植物組織培養(yǎng)中常用的一種培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基,。MS培養(yǎng)基的配制包括以下步驟,。

培養(yǎng)基母液的配制和保存  MS培養(yǎng)基含有近30種營養(yǎng)成分，為了避免每次配制培養(yǎng)基都要對這幾十種成分進(jìn)行稱量,，可將培養(yǎng)基中的各種成分,，按原量的20倍或200倍分別稱量，配成濃縮液,，這種濃縮液叫做培養(yǎng)基母液,。這樣每次使用時(shí)，取其總量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),，加水稀釋,，制成培養(yǎng)液。現(xiàn)將制備培養(yǎng)基母液所需的各類物質(zhì)的量列出,，供配制時(shí)使用,。

大量元素(母液Ⅰ)         mg／L

NH4NO3                      33 000

KNO3                        38 000

CaCl2·2H2O              8 800

MgSO4·7H2O              7 400

KH2PO4                      3 400

微量元素(母液Ⅱ)

KI                       166

H3BO3                       1 240

MnSO4·4H2O              4 460

ZnSO4·7H2O              1 720

Na2MoO4·2H2O            50

CuSO4·5H2O              5

CoCl2·6H2O              5

鐵鹽(母液Ⅲ)

FeSO4·7H2O              5 560

Na2-EDTA·2H2O           7 460

有機(jī)成分(母液Ⅳ)

ⅣA

肌醇                      20 000

ⅣB

煙酸                       100

鹽酸吡哆醇(維生素B6)       100

鹽酸硫胺素(維生素B1)       100

甘氨酸                     400

以上各種營養(yǎng)成分的用量，除了母液Ⅰ為20倍濃縮液外,，其余的均為200倍濃縮液,。

上述幾種母液都要單獨(dú)配成1 L的貯備液。其中,，母液Ⅰ,、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每種母液中的幾種成分稱量完畢后，分別用少量的蒸餾水徹底溶解,，然后再將它們混溶,，最后定容到1 L。

母液Ⅲ的配制方法是：將稱好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分別放到450 mL蒸餾水中,，邊加熱邊不斷攪拌使它們?nèi)芙?，然后將兩種溶液混合，并將pH調(diào)至55,，最后定容到1 L,，保存在棕色玻璃瓶中。

各種母液配完后,，分別用玻璃瓶貯存,，并且貼上標(biāo)簽，注明母液號,、配制倍數(shù),、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。

MS培養(yǎng)基中還需要加入2,，4-二氯苯氧乙酸(2,，4-D)、萘乙酸(NAA),、6芐基嘌呤(6BA)等植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì),，并且分別配成母液(01 mg/mL)。其配制方法是：分別稱取這3種物質(zhì)各10 mg,，將2,，4-D和NAA用少量(1 mL)無水乙醇預(yù)溶，將6BA用少量(1 mL)的物質(zhì)的量濃度為0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,，溶解過程需要水浴加熱,，最后分別定容至100 mL，即得質(zhì)量濃度為01 mg/mL的母液,。

配制培養(yǎng)液  用量筒或移液管從各種母液中分別取出所需的用量：母液Ⅰ為50 mL,，母液Ⅱ、Ⅲ,、ⅣA和ⅣB各5 mL,。再取2，4D 5 mL,、NAA 1 mL,，與各種母液一起放入燒杯中。

配制培養(yǎng)液時(shí)應(yīng)注意：①在使用提前配制的母液時(shí),，應(yīng)在量取各種母液之前,，輕輕搖動(dòng)盛放母液的瓶子，如果發(fā)現(xiàn)瓶中有沉淀,、懸浮物或被微生物污染,，應(yīng)立即淘汰這種母液,，重新進(jìn)行配制,；②用量筒或移液管量取培養(yǎng)基母液之前，必須用所量取的母液將量筒或移液管潤洗2次,；③量取母液時(shí),，最好將各種母液按將要量取的順序?qū)懺诩埳希咳?種,，劃掉1種,，以免出錯(cuò)。

溶化瓊脂  用粗天平分別稱取瓊脂9 g,、蒸糖30 g,，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸餾水750 mL，用電爐加熱,，邊加熱邊用玻璃棒攪拌,，直到液體呈半透明狀。然后再將配好的混合培養(yǎng)液加入到煮沸的瓊脂中,，最后加蒸餾水定容至1 000 mL,，攪拌均勻。

需要注意的是,，在加熱瓊脂,、制備培養(yǎng)基的過程中，操作者千萬不能離開,，否則沸騰的瓊脂外溢,，就需要重新稱量、制備,。此外,，如果沒有搪瓷量杯，可用大燒杯代替,。但要注意大燒杯底的外表面不能沾水,，否則加熱時(shí)燒杯容易炸裂，使溶液外溢,，造成燙傷,。

調(diào)pH  用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中,，邊滴邊攪拌,，并隨時(shí)用精密的pH試紙(54～70)測培養(yǎng)基的pH，一直到培養(yǎng)基的pH為58為止(培養(yǎng)基的pH必須嚴(yán)格控制在58),。

培養(yǎng)基的分裝  溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝,。分裝時(shí)，先將培養(yǎng)基倒入燒杯中,，然后將燒杯中的培養(yǎng)基倒入錐形瓶(50 mL或100 mL)中,。注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。錐形瓶中培養(yǎng)基的量約為錐形瓶容量的1/5～1/4,。每1 000 mL培養(yǎng)基,，可分裝25～30瓶。

培養(yǎng)基分裝完畢后,，應(yīng)及時(shí)封蓋瓶口,。用2塊硫酸紙(每塊大小約為9 cm×9 cm)中間夾1層薄牛皮紙封蓋瓶口，并用線繩捆扎,。最后在錐形瓶外壁貼上標(biāo)簽,。

高壓滅菌  培養(yǎng)基的高壓滅菌包括以下幾個(gè)步驟,。

第一，碼放錐形瓶,。將裝有培養(yǎng)基的錐形瓶直立于金屬小筐中,，再放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)。如果沒有金屬小筐,，可以在兩層錐形瓶之間放一塊玻璃板隔開,。

第二，放置其他需要滅菌的物品,。將其他需要滅菌的物品也放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi),，如裝有蒸餾水的錐形瓶、帶螺口蓋的玻璃瓶,、燒杯,、廣口瓶(以上物品都要用牛皮紙封口)，用牛皮紙包裹的培養(yǎng)皿,、剪刀,、解剖刀、鑷子,、濾紙,、鉛筆等。

第三,，滅菌,。待需要滅菌的物品碼放完畢，蓋上鍋蓋,。在98 kPa,、121.3 ℃下，滅菌20 min,。

滅菌后取出錐形瓶,，讓其中的培養(yǎng)基自然冷卻凝固。最好放置1 d后再使用,。

參考資料：http://www./bbs/PrintPost.asp?ThreadID=144591