食用菌母種的制作,，大多使用PDA或PSA及其改良培養(yǎng)基，但一些偏遠地區(qū)或小批量生產(chǎn)時,，配方中的原材料由于價格較高（一般是分析純）,，且在農(nóng)村不易購到，耽誤生產(chǎn)?，F(xiàn)介紹幾個簡易制作方法,。 1、明膠型培養(yǎng)基,。明膠,，指食用明膠，一般食品化工商店有售,，價格較低,。食品生產(chǎn)中用作凝固劑或固形劑的明膠，用于母種生產(chǎn)上代替瓊脂（洋菜,、瓊膠）做凝固劑,，筆者90年代初即進行試驗并用于生產(chǎn)，證明效果不錯,，但需對所購商品進行凝固性試驗,，最后確定每1000毫米中的使用量后,，需堅持用該種品牌，不可隨意更換,。一般生產(chǎn)配方為：土豆200克,，麥麩30克，白糖20克,，明膠50克左右,，水1000毫升。 2,、原糧型培養(yǎng)基,。即谷粒培養(yǎng)基。小麥,、玉米,、豆類等均可作為母種培養(yǎng)基，且生產(chǎn)效果很好,。方法是：玉米,、大豆需破碴，使其大小與小麥粒相仿,，浸泡至無白心,，用開水煮熟后迅速使用冷水沖洗，撈出后隨即拌入適量麥麩,，然后裝入試管,。建議用該培養(yǎng)基時改換大型試管一般可使用20×200或25×200規(guī)格的試管，既方便操作,，又相應加大一次性生產(chǎn)數(shù)量,，經(jīng)濟上、時間上均合算,。 3,、土豆型培養(yǎng)基：選擇大個頭光滑土豆，去皮后切成撅形條,，土豆條長12－15厘米,，兩端分別厚13厘米和0．2厘米，寬度根據(jù)試管直徑確定,，一般為2厘米以下,，并盡量使其成半圓形，以使圓邊貼近試管壁,。裝入試管,，常規(guī)滅菌等操作即可。 4,、南瓜條培養(yǎng)基：秋季南瓜成熟后,，可直接和來作母種培養(yǎng)基參照土豆型培養(yǎng)基切制南瓜條,，制作同上。 5,、蘋果泥培養(yǎng)基：將成熟的蘋果去皮、去核,，研碎成果泥,，裝入試管，常規(guī)滅菌,。只是需要接種時用一滅菌木條將果泥壓為長條型,，使之與普通培養(yǎng)基相彷，而后再常規(guī)接種,。 6,、胡蘿卜條培養(yǎng)基：可參照土豆培養(yǎng)基進行      食用菌木渣母種及其制作方法，它涉及一種食用菌母種和它的制作工藝,。本發(fā)明的食用菌木渣母種由下列原料按重量百分比制成：木渣75-90％,、麩皮10-23％、白糖0.5-1.5％,、石膏或石灰0.5-1.5％,。攪拌：將以上所述的食用菌木渣母種的原料加水攪拌均勻；接種：將滅菌后的食用菌木渣母種降溫至室溫條件下進行接種,，將接種的瓶子放在25-28℃的環(huán)境中進行培養(yǎng),，25-30天即可。本發(fā)明食用菌木渣母種具有配方簡單,、原料易得,、成本低廉、無需專用設備,、接種成活率百分之百,、菌絲生產(chǎn)周期比現(xiàn)有PDA法提前20-30天、母種保質(zhì)期長(4-6個月)的優(yōu)點,。食用菌木渣母種的制作方法具有好學易懂,、易操作、不受規(guī)模大小的限制,，特別適合城鎮(zhèn),、農(nóng)村一家一戶進行生產(chǎn)的優(yōu)點。   配方：馬鈴薯,、葡萄糖,、瓊脂培養(yǎng)基。馬鈴薯200克,，葡萄糖20克,，瓊脂18～20克,，水1000毫升。pH值5.5～6,。
