2017年1月1日,，F(xiàn)H（佛羅里達(dá)州立醫(yī)院）實(shí)驗(yàn)室提供PD-L1（程序性死亡配體1，CD274或B7-H1）的免疫組化檢測,，這項(xiàng)技術(shù)使用SP263單抗（Spring Biosciences/Ventana）,，檢測對(duì)象包括非小細(xì)胞肺癌（NSCLC），尿路上皮癌及其他類型的癌癥,。在此,，總結(jié)其背景、如何判讀,、如何報(bào)告等重要信息,，供病理醫(yī)師參考。

生物學(xué)簡述：PD-1（程序性細(xì)胞死亡蛋白-1或CD279）是細(xì)胞毒性T細(xì)胞上的一種細(xì)胞膜蛋白受體,，它介導(dǎo)細(xì)胞失活（減少增殖）和降低自身免疫,。PD-L1是一種跨膜蛋白（也是PD-1的兩個(gè)配體之一），由抗原提呈細(xì)胞（即樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞）表達(dá),，抑制細(xì)胞免疫系統(tǒng),。癌細(xì)胞表達(dá)PD-L1使細(xì)胞毒性T細(xì)胞失活，逃避免疫攻擊,。針對(duì)PD-1（和PD-L1）的抗體可發(fā)揮中和作用,，避免細(xì)胞毒T細(xì)胞失活，從而促進(jìn)細(xì)胞介導(dǎo)的對(duì)癌細(xì)胞的免疫攻擊。這種癌癥治療方法被稱為免疫檢查點(diǎn)抑制,，簡稱免疫療法（不同于“靶向治療”）,。

2015年10月2日，F(xiàn)DA批準(zhǔn)Merck生產(chǎn)的Keytruda（pembrolizumab,，一種針對(duì)PD-1的單克隆抗體）用于治療晚期NSCLC（非小細(xì)胞肺癌）,。同時(shí)批準(zhǔn)DAKO的免疫組化檢測（PD-L1免疫組化22C3 pharmDx試劑盒）作為“伴隨檢測”。FDA批準(zhǔn)Keytruda是基于61例患者的臨床研究數(shù)據(jù),，這些患者用DAKO的PD-L1免疫組化22C3 pharmDx試劑盒檢測,，腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)>50%。其中41%的患者看到腫瘤縮小,，但這些都是部分反應(yīng),。Keytruda最初被FDA批準(zhǔn)用于治療轉(zhuǎn)移性黑色素瘤（2014年9月）。

隨后一周,，在2015年10月9日,，F(xiàn)DA擴(kuò)展Opdivo（nivolumab，一種針對(duì)PD-1的單克隆抗體,，由Bristol-Myers Squib生產(chǎn)）的治療：NSCLC,。同樣，批準(zhǔn)DAKO的另一項(xiàng)免疫組化檢測（PD-L1免疫組化22-8 pharmDx試劑盒）,，用于檢測非小細(xì)胞肺癌FFPE組織的PD-L1表達(dá),，作為“補(bǔ)充診斷”以預(yù)測治療反應(yīng)。FDA之前批準(zhǔn)Opdivo（2015年2月）用于治療（化療）失敗的轉(zhuǎn)移性鱗狀非小細(xì)胞肺癌,。DAKO的PD-L1免疫組化試驗(yàn)結(jié)果似乎能預(yù)測Opdivo的生存獲益,，但PD-L1高表達(dá)不是Opdivo治療指征。在引用的研究中,，患者被分為PD-L1陰性組（＜1%的腫瘤細(xì)胞表達(dá)PD-L1）和PD-L1陽性組,。PD-L1陽性組患者根據(jù)PD-L1表達(dá)率又分為：（1）1~5%的腫瘤細(xì)胞，（2）5~10%的腫瘤細(xì)胞,，（3）≥ 10%的腫瘤細(xì)胞,。腫瘤細(xì)胞PD-L1的表達(dá)率越高，Opdivo治療的存活期越長,。PD-L1免疫組化28-8 pharmDx檢測的批準(zhǔn)文件中指出PD-L1的表達(dá)被定義為“任何強(qiáng)度的陽性細(xì)胞膜染色的腫瘤細(xì)胞的百分比“,，檢測到PD-L1的這種表達(dá)與Opdivo增強(qiáng)生存”可能相關(guān)“。

