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食用菌液體菌種由于其有利于高效率、工廠化,、規(guī)范化栽培,，解決了食用菌集約化生產(chǎn)中的瓶頸制約難題，且與固體菌種相比具有生產(chǎn)周期短,、菌齡一致,、出菇齊、成本低,、純度高,、活力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，越來(lái)越受到食用菌栽培者的青睞,，已成為食用菌產(chǎn)業(yè)的發(fā)展趨勢(shì),。但由于發(fā)酵罐的操作需要較強(qiáng)的專業(yè)知識(shí)，提高發(fā)酵成功率一直是普通生產(chǎn)者的使用難題,。筆者經(jīng)過(guò)幾年對(duì)70型發(fā)酵罐的生產(chǎn)實(shí)踐,，總結(jié)出了該設(shè)備高成功率的實(shí)用規(guī)范化操作規(guī)程，供大家借鑒,。 食用菌液體菌種生產(chǎn)流程：罐的清洗和檢查－煮罐－配料－滅濾芯、無(wú)菌水,、接種槍管－上料－滅菌(安裝濾芯計(jì)時(shí)開(kāi)始時(shí)開(kāi)氣泵吹干濾芯)－降溫(先接進(jìn)氣管后放,，并瓶)－發(fā)酵罐接種(第2天裝袋滅菌)－培養(yǎng)一接菌袋(瓶)。 1 清洗與檢查 發(fā)酵罐在每次使用后或再次使用之前都必須進(jìn)行徹底清洗,，除去罐擘的菌球,、菌塊、料液及其它污物,。對(duì)于內(nèi)壁粘附的污物可以用木棒包扎軟布揩拭,，洗罐水從罐底接種閥排出。如有大的菌料(塊)不能排出,，可卸下進(jìn)氣管的噴嘴排出菌料(塊),。清洗的標(biāo)準(zhǔn)：罐內(nèi)壁無(wú)懸掛物，無(wú)殘留菌球,，排放的水清澈無(wú)污物,。 罐清洗完畢即可加水，加水量以超過(guò)加熱管為宜(絕對(duì)禁止加熱管干燒)。然后啟動(dòng)設(shè)備,，觀察檢查控制柜,、加熱管工作是否正常，各閥門有無(wú)滲漏,，檢查合格方能開(kāi)始工作,。 2 煮灌 正常生產(chǎn)不須煮罐，上一次生產(chǎn)完只需將罐洗凈就可進(jìn)入下一批生產(chǎn),。如果有下列情況之一者須要煮罐：①新罐,，初次使用須要煮罐；②上一次污染雜菌的罐,；③更換生產(chǎn)品種的罐,；④長(zhǎng)時(shí)間不用的罐。 煮灌是對(duì)罐內(nèi)進(jìn)行預(yù)消毒的過(guò)程,，具體操作方法：①關(guān)閉罐底部的接種閥和進(jìn)氣閥,，把水從進(jìn)料口加入至視鏡中線，蓋上進(jìn)料口蓋,，擰緊,，關(guān)閉排氣口。②啟動(dòng)電源,，按控制柜滅菌鍵4s,，屏幕上兩個(gè)加熱指示燈亮，此時(shí)設(shè)備進(jìn)入滅菌狀態(tài),。③當(dāng)溫度達(dá)到100℃時(shí)排放冷氣,，微微打開(kāi)排氣閥直至滅菌結(jié)束。④當(dāng)控制柜顯示屏上的顯示溫度123℃,、壓力表壓力0.12MPa時(shí),，控制柜自動(dòng)計(jì)時(shí)，顯示屏上交叉顯示溫度和計(jì)時(shí)時(shí)間,。當(dāng)時(shí)間達(dá)35min后,，控制柜自動(dòng)報(bào)警，此時(shí)按控制柜報(bào)警停止鍵,，并關(guān)閉排氣閥,，悶20min后，打開(kāi)排氣閥,、接種口,、進(jìn)氣口，把罐內(nèi)的水放掉,，煮罐結(jié)束,。在煮罐的同時(shí)進(jìn)行煮料,、滅濾芯及接種槍。 3 濾芯,、濾芯上蓋及進(jìn)氣管,、接種槍及軟管的滅菌 拆下濾芯外殼滅菌，也可整體滅菌,。進(jìn)氣管口用8～10層醫(yī)用脫脂紗布包扎,。接種槍及軟管口用8～10層醫(yī)用脫脂紗布包扎。裝鍋時(shí),，濾芯向下,，濾芯上蓋接口處的出氣管無(wú)折角、盤管無(wú)折角,，口向上,，瓶上蓋一層聚丙烯塑料膜。0.05MPa排氣循環(huán)2次或打開(kāi)排氣閥待冒大氣5～10min,，0.11MPa溫度121℃計(jì)時(shí)40min,，保持0.11～0.15MPa，低于0.11MPa要重新計(jì)時(shí),。 