|
總結(jié)1 一般都是加酸加堿，以及換體系來整,，還是得多跑板才能找到合適的,。 總結(jié)2 拖尾原因 總結(jié)3 薄層色譜是樣品與硅膠之間的吸附/解吸附的過程，當(dāng)你的樣品與硅膠吸附能力過強(qiáng)的時(shí)候,，就會(huì)造成拖尾（不考慮過載,，過載大多會(huì)造成拖尾）。這時(shí)候需要更強(qiáng)的溶劑系統(tǒng)來解吸附,，因此對(duì)于羧酸類化合物,，需要醋酸或者甲酸來加強(qiáng)洗脫極性；另外,，羧酸的電離也會(huì)造成拖尾,，因此加入醋酸或者甲酸抑制電離，使得薄層點(diǎn)比較圓,。同理,，對(duì)于堿性物質(zhì)，也需要加堿（通常是三乙胺,、二乙胺或者氨水）來加強(qiáng)洗脫極性和抑制電離,。 由于普通的硅膠板都是弱酸性的，所以對(duì)于某些酸敏感的化合物,，需要用堿板,。在鋪板時(shí)，用0.05～0.5％的NaOH代替水來鋪就可以得到堿板了,。 總結(jié)4 最近剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室,，用TLC對(duì)反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)，但是關(guān)于展開劑的資料不多,，我們實(shí)驗(yàn)室大多就是兩個(gè)體系:石油醚/乙酸乙酯,，氯仿/甲醇，其他的就很少了,，所以我下決心把這個(gè)實(shí)驗(yàn)室比較常用的技術(shù)搞清楚,。一種簡單的辦法是根據(jù)你產(chǎn)物的溶解性選擇一種極性最強(qiáng)的溶劑學(xué)（如醇類，乙氰等），再根據(jù)你實(shí)際展開的情況慢慢加入極性弱的溶劑（如四氯化碳,、石油醚,、二氯甲烷等）調(diào)節(jié)體系的極性。以得到最好的展開效果,。把我的祖?zhèn)髅胤礁嬖V你吧 PE(60-90) EtAc/PE=1:2 EtAc/PE/AcOH=15:5:1 EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O=2:1:1:1 8年來我用這四種體系,沒有出現(xiàn)過什么問題我一直在用的是乙酸乙酯：環(huán)已烷,，不斷調(diào)節(jié)比例，直到有滿意的Rf值,，有拖尾時(shí)可能要加酸或堿,，我一般乙酸和三乙胺。我用了好幾年了,，都還好,。不妨一試！ 氨基酸都有專用的展開劑,，常用丁醇和水,，再加酸堿選擇展開劑一般要用混合溶劑：一般要有一種對(duì)所要展開樣品溶解度較大的溶劑,，視樣品的極性,，再選用相應(yīng)的體系。極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統(tǒng)極性較大的用甲醇：氯仿系統(tǒng)極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統(tǒng) 拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸(應(yīng)該交好)甲醇：氯仿對(duì)于胺類比較好我常用的展開劑有：氯仿/甲醇,；環(huán)已烷/丙酮,；醋酸乙酯/石油醚；甲醇/吡啶/水,；等.本人用過的展開系統(tǒng)中,，苯-丙酮用的最多，通過調(diào)節(jié)不同比例可以得到較好的效果俺的： EtOAc/Hexanes Ch2Cl2（EtOAc）/MeOH,， 0-1% TEA or NH3 極性乙酸乙酯和非極性的石油醚按不同比例混合對(duì)一般的都能適應(yīng)人民衛(wèi)生出版社的《分析化學(xué)》（下冊(cè)）有專門的介紹,，很詳細(xì)。我一般用乙酸乙酯和石油醚配成不同比例的混合溶劑,。實(shí)驗(yàn)時(shí)調(diào)整至Rf=0.3--------0.5我們做的氨基酸,用的都是丁醇:醋酸:水二氯甲烷：甲醇,，調(diào)節(jié)不同的配比基本解決大多數(shù)問題. 