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今天是2017年9月1日 農(nóng)歷七月十一 醫(yī)麥客：CAR-T迎來井噴式收獲 2017年9月1日/醫(yī)麥客 eMedClub/--最近這段時(shí)間,，小編真真的感受到連空氣里都彌漫著一股燒焦了的CAR-T細(xì)胞的味道。從諾華CTL-019獲得FDA專家委員會全票推薦到Gilead以119億美元現(xiàn)金收購CAR-T治療公司Kite Pharma,，再到昨天首個(gè)CAR-T細(xì)胞藥物獲批上市的超級重磅,。媒體頭條連番轟炸，整個(gè)醫(yī)藥行業(yè)對CAR-T療法的熱情更是持續(xù)高漲,。 CAR-T治療過程 視頻來源 STEMCELL官網(wǎng) https://v.qq.com/x/page/j0543fv6ami.html
許多在細(xì)胞療法領(lǐng)域耕耘多年的生物技術(shù)新銳也在今年迎來了井噴式的收獲,，諸多CAR-T療法顯示出了大量喜人數(shù)據(jù)。使得原本無藥可治的患者,，生命之火得以重新點(diǎn)燃,。至此，CAR-T絕對可以稱得上是一種革命性的治療手段,。
作為細(xì)胞療法的代表，CAR-T療法(嵌合抗原受體T細(xì)胞)的特別之處在于給T細(xì)胞安裝了一個(gè)能夠特異性識別腫瘤表面抗原的導(dǎo)彈定位系統(tǒng)CAR(嵌合抗原受體),，然后把這種經(jīng)過修飾改造的T細(xì)胞重新輸回到患者體內(nèi),，而這些受體能引導(dǎo)T細(xì)胞進(jìn)攻癌細(xì)胞，從而對后者造成殺傷,。 CAR-T細(xì)胞制造過程 (圖片來源 sec.gov)
當(dāng)然這是非常簡單化的說法,，事實(shí)上，這種個(gè)性化的治療方法的困難指數(shù)并不低,。不同于傳統(tǒng)藥物,，每個(gè)批次都是針對特定患者設(shè)計(jì)的，而且過程中涉及到基因工程和活細(xì)胞,，需要經(jīng)過培訓(xùn)的專業(yè)技術(shù)人員來完成,，質(zhì)量控制檢測更是貫穿于整個(gè)過程。
分離出T細(xì)胞 抽取癌癥患者的外周血,，采用白細(xì)胞分離術(shù)對T細(xì)胞進(jìn)行富集，淋巴細(xì)胞的富集可以通過密度梯度離心法完成,，此法根據(jù)細(xì)胞的大小和密度分離，并保持細(xì)胞活力,。T細(xì)胞亞群的分離通過CD4/CD8特異性抗體或者表面標(biāo)記偶聯(lián)磁珠進(jìn)行分離。而為了能夠更加高效的激活T細(xì)胞，則可以利用CD3/CD28單克隆抗體磁珠,。
Activation of T cells in Nature and in Expansion Platforms(圖片來源 ProMab Biotechnologies)
例如ProMab Biotechnologies公司的CD3/CD28 T CELL ACTIVATION/EXPANSION BEADS，該項(xiàng)技術(shù)提供了活化和擴(kuò)增T細(xì)胞的簡單方法,，無需抗原呈遞細(xì)胞或抗原,。 CD3/CD28 TCELL ACTIVATION/EXPANSION BEADS是一種大小約為3.0μm的抗體偶聯(lián)磁珠，其表面結(jié)合CD3和CD28 單克隆抗體的復(fù)合物,。使得磁珠可以提供T細(xì)胞活化和擴(kuò)增所需的主要和協(xié)同刺激信號。該產(chǎn)品擁有與國際其他品牌一致的刺激效果和更低的成本,。 使T細(xì)胞成為CAR-T 利用基因工程技術(shù)給T細(xì)胞加入一個(gè)能識別腫瘤細(xì)胞,，并且同時(shí)激活T細(xì)胞殺死腫瘤細(xì)胞的嵌合抗體(CAR)，使之成為CAR-T細(xì)胞,。簡單來說CAR-T技術(shù)就如同給T細(xì)胞裝上了GPS導(dǎo)航系統(tǒng),，能識別癌細(xì)胞，并進(jìn)行殺傷,，成為免疫軍團(tuán)中的“超級特戰(zhàn)隊(duì)”,。 Transduction efficiencyof CAR-T cells expanded with Company A and ProMab’s CD28/CD3 beads. CAR-T cellshad >70% transduction efficiency when expanded with ProMab’s beads asdetected by flow cytometry after staining cells with FAB antibody(圖片來源 ProMab Biotechnologies)
目前，研究人員主要通過γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒,、慢病毒,、睡美人(Sleeping Beauty)轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)以及mRNA電轉(zhuǎn)等方法轉(zhuǎn)染T細(xì)胞，使得T細(xì)胞表面表達(dá)嵌合抗原受體(CAR),，從而特異性識別和結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的抗原并裂解腫瘤細(xì)胞。而為了提高轉(zhuǎn)染效率,，通常需在T細(xì)胞激活期間進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
CAR-T細(xì)胞體外擴(kuò)增 CAR-T細(xì)胞體外擴(kuò)增至治療劑量,，一般一個(gè)病人需要幾十億,，乃至上百億個(gè)CAR-T細(xì)胞(患者體型越大，需要的細(xì)胞就越多),。
Morphology of Activated andexpanded T cells stimulated with CD28/CD3 beads(圖片來源 ProMab Biotechnologies)
