大家晚上好呀！今天格外的冷,，打開(kāi)日歷一看,，已經(jīng)步入三九天了，節(jié)氣歌里面唱到“一九二九不出手,，三九四九冰上走”,，北方已經(jīng)開(kāi)始進(jìn)入嚴(yán)冬時(shí)刻，各位小伙伴多注意保暖,，嚴(yán)防流感和病毒 ?。?/span>前面的文章給大家分享了DNA提取過(guò)程中的一些思考,，今天給大家分享一下我們?cè)谶M(jìn)行RNA提取的時(shí)候?yàn)槭裁磿?huì)用到Trizol這一試劑,，大家使用的時(shí)候有沒(méi)有想過(guò)這個(gè)試劑為什么會(huì)用在RNA提取上，RNA也是核酸,，為什么提取DNA的時(shí)候我們不用Trizol呢,？RNA學(xué)名：核糖核酸（RibonucleicAcid），一種核酸分子,，通常為單鏈,，廣泛存在于生物細(xì)胞中，在生命體機(jī)制中發(fā)揮重要作用,，也是部分病毒,，類病毒的遺傳信息的載體。最近網(wǎng)上鬧得沸沸揚(yáng)揚(yáng)的HIV傳播,，也是以RNA的形式在人體內(nèi)傳遞遺傳信息,，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄酶的作用下形成dsDNA，最終在DNA聚合酶的作用下合成病毒雙鏈性DNA,，最后經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄翻譯形成病毒蛋白,。目前對(duì)RNA提取的方式主要是Trizol法或者Trizol結(jié)合硅膠柱法。我們使用的Trizol并不是一個(gè)組分的試劑,，是 Piotr Chomczyński 與 Nicoletta Sacchi 在 1987 年提出的一步分離 RNA 法為基礎(chǔ)發(fā)明的,，而 Trizol 試劑是由 Invitrogen 公司在他們方法的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)并于 1992 年推出的,，距今已經(jīng)20多年了,，還在用這個(gè)方法 。Trizol試劑之所以能夠有效提取RNA,，主要得益于其獨(dú)特的成分：苯酚,、異硫氰酸胍和β-巰基乙醇等,。其中苯酚迅速破壞細(xì)胞膜、核膜等生物膜結(jié)構(gòu),，破壞核蛋白質(zhì)與核酸的結(jié)合,，釋放核酸；異硫氰酸胍則是一種強(qiáng)力的蛋白質(zhì)變性劑,，能夠溶解蛋白質(zhì)并使其二級(jí)結(jié)構(gòu)消失,，從而加速核酸與蛋白質(zhì)的分離還能與 RNase（核酸酶）中的二硫鍵結(jié)合，改變其空間結(jié)構(gòu),，從而強(qiáng)烈抑制 RNase 的活性,；而β-巰基乙醇則通過(guò)破壞RNase中的二硫鍵，有效防止RNA在提取過(guò)程中的降解,。后面再加入氯仿渦旋,，離心分層（下層：苯酚氯仿紅色，中層：有一定厚度的好像灰一樣的東西,，一般DNA和蛋白質(zhì)會(huì)在這一層,，大家每次提的時(shí)候可以觀察一下，尤其是提取植物組織的時(shí)候,，上層：一般無(wú)色,，RNA就在上層），有柱子就過(guò)柱子,，然后洗洗,；沒(méi)柱子就加入異丙醇沉淀后用75%乙醇洗洗就可以獲得了RNA（此處的75%乙醇必須要用無(wú)RNA酶的水配置，否則會(huì)導(dǎo)致RNA降解）,。那么,，問(wèn)題來(lái)了，RNA和DNA都是核酸,，那么Trizol為什么不用于DNA提取呢,？其實(shí)，理論上DNA也可以用Trizol提取,，但是沒(méi)那個(gè)必要,，按照我們導(dǎo)師的話來(lái)講，你就把葉片放在水里面搗一搗也可以把DNA提取出來(lái),，大家能明白了吧?。?/span>但是從Trizol的成份來(lái)看的話,，Trizol 試劑含異硫氰酸胍等成分,，能強(qiáng)烈抑制 RNA 酶活性，以保護(hù) RNA。然而,，這些成分對(duì) DNA 提取有負(fù)面作用,。例如，異硫氰酸胍可能與 DNA 結(jié)合,，改變其結(jié)構(gòu)與性質(zhì),，影響后續(xù)純化與分析。此外,，使用Trizol提取的流程并不適合DNA,，因?yàn)門rizol需要加入氯仿進(jìn)行分層，RNA會(huì)在最上層,，但是DNA會(huì)和蛋白質(zhì)在中間層和底部的有機(jī)層,，后面難以徹底純化分離，就算可以純化出來(lái)DNA,，那也是脫褲子放屁多此一舉,，不如專門DNA提取方法有效。如果對(duì)DNA提取方法感興趣的可以的同學(xué)可以到我前面的推文看一下提取方法,，介紹了SDS,，CTAB，以及磁珠法提取DNA,。好啦,，今天的分享就到這里啦，不知道大家看完后是否明白了Trizol提取的奧秘了呢,？那么,，各位小伙伴都是用什么方法提取的RNA呢？
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