用二氯甲烷與甲醇體系非常有用，只要調(diào)整好比例,。展開劑的使用一看自己的喜愛,；二看產(chǎn)品特點(diǎn)。我多用氯仿/甲醇或石油醚/乙酸乙酯,！主要是調(diào)節(jié)比例,！掌握了幾種展開劑的比例和極性，處理起來就容易多了,！用乙酸乙酯/正己烷,，必要時(shí)加醋酸或三乙胺。 我常用：正己烷+乙酸乙酯；氯仿+甲醇（常為10：1）,；石油醚+丙酮,。拖尾的話常滴加兩三滴三乙胺了事。過柱最好不用三乙胺,，可以添加1%的二乙胺,，這樣有利于餾分收集后的濃縮和送譜。如果用三乙胺,，在油泵上抽數(shù)個(gè)小時(shí),，送nmr仍可見三乙胺的殘留。同理,，可能的情況下最好用甲酸代替乙酸,。我們這里都是用石油醚和乙酸乙酯，然后不斷的調(diào)比例,，效果不錯(cuò),。我們通常用石油醚，二氯甲烷,，乙酸乙酯,。不斷的點(diǎn)板看，但夏天蒸出來后極性有些小,。拖尾不要緊,，改溶劑過柱子就可以。首先,，選一種易溶你產(chǎn)品的一種不溶的,；接著，按照溶：不溶＝1：2的比例配比,，看一下其展開的情況; 再次,，太高就減少溶的比例，太低就減少不溶的比例,！這樣正常情況下時(shí)可行的,！祝大家好運(yùn)！ 我一般用氯仿打底,，根據(jù)化合物的極性,、第二溶劑的極性、RF值等來考察配比及溶劑種類.當(dāng)然是最便宜,，最安全,，最環(huán)保的了。所以大多選用石油醚,，乙酸乙酯,。文獻(xiàn)中有寫用正己烷的,，太貴了，除非特別需要不要用不然銀子嘩嘩的,，流的比淋洗劑還快,，不過因?yàn)闃O 性很小，有時(shí)還是非它不可,。乙醚也可以用,，但是就是容易睡覺，注意保持清醒別讓溶劑流干了,，那樣柱子也就不爽了,。二氯甲烷也有用的，但是要知道,，它和硅膠的吸附是一個(gè)放熱過程,，所以夏天的時(shí)候經(jīng)常會(huì)在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時(shí)候會(huì)好一些,。甲醇,，據(jù)說能溶解部分的硅膠，所以產(chǎn)品如果想過元素分析的話要留神,，應(yīng)該經(jīng)過后繼處理,，比如說重結(jié)晶等。其他的溶劑用的相對(duì)較少,，要依個(gè)人的不同需要選擇了,。由于某些原因,，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛）,，我們這里是用10升或25升的塑料桶裝的，就要注意這些工業(yè)品的純度是較低的,。經(jīng)常能夠從送來的大桶底部看見有色的雜質(zhì),，其他的雜質(zhì)就可想而知了，所以在比較嚴(yán)格的柱分時(shí)就要對(duì)溶劑重蒸,。當(dāng)然過原料時(shí)就可以免去這一步了,，反正下面還有提純的方法。另外溶劑在過柱子后最好也回收使用,，一方面環(huán)保,，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費(fèi)，缺點(diǎn)是要消耗一定的人工,。這里要注意的是,，一般在過柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會(huì)導(dǎo)致極性的變化,，一般會(huì)使得極性變大,，在梯度淋洗時(shí)比較合適,，正好極性越來越大了。在過完柱子后,，溶劑最后回收要采用常壓,，因?yàn)樵跍p壓旋蒸時(shí)會(huì)有部分低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一起出來，常壓時(shí)就會(huì)減少這種現(xiàn)象,，如果雜質(zhì)和你下面要過的樣品有反應(yīng)那就慘了我的處理方法是在點(diǎn)板前,，取一點(diǎn)要點(diǎn)板的液體稀釋，只要足夠稀則可．