    該配方適合香菇及多種食用菌分離和培育母種之用,。如果作保藏菌種用，在配方中可再添加磷酸二氫鉀2克,，硫酸鎂0.5克,，維生素B110毫克。
    制法：選擇質(zhì)量好的馬鈴薯洗凈去皮（已發(fā)芽的要挖去芽及周圍一小塊）,，將其切成薄片,，稱取200克。放入鋁鍋中,，加入清水1000毫升,，加熱煮沸，維持30分鐘,，用四層紗布過濾,，取其汁液，然后將瓊脂放在水中浸泡后加入馬鈴薯汁液中,，繼續(xù)加熱至全部溶化（加熱過程中要用玻璃棒不斷攪拌,，以防溢出和焦底），最后加入葡萄糖,，并且熱水補足1000毫升,，測定并調(diào)節(jié)pH值（用5％的稀鹽酸或5％的氫氧化鈉溶液）到所需范圍內(nèi)。配制好的培養(yǎng)基要趁熱分裝入試管,，裝入量約為試管長度的1／5,，裝管時要注意勿使培基沾附試管口。分裝完畢塞上棉塞,，棉塞要求松緊適度,，塞入長度約為棉塞總長度的2／3左右，使之既有利通氣又能防止雜菌侵入,。
    塞好棉塞后,，把試管直放在小鐵絲筐中，蓋上油紙或牛皮紙,，用繩扎好,，或用繩子把試管扎成幾捆，棉塞部分    滅菌后,，待培養(yǎng)基溫度下降至60℃時,，再撰成斜面，以防冷凝水積聚過多。擺斜面時,，先在桌上放一木棒,，將試 管逐支斜放，使斜面長度不超過試管總長度的 1／2,，冷卻凝 固后,，即成斜面培養(yǎng)基。
    滅菌后的斜面培養(yǎng)基,，要進行無菌測定,，可從中取出2～3支，放入30℃左右的恒溫箱中培養(yǎng)3天,，培養(yǎng)后表面如 仍光滑，無雜菌出現(xiàn),，就可供接種,。多次制作后，已有把握,，可不做無菌測定試驗,。
    高壓滅菌操作步驟和注意事項：
    （Ⅰ）在滅菌鍋內(nèi)加水至水位標記高度，首次使用需先進行一次試驗,，水過少易燒干造成事故,，水過多棉塞易受潮。
    （Ⅱ）放火鍋內(nèi)的材料,，不宜太擠,，否則會影響蒸汽的流通和滅菌效果。體積大的瓶子,，要分層放置或延長滅菌的時間,。
    （Ⅲ）蓋上鍋蓋，同時均勻擰緊鍋蓋上的對角螺旋,，勿使漏氣,，關閉氣閥。
   （Ⅳ）點火,、逐漸升溫,。水沸后，待鍋內(nèi)壓力升至0.5 公斤／厘米2時,，逐漸開大放氣閥,，放凈鍋內(nèi)冷空氣至壓力降至"0"，再關閉放氣閥,。如不放盡冷空氣,，即使加大至所需壓力，而溫度達不到應有的程度，也不能達到徹底滅菌的要求,。
    （V）繼續(xù)DO％至所需壓力時,，開始記滅菌時間，調(diào)節(jié)火力大小,，始終維持所需壓力至一定時間,。
   （VI）停火,。讓壓力自然回降至"0"時,，打開放氣閥。
    （Ⅶ）打開鍋蓋,，用木塊墊在蓋下,，讓蒸汽漸漸溢出，借余熱烘干棉塞。
    （Ⅷ）取出已滅菌的材料，并清除剩水,，以防鍋底銹蝕。
食用菌母種的制作由于受污染及質(zhì)量問題的困擾,，很少有菇農(nóng)朋友自行制作，較多的是制作原種：現(xiàn)將兩種簡單易行的母種制作方法介紹給廣大菇農(nóng)朋友,。只要嚴格按照下列步驟操作,，即可制出高質(zhì)量母種。
　　一,、選擇菌種
　　1．試管種的選擇
