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關(guān)于食用菌菌種脫毒技術(shù)主要有以下四種方式：一,、菌絲尖端脫毒法；二,、U型管脫毒法,；三、斷橋脫毒法,；四,、原基組織脫毒法。上述方法各有利弊,，我們先了解一下各種方法的具體操作方式,，再來為大家分析各種方法的優(yōu)缺點。 聲名：以下內(nèi)容來源于網(wǎng)絡,，版權(quán)歸原作者所有,，引用至此只為學術(shù)交流，有些為部分引用,，為了避免對大家造成誤導,，有些數(shù)據(jù)本人略作修改。 圖一
編者注：上述原文中要求切取菌絲尖端1毫米，實際情況證明在菌種脫毒中只有切取0.4毫米以下才能到有效脫毒目的,。這是國際公認的安全脫毒范圍,。這樣的長度一般人手工切取成功率極低。 (圖二 攝影李慶龍) 原材料準備 1,、無底試管：把待用的試管底部用玻璃刀劃掉,，使其成為兩端都敞口的無底試管。 2、培養(yǎng)基配制：取木屑另加1%石灰,、0.5%尿素以及適量水配成含水量55%的培養(yǎng)基,。 3、其它：高壓滅菌鍋,、棉塞,、比上述無底試管略小的試管一根（如果無底試管直徑為20mm，那這根試管直接則為18mm左右）,。 操作步驟 取上述培養(yǎng)基分成兩小斷裝入無底試管中,，具體方法：裝料時先用直徑小一點的試管插入無底試管內(nèi)4cm處，然后裝料約2厘米后壓實,；接著裝另一端,，用手把培養(yǎng)料握成團，然后把試管口對著培養(yǎng)料團插進去2cm左右,，再把另一頭直徑小一點的試管取下來從這一頭把培養(yǎng)料向中間推進去,，距離另一端培養(yǎng)料約1cm處，最后兩頭用棉塞封口. 注意：高壓鍋滅菌時試管要橫放,，不能豎放,，其它操作按常規(guī). 接種時把母種接到任何一端就行了，等平菇菌絲長滿了一端培養(yǎng)基后,，其爬壁菌絲會隔空長到另一端培養(yǎng)基上,，等到長滿另一端后就可以取另一前端菌絲接種了。 本方法特點：1,、培養(yǎng)料的一高一低（高堿,、低營養(yǎng)）抑制了其它微生物的生長；2,、利用平菇菌絲爬壁力強而細菌不能爬壁的特點,。經(jīng)過這樣處理后再轉(zhuǎn)接出來的菌絲，純正,、粗壯有力,。大家不妨一試。 編者注：U型管脫毒法,，比無底試管更好用一些,，只要在U型管兩端裝入配制好的培養(yǎng)基，其它環(huán)節(jié)按照無底試管操作即可,。簡便易行,，上圖為我們脫毒的效果照片，可以清晰的看到試管中兩邊菌比生長狀態(tài)的強弱差距,。 任何一個好的平菇品種,，如果連續(xù)栽培，也會出現(xiàn)退化、變異現(xiàn)象,。山東省壽光市田柳鎮(zhèn)閆家村菇農(nóng)李法升依據(jù)馬鈴薯脫毒種連年種植不退化,、變異的原理，琢磨出了對平菇菌種進行脫毒提純復壯的好方法,，有效防止了品種的退化和變異,。 他的辦法是用常規(guī)法制備PDA培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基凝固后,，在無菌條件下,，用接種耙把培養(yǎng)基斜面最前端較薄的培養(yǎng)基斷開約1厘米，把待接母種接在試管中間培養(yǎng)基上,，當菌絲長到斷開處時,，則會繼續(xù)伸長，穿越斷開處,，伸入前端的小塊培養(yǎng)基上,，經(jīng)過斷裂又伸長，菌絲顯得格外粗壯,、有力,。