同意,，前幾天點(diǎn)板時(shí)沒有稀釋,，還被老板訓(xùn)了一下。 要求濃度為5%左右柱層析和TLC是有機(jī)化學(xué)工作者必須下苦功夫的兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)技術(shù),。這兩項(xiàng)技術(shù)掌握與否,，對(duì)于提高實(shí)驗(yàn)的效率至關(guān)重要。常見的例子是：在柱層析時(shí),，由于層析柱中的硅膠填料裝得不均勻（沒有填嚴(yán)實(shí)）,，使得柱子在淋洗過程中就因?yàn)槌霈F(xiàn)太多氣泡變花，導(dǎo)致分離效果不好,。更常見的例子是：層析柱雖然裝得不錯(cuò),，但是由于淋洗劑選擇不恰當(dāng)，結(jié)果導(dǎo)致幾十毫克產(chǎn)品,，用了幾百毫升淋洗劑都還沒有完全分離,。分離同樣的東西，熟手可能只需要半個(gè)小時(shí),，而一個(gè)層析技術(shù)不過關(guān)的人可能半天都不能得到純品,。由此可見，這兩項(xiàng)技術(shù)掌握與否,，對(duì)于提高工作效率,，減輕工作量，減少有機(jī)溶劑的使用,，從而對(duì)身心健康和環(huán)境保護(hù)都有明顯的作用,。 薄層色譜小知識(shí) 1、怎樣提高點(diǎn)樣效率,？點(diǎn)樣是造成TLC定量誤差的主要來源,。 定量毛細(xì)管更適合較小體積的點(diǎn)樣；微量注射器更適合較大體積的點(diǎn)樣,。這主要是因?yàn)槲⒘孔⑸淦魇苄馀?、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細(xì)管理體制的占樣誤差,，建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細(xì)管,。但應(yīng)注意更換樣品時(shí),，應(yīng)將毛細(xì)管用超聲波或不同極性溶課劑清洗干凈。在制備樣品時(shí),，溶樣溶劑黏度不能過高,，以便于點(diǎn)樣；溶劑沸點(diǎn)過低則進(jìn)樣體積易變,，過高則會(huì)改變展開劑組成,；對(duì)樣品溶解度過高會(huì)使樣點(diǎn)發(fā)生空心現(xiàn)象，常用的溶劑為甲醇,、乙醇,、丙酮。經(jīng)典TLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑3mm點(diǎn)間距離1-2cm底邊距離1.5cm;HPLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑1mm點(diǎn)間距5mm底邊距1cm. 2,、展開劑的選擇 TLC與HPLC相比,，一個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn)就是流動(dòng)相的選擇具有更大的靈活性，流動(dòng)相的選擇的目的是使絕大部分樣品的Rf值位于0.1－0.7之間并達(dá)到較好的分離,，與此對(duì)應(yīng)的是流動(dòng)相要有適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度和組成,。流動(dòng)相強(qiáng)度越大，溶質(zhì)Rf值越大,，但很可能降低分離能力,；另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物、根據(jù)相似相溶原理,，要使用多元溶劑體系,。一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個(gè)二元溶劑體系,，通過調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合Rf值,，適合的Rf值找到后，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個(gè),，以這三個(gè)組成為三點(diǎn)組成一個(gè)三角形,，則可看到：三角形頂點(diǎn)是二元體系，邊是三元體系,，三角形內(nèi)是四元體系，并且極性一致,，可根據(jù)幾何原理得出任一點(diǎn)組成,，這種方法較為直觀， 也較簡單,。 