　　香菇試管種應菌絲潔白,，粗壯，整齊,，菌苔表面平整,，無或有少量水珠，菌齡25-30天,；金針菇試管種應菌絲白色,，平伏，濃密,，無或有少量粉孢子,，菌齡22～27天。
　　2．原種的選擇
　　瓶裝香菇原種應菌絲潔白,，密集,，尖端整齊，絨毛菌絲旺盛,，菌齡30～35天,；瓶裝金針菇原種應菌絲密集,，尖端整齊，有或無氣生菌絲,，無或有少量粉孢子,，菌齡25～30天。
　　二,、選擇季節(jié)和處理場所
　　為減少雜菌污染的機會,，應避開濕潤多雨的季節(jié)，秋后則較為理想,。場所應選擇環(huán)境潔凈,、空氣清新、地勢高燥,、遠離畜禽欄舍的房舍較為理想,。
　　三、菌種培養(yǎng)
　　將上述長滿菌絲的4支試管種,、4瓶原種移至子實體發(fā)生較適溫度(香菇12～18℃,；金針菇8～15℃)和明亮的漫射光下，促進原基,、菌蕾和子實體的發(fā)生。選取先生成子‘實體的2支試管種和2瓶原種備用,。
　　四,、準備培養(yǎng)基
　　制作試管斜面培養(yǎng)基10支。配方：胡蘿卜100克,，葡萄糖20克,，瓊脂20克，水1000克,。
　　制作方法,；按配方正確稱取各種營養(yǎng)物質(zhì)，將胡蘿卜,、去皮,、切片，加水為料的5倍,，文火煮沸30分鐘,，用4層紗布過濾取汁。加入其他營養(yǎng)物質(zhì),，補水至1000毫升,。加入團硨的瓊脂，文火煮沸,，攪拌至溶解,。將培養(yǎng)基趁熱裝入試管，裝入量為試管長度的1／5，加棉塞后用牛皮紙包扎,，常規(guī)滅菌,，擺成試管斜面。
　　五,、消毒接種箱
　　將上述培養(yǎng)基10支,、試管種2支或原種2瓶，酒精燈及接種工具放人接種箱,，按每立方米空間10毫升甲醛溶液與等量或半量的高錳酸鉀熏蒸消毒1小時,，或用“霧消靈”，按每立方米3克,，點燃熏蒸消毒半小時,。
　　六、接種,、培養(yǎng)
　　1．在無菌條件下,，于酒精燈火焰上操作。
　　打開試管棉塞,，用接種刀挑取子實體內(nèi)少許組織,，移接至試管培養(yǎng)基斜面中央，每支試管種接5支試管斜面,。經(jīng)適溫(18～20％)培養(yǎng)2～3周,，即得到純菌絲母種。
　　2．在無菌條件下,，于酒精燈火焰上操作,。
　　打開原種牛皮紙，用接種刀挑取子實體內(nèi)少許組織,，移接至試管培養(yǎng)基斜面中央,，每瓶原種接5支試管斜面。經(jīng)適溫(18～20％)培養(yǎng)2～3周,，即得到純菌絲母種,。
　　七、出菇試驗
　　這是檢驗制作的母種達標與否的方法,，在菌株用于生產(chǎn)前必須作出菇試驗,。可采用瓶(袋)栽培的方法,，在常規(guī)栽培菌種時,，同時試栽培20～50瓶(袋)新制菌種作為對照，如出菇期,、出菇數(shù)量,、菇形大小,、肉質(zhì)厚薄、菌柄長短及菌蓋顏色等相比較無多大差異,，所制母種即可作為生產(chǎn)用種,。
     菌種是主要的生物資源，也是食用菌生產(chǎn)首要的生產(chǎn)資料,。一個優(yōu)良的菌種被選育出來以后,，必須保持其優(yōu)良性狀不變或盡可能地少變慢變，才不至于降低生產(chǎn)性能,，能長期在生產(chǎn)中使用,。因此，菌種保藏在食用菌生產(chǎn)上具有重要的意義,。
    
