近年來,,食用菌病害甚多,,至今尚無有效、專用的防治藥物應用于生產(chǎn),。將植物的脫毒技術應用于食用菌生產(chǎn),,可有效抑制病害的發(fā)生。
所謂植物脫毒,,是將植物莖尖生長尖端組織進行分離,,將分離組織置于特定培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),從而獲得脫離原體病毒,、病菌的新生種苗,。具體到食用菌的脫毒繁種,嚴格說來,,一般的組織分離并不能達到使菌種脫毒的目的,,這是由于子實體已生長至中后期,攜帶病毒,、病菌的概率相當高,,故脫毒效果不明顯,。而將食用菌尖端生長點進行脫毒,效果理想,。
具體的脫毒方法有兩種:
1.菌絲尖端脫毒技術
使用規(guī)格為90毫米或110毫米的培養(yǎng)皿,。無此規(guī)格培養(yǎng)皿時,也可改用規(guī)格為25毫米×200毫米的大型試管,,但操作不太方便,。 先按常規(guī)制備母種培養(yǎng)基,裝入三角瓶,,棉塞封口,,加皮紙包封;同時將培養(yǎng)皿洗凈后用牛皮紙包好,。二者同時進行滅菌處理,。121℃下滅菌30分鐘,待滅菌鍋內(nèi)壓力為零時,,取出滅菌物,,放入事先消毒的接種箱。打開牛皮紙包封,,一手持培養(yǎng)皿,,一手持三角瓶,利用手指調(diào)控使培養(yǎng)皿上蓋開啟約1~2厘米,,倒入培養(yǎng)基液體約10~20毫升,,蓋嚴。將培養(yǎng)皿平置,,冷卻后成一光滑平面,,俗稱平板 。 平板冷卻至30℃以下時,,接入待脫毒菌種,。接種方法:挑取米粒大小的一塊種源,接入平板邊緣,。接種后置于規(guī)定溫度下培養(yǎng)〔視品種調(diào)控溫度),。當菌絲萌發(fā)至最長為2厘米時,用尖刃接種工具切取菌絲尖端1毫米左右,,接入新制平板上,。此為1次脫毒。一般可連續(xù)脫毒3~4次,。脫毒次數(shù)越多,,脫毒效果就越有保證。特別注意
2.原基組織脫毒技術
該技術最大程度革除了原有組織分離時子實體處于生長中后期,,攜帶病毒,、病菌可能性極大等弊端,,真正實現(xiàn)了分離尖端組織的脫毒目的。具體操作為: 常規(guī)配制基料,,調(diào)破氮比為30∶1。碳氮比不可小于25∶1,,以免菌絲過度旺盛生長結(jié)成菌皮,,不易現(xiàn)原基。大口罐頭瓶洗凈,、備用,。準備數(shù)塊又11厘米×11厘米的純棉紗布。裝料至瓶口下1厘米時,,從瓶口處鋪上一層紗布,,用平口螺絲刀將紗布邊緣插至瓶下,使之緊貼瓶劈,。封口滅菌,、接種、培養(yǎng)等操作按常規(guī)進行,。 待菌絲發(fā)滿瓶后,,施行溫差、濕差,、光照等刺激,,一般約7天即可現(xiàn)出原基。此時原基的形態(tài)是白疙瘩 ,。待原基高至1厘米時,,即可進行脫毒分離。 將菌瓶用75%酒精擦洗后,,移入已消毒的接種箱,,箱內(nèi)不再進行常規(guī)熏蒸。同時準備接種針(或接種釣),、多個刀片(以備交替使用),,與菌瓶一同放入接種箱中,噴灑新潔爾滅以確保無菌操作,。兩手用75%酒精擦洗,,伸入接種箱,將刀片進行灼燒滅菌后手持冷卻,。打開菌瓶封口,,兩手配合用無菌鑷子取出原基。由于料面覆蓋一層紗布,,故不會將基料帶出,,操作方便,。用刀片將原基表層削去約1毫米,然后用尖刃刀片將原基劃切,,使每塊大小1毫米2左右,。用接種針將分離的原基塊移入平板或大型試管進行常規(guī)培養(yǎng)。操作要點:一是用刀片進行削,、切時,,每切一刀須更換一次刀片;二是分離塊接入時須靠邊緣投放,,可接在平板的邊緣或試管的最前部,,一般不居中接入。