轉(zhuǎn)接時，挑取小塊培養(yǎng)基最前端的一塊組織,，按常規(guī)接種,，這樣經(jīng)過四次尖端挑取培養(yǎng)，便可甩掉病毒,。 李法升給這種簡單的脫毒方法取了一個名字： “斷橋式脫毒技術(shù)”。采用這種辦法培養(yǎng)的平菇菌種發(fā)菌快,，產(chǎn)量明顯提高,。在污染嚴重的年份，能避免因雜菌污染造成減產(chǎn),。他還建議,，在使用該方法的同時，也要改良常規(guī)PDA培養(yǎng)基的配方作為脫毒的配套措施,，只有這樣,，才能培養(yǎng)出優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的平菇菌種。 編者注：斷橋脫毒法：很多食用菌相關(guān)網(wǎng)站都有刊載上文,，實際上通過這種所謂的“斷橋”方式很難達到理想的脫毒效果,，因為在劃開試管內(nèi)培養(yǎng)基時粘著在試管壁的營養(yǎng)物質(zhì)是起不到“斷”的作用。如果能免脫毒成功還是要取決于切取尖端菌絲的過程,。 該技術(shù)最大程度革除了原有組織分離時子實體處于生長中后期,，攜帶病毒、病菌可能性極大等弊端，真正實現(xiàn)了分離尖端組織的脫毒目的,。 具體操作為： 常規(guī)配制基料,，調(diào)破氮比為30∶1。碳氮比不可小于25∶1,，以免菌絲過度旺盛生長結(jié)成菌皮,，不易現(xiàn)原基。大口罐頭瓶洗凈,、備用,。準備數(shù)塊又11厘米×11厘米的純棉紗布。裝料至瓶口下1厘米時,，從瓶口處鋪上一層紗布,，用平口螺絲刀將紗布邊緣插至瓶下，使之緊貼瓶劈,。封口滅菌,、接種、培養(yǎng)等操作按常規(guī)進行,。待菌絲發(fā)滿瓶后,，施行溫差、濕差,、光照等刺激,，一般約7天即可現(xiàn)出原基。此時原基的形態(tài)是白疙瘩 ,。待原基高至1厘米時,，即可進行脫毒分離。 將菌瓶用75％酒精擦洗后,，移入已消毒的接種箱,，箱內(nèi)不再進行常規(guī)熏蒸。同時準備接種針（或接種釣）,、多個刀片（以備交替使用）,，與菌瓶一同放入接種箱中，噴灑新潔爾滅以確保無菌操作,。兩手用75％酒精擦洗,，伸入接種箱，將刀片進行灼燒滅菌后手持冷卻,。打開菌瓶封口,，兩手配合用無菌鑷子取出原基。由于料面覆蓋一層紗布,，故不會將基料帶出,，操作方便,。用刀片將原基表層削去約1毫米，然后用尖刃刀片將原基劃切,，使每塊大小1毫米2左右,。用接種針將分離的原基塊移入平板或大型試管進行常規(guī)培養(yǎng)。 操作要點：一是用刀片進行削,、切時,，每切一刀須更換一次刀片；二是分離塊接入時須靠邊緣投放,，可接在平板的邊緣或試管的最前部,，一般不居中接入。 編者注：原基組織脫毒法,，我本人沒有試驗過,，所以不妄加評論。 在食用菌菌種脫毒應用干擾素目前僅停留在理論上,，目前還有待進一步研究,，這將是未來食用菌菌種脫毒的一個新方向。 編后語：在我們搞科研,、創(chuàng)新的時候,，一定要建立在別人的成功基礎之上再去創(chuàng)新才有意義!所以我們會引用、轉(zhuǎn)載一些前人的經(jīng)驗,、理論,，再加上我們自己的一點點新觀點與大家，探討,，交流,。也誠懇的希望能起到拋磚引玉的作用，請食用菌產(chǎn)業(yè)界同行,、前輩們共同分享大家的富貴經(jīng)驗,、技術(shù)。 正所謂一枝獨秀不是春,，百花齊放春滿園!， 分享方式進入： |
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