理想的顯色希望靈敏度高,，斑點(diǎn)顏色穩(wěn)定、斑點(diǎn)與背景間的對(duì)比度好,，斑點(diǎn)的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比,，在樣品組成并不完全已知的情況下,，通用顯色方法顯得尤為重要，通用顯色方法主要有： 1,、紫外照射法：方便,、不破壞樣品； 2,、碘蒸氣法：通用性強(qiáng),，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨(dú)使用； 3,、熒光試劑：制造熒光背景,，使原來紫外下無熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯,； 展開劑選擇的大概原則 選擇展開劑一般要用混合溶劑：一般要有一種對(duì)所要展開樣品溶解度較大的溶劑,，視樣品的極性，再選用相應(yīng)的體系 極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統(tǒng)極性較大的用甲醇：氯仿系統(tǒng) 極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統(tǒng)拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸 我個(gè)人覺得以下的經(jīng)驗(yàn)和所遇到的問題也很實(shí)用 摘自豆丁網(wǎng)關(guān)于展開劑： 分離的樣品酸性比較大,，一般在展開劑中加酸加甲酸是因?yàn)樵摌悠肥撬嵝缘?，加酸的量和該物質(zhì)的酸性成正比關(guān)系，加水可能是因?yàn)槟愕臉悠肥擒疹惖挠盟崴鲆幌戮彌_,，目的就是讓斑點(diǎn)圓滑,，不脫尾，展距良好,。飽和也非常重要,，邊緣效應(yīng)很嚴(yán)重的不妨用下端浸在展開劑中的濾紙貼在展開缸的內(nèi)壁，這樣飽和效果會(huì)好一些 1)在層析缸口涂適量凡士林,，增加密封性,； 2)以展開劑邊緣效應(yīng)的大小，確定展開劑平衡時(shí)間的長短,，一般平衡時(shí)間在30分鐘即可,。有機(jī)溶劑的極性，甲醇>氯仿,，因此在氯仿：甲醇：氨水（10:1:0.6）這個(gè)展開劑中,，如果極性略大，可適當(dāng)降低甲醇比例,；如極性太小,，可適當(dāng)增大甲醇比例。 氯仿：甲醇：氨水 10:1:0.6 和20：2：1.2 極性肯定是相同的,，這有問題嗎,？ 另外還有一個(gè)問題，這個(gè)展開劑中,，甲醇用量較小,，而甲醇又易揮發(fā),，容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，要特別注意展開劑的平衡和層析缸的密封,。 不同的展開系統(tǒng)意思是其中至少應(yīng)該有一種溶劑不同（最好是不同分類組的溶劑）,，而不是比例不同?；蛘呤褂貌煌墓潭ㄏ?。關(guān)于展開： TLC中樣品拖尾現(xiàn)象是什么原因?該如何解決? 2.TLC中樣品跑成幾乎為一條線,斑點(diǎn)沒有清晰的分離,想請(qǐng)教一下這是什么原因造成的?一般情況下該如何解決? 造成問題1的原因基本相同： a、對(duì)于一些具有酸堿性的化學(xué)成分,，在溶液中部分電離,，事實(shí)上展開時(shí)存在分子、離子兩 種狀態(tài),，以中性的有機(jī)試劑展開必然會(huì)出現(xiàn)兩種層析行為,，造成脫尾甚至是一條線。 