     一,、菌種保藏原理
    
     菌種保藏的方法很多，但原理大同小異,。首先要挑選優(yōu)良純種,。利用微生物的孢子、芽孢及營養(yǎng)體,；其次,，根據(jù)其生理、生化性,，人為創(chuàng)造低溫,、干燥或缺氧等條件，抑制微生物的代謝作用,，使其生命活動降低到極低的程度或處于休眠狀態(tài)，從而延長菌種生命以及使菌種保持原有的性狀,，防止變異,。不管采用哪種保藏方法，在菌種保存過程中要求不死亡,、不污染雜菌和不退化,。
    
     二、菌種保藏的方法
    
     1,、低溫定期移植保藏法,。將需要保藏的菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，適溫培養(yǎng),，當菌絲健壯地長滿斜面時取出,，放在3-5℃低溫干燥處或4℃冰箱、冰柜中保藏,，每隔4-6個月時間移植轉(zhuǎn)管一次,，具體應根據(jù)菌種特性決定,。保藏時要注意環(huán)境溫度不能太高，以防霉菌通過棉塞進入管內(nèi),。因此,，若用棉塞，可用干凈的硫酸紙或牛皮紙包扎棉塞,，即可減少污染的機會,，也可防止培養(yǎng)基干燥。除草菇菌種外,，其他食用菌菌種都能采用此法保藏,。
    
     2、液體石蠟保藏法,。取化學純液體石蠟（要求不含水分,、不霉變）裝于三角瓶中加棉塞并包紙，在1公斤/平方厘米壓力下滅菌1小時,，再放入40℃恒溫箱中數(shù)天,，以蒸發(fā)其中水分，至石蠟油完全透明為止,。將處理好的石蠟油移接在空白斜面上,，28-30℃下培養(yǎng)2-3天，證明無雜菌生長方可使用,。然后用無菌操作的方法把液體石蠟注入待保藏的斜面試管中,。注入量以高出培養(yǎng)基斜面1-1.5厘米，塞上橡皮塞,，用固體石蠟封口,，直立于低溫干燥處保藏。保藏時間在一年以上,，在低溫下,，保藏時間還可延長。
    
     3,、沙土管保藏法,。取河沙用水浸泡洗滌數(shù)次，過60目篩除去粗粒,，再用10%鹽酸浸泡2-4小時,，除去其中有機物質(zhì)，再用水沖洗至流水的pH達到中性,，烘干備用,。同時取貧脊土或菜園土用水浸泡，使呈中性,，沉淀后棄去上清液,，烘干碾細,，用100目篩子過篩，將處理好的沙與土以（2-4）:1混勻,，用磁鐵吸出其中的鐵質(zhì),，然后分裝小試管或安瓿內(nèi)，每管裝量0.5-2克,，塞棉塞,，用紙包扎滅菌（1.5公斤/平方厘米，1小時）,，再干熱滅菌（160℃,，2-3小時）1-2次，進行無菌檢驗,，合格后使用,。將已形成孢子的斜面菌種，在無菌條件下注入無菌水3-5毫升,，刮菌苔,，制成菌懸液，再用無菌吸管吸取菌液滴入砂土管中,，以浸透砂土為止,。將接種后的沙土管放入盛有干燥劑的真空干燥器內(nèi)，接上真空泵抽氣數(shù)小時,，至沙土干燥為止,。真空干燥操作需在孢子接入后48小時內(nèi)完成，以免孢子發(fā)芽,。制備好的沙土管用石蠟封口,，在低溫下可保藏2-10年。
    