4 上料 關(guān)閉下端進(jìn)氣閥和接種閥(出料口),，將漏斗插入進(jìn)料口，將料液由進(jìn)料口倒人或用水泵抽入處理好的發(fā)酵罐中,，加泡敵3瓶蓋(礦泉水瓶蓋)約12mL,，用水沖洗煮料鍋，裝料量為罐體總?cè)莘e的60％～80％,，70型加量(45土5)L,。加料高度以高于視鏡上邊緣10cm為宜(至標(biāo)牌l一半處，最高不超過(guò)標(biāo)牌1),。擰緊進(jìn)料口蓋,，以防泄氣。 5 培養(yǎng)基滅菌 關(guān)閉所有閥門,，啟動(dòng)電源，按控制柜滅菌鍵4s,，加熱I、Ⅱ的指示燈亮，此時(shí)進(jìn)入滅菌狀態(tài),?？刂乒耧@示屏的顯示溫度100℃時(shí)排放冷氣，微微打開(kāi)排氣閥直至滅菌結(jié)束,。在加熱前期(100℃前)料液很少翻騰,，發(fā)酵罐底部料液因沉淀粘度增大更易于粘附于加熱棒上變糊，料液中出現(xiàn)有少量糊塊或小片。為防止產(chǎn)生糊料,，可在培養(yǎng)基達(dá)到100℃前,，使未過(guò)濾的空氣直接通入以起到攪拌作用。 當(dāng)控制柜顯示屏上的溫度123℃,、壓力表壓力0.12MPa時(shí),，控制柜自動(dòng)計(jì)時(shí)，顯示屏上交叉顯示溫度和滅菌時(shí)間,。計(jì)時(shí)開(kāi)始時(shí)排料,，在35min內(nèi)前、中,、后期(0,、17、30min)排3次料,，排料方法是微開(kāi)進(jìn)氣口和接種口閱門,，有少量氣、料排出即可,，每次排料3～5min,。3次共排料3～5L，少于3L達(dá)不到目的,，大于5L浪費(fèi)(每升可接50袋),。排料目的，一是排出閥門處生料,，二是對(duì)閥門管路進(jìn)行殺菌,。當(dāng)滅菌計(jì)時(shí)到35min，控制柜自動(dòng)報(bào)警,，此時(shí)按控制柜停止報(bào)警鍵,，培養(yǎng)基滅菌結(jié)束。 滅菌時(shí),，打掃煮料用具,，安裝空氣過(guò)濾器(濾芯必須在使用之前30min滅好菌)，在滅菌計(jì)時(shí)打開(kāi)氣泵(氣泵自打開(kāi)后一直不可停),，此時(shí)不接進(jìn)氣管,，使壓縮機(jī)于吹30min，目的是吹于濾芯,。 6 培養(yǎng)基冷卻 培養(yǎng)基冷卻,，是把培養(yǎng)基溫度由123℃降至25～28℃的過(guò)程?？刹捎脙煞N冷卻方法：一是通冷水,，利用循環(huán)冷卻水進(jìn)行冷卻降溫,。二是接管通氣，在培養(yǎng)料滅菌最后一次放料后,，用火焰灼燒進(jìn)氣口10～20s,，迅速接上進(jìn)氣管，但由于此時(shí)罐壓還很高,，不能立即通氣,，可通過(guò)調(diào)整貯氣罐(也叫油水分離器)底閥使氣壓維持在0.12MPa左右，同時(shí)緩慢開(kāi)大培養(yǎng)罐頂部的排氣閥,，待罐壓降至0.1MPa時(shí)即可關(guān)閉貯氣罐底閥,，微開(kāi)排氣閥，“先接后放”,，待貯氣罐的壓力高于罐壓0.02MPa開(kāi)閥進(jìn)氣,，使培養(yǎng)基在氣體的攪拌下迅速降溫，并一直通氣供氧直至培養(yǎng)結(jié)束,。待高于培養(yǎng)溫度2℃關(guān)掉冷卻水,，可延長(zhǎng)加熱管壽命。正常情況下,，70型發(fā)酵罐冷卻至培養(yǎng)溫度約需60min,。 7 罐內(nèi)接種 首先要準(zhǔn)備好火圈(棉花纏緊，用紗布套上),、火機(jī),、95％工業(yè)酒精、手套(耐熱,、耐火,，不可用石棉手套，和預(yù)濕手套等用品,。然后開(kāi)大排氣閥,，罐壓接近0時(shí)關(guān)閉。利用火焰保護(hù)進(jìn)行罐內(nèi)接種,，把火圈放在進(jìn)料13的上方點(diǎn)燃,。快開(kāi)進(jìn)料口蓋(氣泵不能關(guān)閉),。從火焰的中部將橡膠塞拔下,，迅速倒入菌種，迅速把進(jìn)料口蓋過(guò)火焰燒后蓋好,，擰緊，熄滅火焰,，移走火圈接種完畢,。 8 培養(yǎng) 啟動(dòng)設(shè)備控制柜進(jìn)入培養(yǎng)狀態(tài),，微開(kāi)排氣閥使罐壓至0.02～0.04MPa，并檢查培養(yǎng)溫度和空氣流量1.2m3/h以上,，即可進(jìn)入培養(yǎng)階段,。