什么是 “癬”? “癬”是由皮膚癬菌感染引起的皮膚癬菌病,,是一種淺部真菌感染性疾病,。根據(jù)典型的臨床表現(xiàn),結(jié)合真菌檢查陽性,,一般可以確診,。 根據(jù)真菌感染人體部位的不同,真菌病可分為深部真菌病和淺部真菌病,。目前常用于真菌感染的實(shí)驗(yàn)室檢查法主要包括:①顯微鏡檢查,;②培養(yǎng)檢查;③組織病理學(xué)檢查法,;④血清學(xué)試驗(yàn),;⑤分子生物學(xué)方法。顯微鏡檢查對(duì)于淺部真菌病最有幫助,。在皮屑,、毛發(fā)或甲屑標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)皮膚癬菌、念珠菌和花斑癬菌可提供對(duì)相應(yīng)真菌病的可靠診斷,。 本文主要科普真菌感染性疾病的直接鏡檢取材方法,、常見染色方法(氫氧化鉀法和鈣熒光白染色法)以及臨床常見淺部真菌感染性疾病(皮膚癬菌病,、念珠菌病,、馬拉色菌感染)的相關(guān)知識(shí)。 取材方法包括刮取法,、拔取法,、粘貼法,、擠取法和拭子法等,。 表1. 真菌感染性疾病的取材方法 臨床常用的染色方法包括氫氧化鉀法、鈣熒光白染色法,、乳酸酚棉藍(lán)法,、墨汁法、派克墨水氫氧化鉀法,、過碘酸-雪夫氏染色法,、革蘭染色法、抗酸染色法,、瑞氏-吉姆薩染色法和六胺銀染色法等,。下面主要介紹氫氧化鉀法和鈣熒光白染色法。 (1)氫氧化鉀法(KOH法) 氫氧化鉀法是臨床最常用的檢測(cè)真菌方法,。氫氧化鉀能消化角蛋白并能清除標(biāo)本中的膿細(xì)胞及其他雜質(zhì)成分,,而短時(shí)間內(nèi)不破壞真菌菌絲和孢子,。一般使用濃度為10%~20%,如檢查角質(zhì)層較厚甲屑,、毛發(fā)等標(biāo)本時(shí)可用20%的氫氧化鉀,。但是,氫氧化鉀濃度過高容易干結(jié)形成結(jié)晶,,長時(shí)間后也可消化真菌成分,。標(biāo)本置于載玻片上,滴加一滴10%~20%氫氧化鉀,,蓋上蓋玻片,,并過火焰2~3次輕微加溫,冷卻后于低倍鏡下觀察有無菌絲和孢子,,然后用高倍鏡觀察孢子和菌絲的形態(tài),、特征、位置,、大小和排列等,。 (2)鈣熒光白染色法(真菌熒光染色法) 鈣熒光白染色法是近年來臨床常用的檢測(cè)真菌方法。鈣熒光增白劑(熒光素標(biāo)記的幾丁質(zhì)酶和葡聚糖結(jié)合蛋白)可與真菌細(xì)胞壁的β- 多糖成分(例如幾丁質(zhì),、纖維素,、葡聚糖、半乳甘露聚糖等)結(jié)合,,熒光顯微鏡的紫外光(波長:340nm-380nm)激發(fā)熒光素發(fā)光,,使結(jié)合熒光素的真菌細(xì)胞壁呈現(xiàn)明亮的藍(lán)白色熒光,易于辨認(rèn),。商品化的真菌熒光染色試劑是一種含有熒光素,、氫氧化鉀和抑制背景熒光著色試劑的復(fù)合溶液。氫氧化鉀能消化標(biāo)本中的角蛋白和雜質(zhì),,使組織背景更透明,,而背景復(fù)染劑能降低標(biāo)本的背景亮度,使熒光信號(hào)更加清晰,,均有助于更清晰地觀察真菌結(jié)構(gòu),。標(biāo)本置于載玻片上,滴加一滴熒光染料,,蓋上蓋玻片,,于低倍鏡下觀察有無菌絲和孢子,然后用高倍鏡觀察孢子和菌絲的形態(tài),、特征,、位置、大小和排列等,。 皮膚癬菌?。―ermatophytosis) 皮膚癬菌病,,簡稱癬,是由皮膚癬菌侵犯人和動(dòng)物的皮膚,、毛發(fā)和甲板引起的一種淺部真菌病,。