2016年5月18日,，F(xiàn)DA批準(zhǔn)Genentech /羅氏生產(chǎn)的Tecentriq（atezolizumab,，一種針對(duì)PD-L1[不是PD-1]的單克隆抗體）用于治療放化療失敗的轉(zhuǎn)移性尿路上皮癌。2016年10月又批準(zhǔn)其用于化療后進(jìn)展的轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌,。在引用的研究中,，使用OptiView檢測試劑盒基于Ventana IHC分析PD-L1（SP142,，針對(duì)PD-L1的兔單克隆抗體試劑盒），同時(shí)評(píng)估PD-L1在腫瘤細(xì)胞（非小細(xì)胞肺癌,，≥ 50%的腫瘤細(xì)胞染色,，任何強(qiáng)度）和腫瘤浸潤免疫細(xì)胞（非小細(xì)胞肺癌≥ 10%免疫細(xì)胞染色和尿路上皮癌≥ 5%免疫細(xì)胞染色為陽性）的表達(dá)。Tecentriq在許多臨床試驗(yàn)中也被積極研究,，用于幾種實(shí)體腫瘤的免疫治療,。

▼用于伴隨診斷分析的可選的預(yù)測性PD-L1抗體

眾所周知,，PD-L1可表達(dá)于許多類型的癌癥，包括但不限于黑色素瘤,、三陰性乳腺,、胃、食道,、腎臟,、膀胱、睪丸癌,、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和肝癌,。這四種藥物對(duì)多種癌癥類型的臨床試驗(yàn)仍在進(jìn)行中。需要注意的是,，針對(duì)PD-1免疫檢查點(diǎn)的免疫療法,，臨床反應(yīng)與腫瘤細(xì)胞通過免疫組化檢測PD-L1的表達(dá)并不完全相關(guān)。一些PD-L1陽性的腫瘤沒有反應(yīng),，約10%的PD-L1陰性腫瘤有臨床反應(yīng),。

腫瘤科醫(yī)師和病理學(xué)家知道腫瘤細(xì)胞對(duì)PD-L1的表達(dá)具有時(shí)空異質(zhì)性。PD-L1陰性腫瘤將來復(fù)發(fā)時(shí)可能變成PD L1陽性（反之亦然）,?；顧z小組織可能產(chǎn)生假陰性結(jié)果。Ventana的PD-L1 IHC檢測sp263定義的PD-L1“陽性”表達(dá)為> 25%的腫瘤細(xì)胞染色（胞質(zhì)或膜質(zhì),，任何強(qiáng)度）,；然而，建議病理學(xué)家報(bào)告測試結(jié)果時(shí)不僅寫 / -,，而且還包括估計(jì)百分比及腫瘤細(xì)胞的染色強(qiáng)度,，類似于我們所做的ER / PR在乳腺癌中的免疫組化報(bào)告。

在Samuel Yousem博士的幫助（UPMC病理主任）,，我們已經(jīng)成功地驗(yàn)證了30例SP263 IHC結(jié)果和重復(fù)性研究（包括切除和活檢）,。這個(gè)測試沒有細(xì)胞塊或脫鈣石蠟包埋組織塊進(jìn)行驗(yàn)證。

報(bào)告結(jié)果舉例如下：

1．PD-L1（sp263）：陰性（無腫瘤細(xì)胞顯示細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜的免疫反應(yīng)）

2．PD-L1（sp263）：陰性（10%的腫瘤細(xì)胞顯示中等強(qiáng)度的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜的免疫反應(yīng)）

3．PD-L1（sp263）：陽性（40%的腫瘤細(xì)胞顯示輕度的細(xì)胞膜的免疫反應(yīng)）

染色結(jié)果的判讀,，有必要區(qū)分染色的腫瘤細(xì)胞與染色的免疫細(xì)胞（巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞）,，因?yàn)楹笳邞?yīng)該被排除在判讀之外（即使在原始的研究中包含它們）,。我已經(jīng)為你提供了一些參考照片。我們用成熟的胎盤實(shí)質(zhì)作為陽性對(duì)照（滋養(yǎng)細(xì)胞）,，放在測試片上,。關(guān)于這個(gè)重要的預(yù)測性檢測項(xiàng)目，你可以放心地研究自己的樣本,，獲取更多信息,。

▲圖1 PD-L1陽性對(duì)照（胎盤，20X）

▲圖2 PD-L1陽性肺腺癌（切除標(biāo)本,，20X）

▲圖3 PD-L1陰性肺腺癌（切除標(biāo)本,，10X）混合有巨噬細(xì)胞陽性表達(dá)

▲圖4 PD-L1陰性肺腺癌（切除標(biāo)本，40X）混合有巨噬細(xì)胞陽性表達(dá)（解釋結(jié)果很有挑戰(zhàn)性）

▲圖5 PD-L1陽性在肺鱗癌（支氣管鏡活檢,，20X）

▲圖6 PD-L1陽性在肺的肉瘤樣癌（穿刺活檢,，20X）