根據(jù)品種溫型，選擇培養(yǎng)程序,，常規(guī)品種選培養(yǎng)I檔(24～26℃),，高溫品種選培養(yǎng)Ⅱ檔(28～31℃)。設(shè)備啟動(dòng)后自動(dòng)進(jìn)入培養(yǎng)I程序,，按鍵控制柜自動(dòng)轉(zhuǎn)換培養(yǎng)Ⅱ程序,，在培養(yǎng)過(guò)程中根據(jù)菌絲的溶氧要求控制供氧量，一般來(lái)講控制空氣流量在1.2～1.5 m3/h(若低檢查管路,，更換墊),，對(duì)于各種食用菌菌種都較為合適。為降低氣泵工作壓力,，可將流量計(jì)調(diào)至最大,，此時(shí)罐內(nèi)壓力為0.02MPa，過(guò)濾系統(tǒng)的壓力在0.04～0.06MPa,。罐壓低于0.02MPa易染雜菌,，高于0.04MPa會(huì)降低壽命，氣體氣泡直徑變小,，溶氧減少,，高壓時(shí)CO2溶解度大于O2。每天放貯氣罐底下水,。 9 取樣觀察 接種24h以后,，每隔12h可從接種口取樣1次，觀察菌種萌發(fā)和生長(zhǎng)情況.一般三看一聞：一看菌液顏色,，正常菌液顏色純正,。雖有淡黃、橙黃,、淺棕色等顏色,，但不混濁，大多越來(lái)越淡(蜜環(huán)菌,、雞腿菇,、木耳變深)；二看菌液澄清度,，大多澄清透明(木耳,、靈芝有些亂菌絲)，培養(yǎng)前期略顯渾濁,，培養(yǎng)后期菌液中沒(méi)有細(xì)小顆粒及絮狀物,，因而菌液會(huì)越來(lái)越澄清透明,，否則為不正常；三看菌球周圍毛刺是否明顯及菌球數(shù)量的增長(zhǎng)情況,，食用菌菌球都有小小毛刺,，或長(zhǎng)或短，或軟或硬(白金針菇硬刺),。在48～72h菌球濃度增長(zhǎng)較快,，體積百分比濃度≥80％即可接袋。若變渾濁,、霉味,、酒味，顏色深說(shuō)明已壞,。一聞是聞菌液氣味,，料液的香甜味隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)越來(lái)越淡，后期只有一種淡淡的菌液清香味,。木耳,、金針菇香味淡，白靈菇香味濃,，靈芝有藥味,，香菇淡酒糟味。 注：實(shí)際接袋時(shí)間以取樣為準(zhǔn)：靜置5min,，菌球既不漂浮,，也不沉淀，菌液澄清透明,，菌球,、菌液界限明顯，袋內(nèi)溫度降至30℃以下(第l天接液體罐,，第2天裝袋),。若無(wú)菌袋，關(guān)閉啟動(dòng)電源,，冷水降至15℃下,，可保持2d。 10 接菌包 液體菌種培養(yǎng)好后,，在火焰的保護(hù)下接好接種管,，不停泵，關(guān)小排氣閥,，待壓力穩(wěn)定在0.03～0.05 MPa時(shí)接種,。 11 注意事項(xiàng) ①濾芯，耐蒸汽殺菌130℃200h,。當(dāng)不用時(shí),，應(yīng)拆下用報(bào)紙包上放在陰涼干燥處保存。使用時(shí)禁止料液倒流損壞濾芯,，如發(fā)現(xiàn)發(fā)酵罐倒流現(xiàn)象時(shí)，應(yīng)把濾芯用熱水浸泡(不能刮,、不能刷洗),，打開(kāi)壓縮機(jī)通氣流將各孑L的料液吹出，陰涼處涼干,。②培養(yǎng)過(guò)程中突然停電,，應(yīng)立即關(guān)閉排氣閥和進(jìn)氣閥，并用打氣筒在貯氣罐的進(jìn)氣口打氣(進(jìn)氣罐內(nèi)的氣體必須經(jīng)過(guò)過(guò)濾器的過(guò)濾),，待賈l：氣罐的壓力達(dá)到0.10MPa時(shí),，打開(kāi)進(jìn)氣閥進(jìn)氣，可聽(tīng)到“咕嚕,、咕?！钡倪M(jìn)氣聲。當(dāng)氣體進(jìn)罐的聲音漸弱時(shí),，關(guān)閉進(jìn)氣閥,，再次打氣。如此反復(fù)操作,，直到罐壓升至0.05～0.10MPa時(shí)保壓即可,，待來(lái)電正常供氣培養(yǎng)。也可用氧氣瓶代替打氣筒持續(xù)向罐內(nèi)供氣培養(yǎng),，直至來(lái)電再進(jìn)入正常培養(yǎng)狀態(tài),。 |
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