b,、展開劑選擇不當(dāng) c,、點(diǎn)樣量過大，樣品超載解決辦法： a,、在展開劑中加幾滴甲酸或冰醋酸,； b、展開時(shí)以氨水飽和 c,、減少點(diǎn)樣量 d,、參考文獻(xiàn)，調(diào)整展開劑種類,、比例 我想問問,，關(guān)于TLC二次展開，是在第一次展開顯色后再在繼續(xù)第二次展開,，還是在第一次展開后,，換另一種展開劑接著展開啊,？,？ 請(qǐng)哪位大俠指點(diǎn)一下關(guān)于TLC的二次展開。二次展開是依據(jù)樣品定的,，但肯定要在第一次展開后,，將板晾干或吹干，再放入另一種展開劑中展開,，有的樣品二次展開還要換展開方向，和原方向垂直,。所以要以實(shí)際分離樣品需要而定,。一般是因?yàn)闃悠烦煞侄?，極性差別有的大，有的 關(guān)于顯色： 在工作中研究過用硫酸乙醇顯色作定量分析的品種,，但凡加了CMC的板都易烘糊,，尤其是溫度高于100度時(shí)，后改用不加CMC輔的水板來作,，就不會(huì)有烘糊現(xiàn)象,，故也可推論CMC易于與硫酸起糊化反應(yīng)。感覺輔水板關(guān)鍵是硅膠G與水的比例要達(dá)1：3.5左右,，而且研磨后要盡快涂布,，不能易于凝固而難于涂布，我是百思不得其解,，難道CMC還有類似穩(wěn)定劑的作用 2. “0.5%的板加熱時(shí)間長了就會(huì)黑”,，是在層析完，顯色后吧,，我也遇到過同樣的情況,，這只有嚴(yán)格控制加熱顯色的時(shí)間。 這個(gè)問題應(yīng)該是這樣回答：但凡加了CMC的板都易烘糊,，尤其是溫度高于100度時(shí),，若改用不加CMC輔的水板來作，就不會(huì)有烘糊現(xiàn)象,，但不加CMC輔的板又太軟,，點(diǎn)樣時(shí)容易點(diǎn)出洞，有個(gè)好辦法是將CMC的濃度調(diào)至0.1%,，這樣就不易烘黑的,。不信你試試，我們這邊藥檢所都這樣做的 3. 關(guān)于薄層板加熱變黑的問題,，其實(shí)很容易解決：當(dāng)噴完顯色劑后不用在放烘箱里烘了,，可以用電吹風(fēng)在板子背面吹吹就能顯色了．我們實(shí)驗(yàn)室里一般都采用此法，簡便,、快潔．如果一非想使用烘箱烘的話,，一定要用帶玻璃窗的，當(dāng)看到顯色了就取出,，不然不好控制顯色時(shí)間,，時(shí)間過長，ＣＭＣ容易碳化變黑 4．各位樓主真是經(jīng)驗(yàn)豐富,，我鋪的0.5%的板加熱時(shí)間長了就會(huì)黑,，有什么好著嗎？ 根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)，薄層版變黑與CMC－Na的濃度過大有關(guān),，如果你留意的話,，你會(huì)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)顯色劑中有濃硫酸時(shí),，加熱時(shí)間稍長就會(huì)變黑（其他顯色劑是沒事的）,，我老師說這是因?yàn)闈饬蛩岚袰MC－Na炭化了，其實(shí)[color=blue=這種情況你只要適當(dāng)降低CMC-Na的濃度就可以了,，當(dāng)然如果不加CMC-Na的話容易把板弄破,。一般我都是顯色后用電吹風(fēng)吹的，要均勻吹,，電吹風(fēng)離板的距離要遠(yuǎn)些,，防止部分會(huì)黑。 另還要注意顯色劑,，如果顯色劑中含有硫酸,，加熱時(shí)間一定要掌握好，不可太長,。 5．CP2000中277頁蘇氨酸的TLC的其它氨基酸檢查似乎有問題: ...以'正丁醇\丁酮\濃氨溶液\水'為展開劑, 展開后,晾干,噴以茚三酮的丙酮溶液(1-50),... 茚三酮與濃氨溶液起顯色反應(yīng), 弄得整塊板都有色,茚三酮氧化蘇氨酸后再與釋放出的氨氣起反應(yīng)生成的點(diǎn)在整塊板中尚能看到,其它氨基酸就別想看了. 氨基酸類的薄層鑒別過程中,，顯色前先將展完的板子在烘箱內(nèi)烘一段時(shí)間，從而確保展開劑揮干凈,，效果不錯(cuò) ,。 聲明: |
|
|