CAR-T細(xì)胞回輸 CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增完成之后,，需要通過冷鏈運(yùn)輸?shù)交颊咚卺t(yī)院，研究人員須將細(xì)胞濃縮至一定體積回輸給病人,。
值得注意的是,，冷鏈運(yùn)輸以及低溫存儲在這一過程中扮演著不可或缺的角色。同時(shí),，由于細(xì)胞免疫治療很有可能未來的商業(yè)模式為一中心覆蓋多區(qū)域,，因此強(qiáng)大的細(xì)胞冷鏈物流顯得極為重要。意識到這一點(diǎn)，諾華,、Kite Pharma,、Bluebird Bio、Bellicum Pharmaceuticals,、ProMab等細(xì)胞治療領(lǐng)域的佼佼者紛紛與領(lǐng)先的低溫物流解決方案供應(yīng)商CryoPort公司建立了合作關(guān)系,。
冷鏈運(yùn)輸(圖片來源 scorrmarketing.com)
另外，考慮到患者病情已經(jīng)到達(dá)晚期,，每拖延一天就會耽誤治療時(shí)間,。因此，時(shí)間也是最為關(guān)鍵的一個(gè)環(huán)節(jié),。其中Kite公司從提取患者細(xì)胞,，到CAR-T細(xì)胞回輸進(jìn)患者體內(nèi)，這一過程大約需要16-18天(也可能縮短到14天)的時(shí)間,，諾華的制備時(shí)間為22-29天,，Juno的制備時(shí)間為24天。
嚴(yán)密監(jiān)測 CAR-T療法本質(zhì)上是一種細(xì)胞工程化的“活藥物”,，其回輸劑量控制很大程度上取決于病人體內(nèi)的腫瘤負(fù)荷,，而這與傳統(tǒng)藥物的劑量控制理念完全不同。
Real-time Cytotoxicity Assay (RTCA) with ProMab and Company Abeads.CAR-T cells expanded with ProMab’s beads had higher cytotoxic activity(圖片來源 ProMab Biotechnologies)
另外,，由于CAR-T療法殺癌細(xì)胞實(shí)在是太快太有效了(瞬時(shí)殺傷能力),，所以瞬間會在局部產(chǎn)生超大量的細(xì)胞因子，引起驚人的免疫反應(yīng),，也就是所謂的細(xì)胞因子風(fēng)暴(CRS),。是目前最常見的CAR-T細(xì)胞注射后的副作用，同時(shí)也被認(rèn)為是CAR-T細(xì)胞治療在體內(nèi)“發(fā)揮作用”的標(biāo)志,。
但嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)＜吧?，因此這也就是為什么CAR-T療法的最后一步是嚴(yán)密監(jiān)護(hù)，作為一種廣受關(guān)注的新療法,，與療效同樣重要的是副作用的防控,。 當(dāng)然在細(xì)胞輸入之前，應(yīng)該擁有一些列的開展類似“藥物敏感試驗(yàn)”的類似試驗(yàn),，在體外就確定工程化的T細(xì)胞是否對病人癌細(xì)胞有殺傷效果,，同時(shí)借助相關(guān)技術(shù)，有效的嚴(yán)密監(jiān)控CAR-T細(xì)胞在病人體內(nèi)/外的生存周期也至關(guān)重要,。
綜上所述,，如果將CAR-T細(xì)胞作為一款產(chǎn)品來開發(fā)的話，所面臨的問題還是挺多的,。既沒有現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)可以指導(dǎo)臨床前階段的藥學(xué),、藥理、藥代、藥效和毒理特點(diǎn)的評估,，也沒有標(biāo)準(zhǔn)可以用于CAR-T的規(guī)范化生產(chǎn),、制備和質(zhì)控環(huán)節(jié)，而最大的挑戰(zhàn)是如何從科研機(jī)構(gòu)走向質(zhì)量高度可控的生產(chǎn)中心,，如何低成本高質(zhì)量的工業(yè)化生產(chǎn),。 CAR-T細(xì)胞生產(chǎn)工藝 視頻來源 kite官網(wǎng) https://v.qq.com/x/page/l0524vxqu7l.html
因此，這些看似簡單的步驟的合理安排是至關(guān)重要的,。
目前,，CAR-T之熱已經(jīng)席卷了全球，中國更是僅次于美國,，開展的CAR-T臨床試驗(yàn)數(shù)量位居全球第二,。但眾多企業(yè)與科研團(tuán)隊(duì)的合作仍在艱難的將CAR-T療法推向產(chǎn)業(yè)化，為了能夠加快國內(nèi)CAR-T行業(yè)的發(fā)展,，與專業(yè)CAR-T研發(fā)團(tuán)隊(duì)的強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)手或是明智之選,。而國內(nèi)能提供這樣高水準(zhǔn)、規(guī)范化的CAR-T細(xì)胞制備以及完善臨床整體治療方案的CAR-T公司并不多,。
Transition to Commercial Manufacturing(圖片來源 cell.com)
今天我們?yōu)榇蠹彝扑]一家有著多年豐富的CAR-T和抗體研發(fā)企業(yè)—ProMab Biotechnologies Inc,。ProMab 現(xiàn)可提供CAR-T研發(fā)全套產(chǎn)權(quán)CRO服務(wù)，以及CD28/CD3 T細(xì)胞激活磁珠,、實(shí)時(shí)定量細(xì)胞質(zhì)控檢測系統(tǒng),、CAR-T細(xì)胞培養(yǎng)基等各種免疫治療輔助試劑和標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞監(jiān)控設(shè)備，公司也正在中國進(jìn)行相關(guān)CAR-T細(xì)胞磁珠的試用等活動,，歡迎感興趣的嘗試聯(lián)系,。 聯(lián)系人： |
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