期。注：對于未處理的細胞一般都是分裂間期時間比分裂期長,，即G1-S期＞M期,。
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