臨床生化檢驗的自動化主要應(yīng)用了下列技術(shù)：光譜技術(shù),、電化學(xué)分析技術(shù),、層析技術(shù)、電泳技術(shù),、離心技術(shù),、抗原抗體特異性反應(yīng)和標(biāo)記技術(shù)、核酸擴(kuò)增,、雜交及序列分析技術(shù)等,，其中生化分析儀主要運(yùn)用了光譜技術(shù)中的吸收光譜法和比濁法。分別介紹如下:

吸收光譜法

也稱比色法,，遵循的是朗伯－比爾定律,，Lamber-Beer定律的意義為：某均一溶液的吸光度等于該物質(zhì)的吸光系數(shù)、濃度C和光徑L(cm)的乘積,，當(dāng)光徑不變時,，濃度和吸光度成正比，這是生化分析儀利用吸收光譜法進(jìn)行定量測定的基礎(chǔ),，見下圖：

Lamber-Beer定律成立的前提條件是：
(1)被吸收光為單色平行光,，
(2)待測定溶液為均一稀溶液。

除特種蛋白外的大部分臨床生化項目,，配以相應(yīng)的試劑,，均可利用比色法在生化分析儀上進(jìn)行測定

比濁法

帶有小粒的懸浮液和膠體溶液都具有向四面八方散射入射光的性質(zhì)，當(dāng)一束平行光通過含有懸浮質(zhì)點的懸浮液或膠體溶液時,，同時受到散射和吸收兩個因素的影響,，使光的強(qiáng)度減弱。在光源的光路方向上測量透射光強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度比值,，并通過該比值測定出懸浮液或膠體溶液中質(zhì)點的溶度,，稱為透射比濁法，在光路的其他方向上測定測量散射光強(qiáng)度,，從而測定出懸浮液或膠體溶液中質(zhì)點的溶度,，稱為散射比濁法。

透射比濁法適用于待測顆粒大小與光源波長接近的實驗; 散射比濁法適用于顆粒大小遠(yuǎn)小于光源波長的實驗

反應(yīng)類型

生化分析儀測定方法的分類

各項目的計算方法決定于其所采用的測定方法和定標(biāo)模式，臨床生化檢驗測定方法總的來說可分為三大類：終點法,，動力學(xué)法和固定時間法,。

終點法
指經(jīng)過一段時間的反應(yīng)，反應(yīng)達(dá)到平衡終點,，由于反應(yīng)的平衡常數(shù)很大,，可認(rèn)為所有的被測定物已轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，反應(yīng)液的吸光度不再增加(或降低),，吸光度的變化程度與被測定物的濃度成正比,。

在多數(shù)生化儀上可以用第二檢測波長去消除干擾，試劑上由于組份不同,，或是出于試劑穩(wěn)定性考慮會制備成單試劑,、雙試劑、三試劑等,，這樣就會細(xì)分出一些小的分類：單試劑單波長終點法,單試劑雙波長終點法,雙試劑單波長終點法,雙試劑雙波長終點法

固定時間法

又叫一級動力學(xué)法,，初速率法，二點動力學(xué)法
在一固定時間間隔中,底物濃度的變化量正比于底物的初濃度,這是一級反應(yīng)的通性.該段時間內(nèi)吸光度的增加或降低與被測定物的濃度成正比.

動力學(xué)法

又叫零級動力學(xué)法和連續(xù)監(jiān)測法,，多用于酶類的測定
反應(yīng)時加入試劑,，再加入樣本，在合適的時間內(nèi),，吸光度勻速變化,，變化的速率和反應(yīng)物的濃度成線性關(guān)系。

PS:常用的幾個概念

試劑空白
由于生化測試測量的均為相對吸光度,，所以從理論上說,，所有終點法的測試都需要把試劑本身的吸光度扣

除。試劑本身的吸光度就是試劑空白,。測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量,，把樣本換成蒸餾水來測

量

樣本空白
由于溶血,、脂血,、黃疸等情況，會導(dǎo)致樣本本身的吸光度對測試結(jié)果造成影響,。所以對樣本本身吸光度的

測量,，即樣本空白，可以去除這方面的影響,。測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量,，把試劑換成蒸餾