     4,、濾紙片保藏法,。取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）濾紙，剪成4×0.8厘米的小紙條,，平鋪在培養(yǎng)皿中用紙包裹進行滅菌（1公斤/平方厘米，30分鐘）,。采用鉤懸法收集孢子,，讓孢子落在濾紙條上。將載有孢子的濾紙條放入保藏試管中,，再將保藏試管放入干燥器中1-2天,，除去濾紙水分，使濾紙水分含量達2%左右,，然后低溫保藏,。
    
     5,、自然基質(zhì)保藏法
    
     ⑴麥粒保藏法：取無癟粒、無雜質(zhì)的小麥淘洗干凈,，浸泡12-15小時,，加水煮沸15分鐘，繼續(xù)熱浸15分鐘,，使麥粒脹而不破,，瀝干水分攤開晾曬，使麥粒的含水量在25%左右,。將碳酸鈣,、石膏拌入熟麥粒中（麥粒、碳酸鈣,、石膏比例為10公斤:133克:33克）,，拌和均勻后裝入試管中，每管約2-3克,，然后清洗試管,，塞棉塞，滅菌1.5（1.5公斤/平方厘米,，2小時）,，經(jīng)無菌檢查合格后備用，試管基質(zhì)冷卻后接種,，適溫培養(yǎng),，待菌絲長滿基質(zhì)后用石蠟涂封棉塞，放低溫保藏,。2年左右轉(zhuǎn)接一次,。
    
     ⑵麩曲保藏法。取新鮮麩皮,，過60目篩除去粗粒,。將麩皮和自來水按1:1拌勻，裝入小試管,，每管約裝1/3高度,，加棉塞用紙包扎，高壓滅菌（1.5公斤/平方厘米,，30分鐘）,，經(jīng)無菌檢查合格后備用，將生長在斜面培養(yǎng)基上的健壯菌種,，移種至無菌麩曲管中,，移種時注意盡管搗勻小試管中的麩皮，呈疏松狀態(tài),，在適溫下培養(yǎng)至菌絲長滿麩皮為止,，將麩曲小管置干燥器中,，在低溫或適溫下保藏。
    
     6,、生理鹽水保藏法,。取純氯化鈉0.7-0.9克，放入100%毫升蒸餾水中,，攪拌均勻分裝試管,，每管5-10毫升，進行滅菌（1公斤/平方厘米,，30分鐘）,，經(jīng)無菌檢查合格后備用，將待保藏的菌種接入馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中適溫振蕩培養(yǎng)5-7天,。無菌操作吸取少許培養(yǎng)菌種注入經(jīng)檢驗合格的生理鹽水試管中,，塞上無菌橡皮塞，用石蠟涂封,，在室溫或低溫保藏,。
    
     7、冷凍真空干燥法,。將已培養(yǎng),、生長豐富的菌體或孢子懸浮于滅菌的血清、卵白,、脫脂奶制成菌懸液,，將懸液以無菌操作分裝于滅菌的玻璃安瓿瓶中，每管約0.3-0.5毫升,，然后用耐壓橡皮管與冷凍干燥裝置連接,，安瓿瓶放在冷凍槽中于-30℃至-40℃迅速冷凍，并在冷凍狀態(tài)下抽空干燥,，并在真空狀態(tài)下熔封安瓿,，在-20℃保存，一般可保存十年以上,，但成本較高,。
    
     8、液氮超低溫保藏法,。首先將要保藏的菌種制成菌懸液備用,；其次，準備安瓿瓶,，每瓶加入0.8毫升冷凍保護劑10%（體積比）甘油蒸餾水溶液，塞棉塞滅菌（1公斤/平方厘米,，5分鐘）,。無菌檢查后,，接入要保藏的菌種，火焰熔封瓶口,，檢查是否漏氣,，將封好口的安瓿瓶放在凍結器內(nèi)，以每分鐘下降1℃的速度緩慢降溫,，使保藏品逐步均勻地凍結,，直至-35℃，以后凍結速度就不需控制,，安瓿凍結后立即放入液氮罐內(nèi),，在-150至-196℃保藏，該法只有少數(shù)科研院所使用,。