酶聯(lián)免疫吸附試驗的基本原理及影響因素

中文名稱： 酶聯(lián)免疫吸附試驗

英文名稱： enzyme-linked immunoadsordent assay;ELISA

定義： 一種酶聯(lián)免疫技術,。用于檢測包被于固相板孔中的待測抗原(或抗體),。即用酶標記抗體，并將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,，使抗原抗體反應在固相載體表面進行,，用洗滌法將液相中的游離成分洗除，最后通過酶作用于底物后顯色來判斷結(jié)果,。

應用學科： 免疫學（一級學科）,；應用免疫（二級學科）；免疫學檢測和診斷（二級學科）

酶聯(lián)免疫吸附試驗 (以下簡稱ELISA) ：是酶免疫測定技術中應用最廣的技術,。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面,，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除,。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法,，前者用于檢測大分子抗原，后者用于測定特異抗體,。

簡介

從Engvall和Perlman(1971）首次報道建立酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays,ELISA）以來,，由于ELISA具有快速、敏感,、簡便,、易于標準化等優(yōu)點，使其得到迅速的發(fā)展和廣泛應用,。盡管早期的ELISA由于特異性不夠高而妨礙了其在實際中應用的步伐,，但隨著方法的不斷改進、材料的不斷更新,，尤其是采用基因工程方法制備包被抗原,，采用針對某一抗原表位的單克隆抗體進行阻斷ELISA試驗，都大大提高了ELISA的特異性,，加之電腦化程度極高的ELISA檢測儀的使用,，使ELISA更為簡便實用和標準化，從而使其成為最廣泛應用的檢測方法之一,。

目前ELISA方法已被廣泛應用于多種細菌和病毒等疾病的診斷,。在動物檢疫方面,，ELISA在豬傳染性胃腸炎、牛副結(jié)核病,、牛傳染性鼻氣管炎,、豬偽狂犬病,、藍舌病等的診斷中已為廣泛采用的標準方法,。

基本原理

ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結(jié)合，此種結(jié)合不會改變抗體的免疫學特性,，也不影響酶的生物學活性,。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后,，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型,，出現(xiàn)顏色反應。因此,，可通過底物的顏色反應來判定有無相應的免疫反應,，顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過ELISA檢測儀進行定量測定,，這樣就將酶化學反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結(jié)合起來,，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。

影響因素

酶聯(lián)免疫(ELISA)是目前檢驗科常用的免疫學檢測方法之一,，其操作簡單,，無須特殊設備，使其在各級醫(yī)院都有應用,。但是,，如果忽視了影響其結(jié)果的因素，難免會造成假陰性或假陽性,，因此,，了解影響實驗的因素，減少差錯事故的發(fā)生是極其必要的,。

實驗室操作人員的素質(zhì)因素

實驗室人員的素質(zhì)主要包括五個方面：思想素質(zhì),、文化素質(zhì)、技術素質(zhì),、心理素質(zhì),、身體素質(zhì)。首先應具備一個良好的思想素質(zhì),，因為我們的服務對象是人,，我們的道德水平直接關系到人們的健康和生命安危，如果馬馬虎虎,。三心二意,，難免會有差錯事故發(fā)生,，我們應該熱愛專業(yè)，耐心細致,。在工作中如標本混淆,、張冠李戴、報告單發(fā)錯等都有可能造成嚴重后果,；其次文化素質(zhì)和技術素質(zhì),，我們要熟練掌握本專業(yè)的基本理論和基本技術，認真學習新理論新知識,，努力提高自己的業(yè)務水平,，創(chuàng)造一個能夠勝任本職工作的技術平臺。良好的心理素質(zhì)就是要勇于面對工作生活中的挫折,，在繁忙工作中,，有條不紊，冷靜沉著的處理有關事務,。人員素質(zhì)問題是影響檢驗結(jié)果的首要因素,。

標本處理因素

實驗室人員收到標本后應認真查對，對不符合要求的標本和申請單要拘收,，合格標本要及時分離血清,，避免溶血，提取血清時不應混有大量纖維蛋白或細胞成分,。對不能及時檢測的標本要妥善保存于4℃冰箱,，做好原始記錄，標本管上最好標上待檢者姓名,、日期,。從冰箱取出的標本要預溫至室溫，對冰凍的樣品要融化好,，并充分混勻再用,。

操作過程的影響因素

1、操作前應對實驗的物理參數(shù)有充分的了解,，如環(huán)境溫度(保持在18 C～25℃),、反應孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數(shù)等,，要先查看水育箱溫度,，是否符合要求。

2,、正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑,，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺,，血清殘留在反應孔壁上,，加樣器吸頭要清洗干凈,，避免污染，加樣次序要與說明書一致,，否則可導致結(jié)果錯誤,，實驗重復性差。

3,、手工洗板加洗液時沖擊力不要太大,，洗滌次數(shù)不要超過說明書推薦的洗滌次數(shù)，洗液在反應孔內(nèi)滯留的時間不宜太長,。不要使洗液在孔間竄流,，造成孔問污染，導致假陰性或假陽性,。

4、要保證加液量一致 我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好,，滴瓶不易控制加液量不準,，造成顯色不統(tǒng)一，判斷錯誤,。

5,、顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應,，顯色液量不能過多,，以免顯色過強。

試劑的影響因素

應選用有國家批準文號,，質(zhì)量靠得住的產(chǎn)品,，不能圖便宜，忽視質(zhì)量保證,。試劑應妥善保存于4℃冰箱內(nèi),，在使用時先平衡至室溫，不同批號的試劑組分不宜交叉使用,。試劑開啟后要在一周內(nèi)用完,，剩余的試劑下次用時應先檢查是否變質(zhì)，,，顯色劑如被污染變色將造成全部顯色,，導致錯誤結(jié)果。過期的試劑不宜再用,，若別無選擇,，應做好雙份質(zhì)控品的監(jiān)測，確保結(jié)果的可靠性,。

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