水或生理鹽水來進(jìn)行測量。

水空白 
比色杯在加入水以后的吸光度

定標(biāo)類型

生化項目的 定標(biāo)類型主要有線性定標(biāo)和非線性定標(biāo),，在Beckman AU系列生化儀上關(guān)于定標(biāo)類型主要有6種形式,，AA,AB,7AB,MB,7MB,nAB，

非線性化學(xué)分析物包含藥物與特定的蛋白質(zhì)分析,。不像一級速率及終點化學(xué)分析物會對增加的濃度呈現(xiàn)出線性回應(yīng),，非線性化學(xué)分析物校正曲線會呈現(xiàn)出對數(shù) （S 形）回應(yīng)或其他非線性的關(guān)系,。有鑒于此，故采用曲線契合插補(bǔ)方式以構(gòu)成校正曲線,。

對于有些非線性校正,，試劑批次曲線參數(shù)在制造過程中便計算出來。將曲線參數(shù)編為條碼形式,，通過試劑盒隨附的掃描卡加載至系統(tǒng),。然后運(yùn)行單點校正以調(diào)整儀器間的差異。如果需要,，校正可包括樣品稀釋劑(DIL1) 作為空白,，從全部校正劑或樣品回應(yīng)中減去。

計算模型

無論哪種定標(biāo)類型,，想最終得出我們想要的實驗結(jié)果,，都得通過相應(yīng)的數(shù)學(xué)公式運(yùn)算得出結(jié)果，線性校正的公式就比較簡單了,，待測結(jié)果會和吸光度或吸光度變化成正反比,，非線性的多點校正，就得運(yùn)用一些復(fù)雜的數(shù)學(xué)函數(shù)模型了,，這些通常是比濁或藥物實驗,。在Beckman DXC系列儀器上定標(biāo)數(shù)學(xué)模型大體分為以下幾種：

1. Linear線性模式，這個就適用于最常見的終點法速率法,。

2. Math Model 1 - 4 Parameter Log-logit function,，1號數(shù)學(xué)模型是使用抗體的試劑最常用的四個參數(shù)日志邏輯
函數(shù)。

樣品值使用計算的曲線參數(shù)及數(shù)學(xué)模型來決定,。由于該模式
可解出濃度,，故能直接計算數(shù)值。

2. Math Model 2 - 5 Parameter Logit function,，2號數(shù)學(xué)模型是五個參數(shù)邏輯函數(shù),。

該函數(shù)不能直接解出濃度。儀器使用交互方式來決定樣品值,。

3. Math Model 3 - 5 Parameter Exponential function,，3號數(shù)學(xué)模型是五個參數(shù)指數(shù)函數(shù)。

該函數(shù)不能直接解出濃度,。儀器使用交互方式來決定樣品值,。

4. Math Model 8 - Alternative to Model 2, 5- Parameter Logit function，8號數(shù)學(xué)模型是2 號模型,，五個參數(shù)邏輯函數(shù)的替代模型,。

該函數(shù)不能直接解出濃度。儀器使用交互方式來決定樣品值。

5. Math Model 9 - Extension to Model 1, 4 Parameter Log-logit function,，9號數(shù)學(xué)模型是1號模型,，四個參數(shù)日志邏輯函數(shù)的擴(kuò)充模型。

“c”可以是 +1 或 -1,。
若c = +1,，則等于 1 號模型。
若c = -1,，則使用了替代函數(shù),。
該函數(shù)不能直接解出濃度。儀器使用交互方式來決定樣品值,。

在東芝生化上的檢測方法定義也基本類似：

需要注意的的好多儀器都有的SPline,，這個數(shù)學(xué)模型適用于隨濃度升高而吸光度表現(xiàn)為收束的反應(yīng)曲線。在數(shù)學(xué)中,，樣條是一個數(shù)值函數(shù)是分段的多項式函數(shù),。

可以這樣理解:是一種以節(jié)點控制彎曲程度的順滑的自由曲線,通過編輯(移動\增加\刪除)節(jié)點可以很容易的調(diào)節(jié)曲線的曲率和走向,對于刻畫不規(guī)則的輪廓非常方便.

綜上所述，對于反應(yīng)檢測原理,、反應(yīng)類型,、定標(biāo)類型、數(shù)學(xué)模型有了了解之后,，我們會在自動生化檢測會有更深的理解,，對于調(diào)整試驗參數(shù)會更加得心應(yīng)手些。