根據(jù)感染部位的不同,皮膚癬菌病可分為頭癬,、面癬,、須癬、體癬,、股癬,、陰囊癬、手癬,、足癬和甲癬等,。根據(jù)皮膚癬菌病的典型臨床表現(xiàn),直接真菌鏡檢發(fā)現(xiàn)菌絲和/或孢子,,一般可以確診皮膚癬菌病,。 光滑皮膚的皮膚癬菌病(例如面癬、須癬,、體癬,、股癬、陰囊癬,、手癬,、足癬等),取材時(shí)先用75%酒精消毒皮損部位,,再用無菌鈍刀刮取皮損的活動(dòng)邊緣鱗屑,。趾間浸漬的皮損應(yīng)刮取糜爛面皮損或活動(dòng)的邊緣。若有多處皮損,,應(yīng)取未經(jīng)治療,、炎癥明顯的皮損;若有水皰,,應(yīng)取皰壁,;若為膿皰,應(yīng)取膿液,。一般選擇KOH法和真菌熒光染色法進(jìn)行皮膚癬菌病直接鏡檢制片。 表2. 光滑皮膚的皮膚癬菌病顯微鏡下特征 圖1.表皮癬菌顯微鏡下形態(tài) 頭癬是指累及頭發(fā)和頭皮的皮膚癬菌感染,,是臨床最常見的毛發(fā)真菌感染,。根據(jù)病原菌種類和臨床表現(xiàn)的不同,可將頭癬分為白癬,、黑點(diǎn)癬,、黃癬和膿癬4種類型,。小孢子菌屬和毛癬菌屬皮膚癬菌為頭癬的主要病原菌。取材標(biāo)本應(yīng)包括病發(fā)發(fā)根,、堵塞毛囊的斷發(fā)和頭皮鱗屑,。在濾過紫外線燈下或皮膚鏡下粗篩,先以75%酒精消毒病變部位,,再以小鑷子拔取濾過紫外線燈下熒光陽性,、脆而松動(dòng)的病發(fā),或皮膚鏡下呈黑點(diǎn),、螺旋狀,、條形碼樣、逗號(hào)樣的病發(fā),,連根拔出或連根折斷,,數(shù)量以5~6根為宜。頭癬一般選擇 KOH 法和真菌熒光染色法進(jìn)行直接鏡檢制片,。有些毛發(fā)標(biāo)本毛干外有許多油脂,,妨礙直接檢查和染色,可加1滴乙醚或95%酒精,,等待數(shù)分鐘后再檢查,。 表3. 頭癬類型及其顯微鏡下特征 備注:真菌熒光染色法顯微鏡下可見頭癬發(fā)內(nèi)外孢子、菌絲更加清晰,,熒光為亮綠色或藍(lán)色的圓形孢子,、關(guān)節(jié)孢子和分支分隔菌絲。 圖2.頭發(fā)癬菌顯微鏡下形態(tài) 甲癬,,俗稱“灰指甲”,,是特指皮膚癬菌感染引起的甲真菌病,以紅色毛癬菌,、趾間毛癬菌和絮狀表皮癬菌為主要病原菌,。同一指/趾甲可能感染2種或2種以上的致病真菌。用無菌鈍刀刮取在甲病變區(qū)與正常區(qū)交界處靠近甲床端的甲屑(此處病變的甲屑中真菌菌絲及孢子活力較強(qiáng)),。一般選擇KOH法或真菌熒光染色法進(jìn)行直接鏡檢制片,。 表4. 甲真菌病的顯微鏡下特征 備注:熒光染色法顯微鏡下菌絲結(jié)構(gòu)和間隔較KOH法更為清晰,可見亮綠色或藍(lán)色熒光染色均勻的真菌菌絲,、鏈狀孢子,。 圖3.甲癬菌顯微鏡下形態(tài) 念珠菌病(Candidiasis) 念珠菌病是由念珠菌屬致病菌引起的感染,,可引起皮膚,、黏膜淺表感染,也可累及內(nèi)臟器官引起深部感染,。根據(jù)感染部位的不同,,念珠菌病可分為皮膚黏膜念珠菌病和深部念珠菌病兩大類,。皮膚感染可表現(xiàn)為念珠菌性間擦疹、念珠菌性尿布皮炎,、丘疹性念珠菌病,、念珠菌性甲溝炎、甲念珠菌病,、念珠菌性肉芽腫和慢性黏膜皮膚念珠菌病等,。黏膜感染主要表現(xiàn)為鵝口瘡、念珠菌性口角炎,、外陰陰道念珠菌病和念珠菌性包皮龜頭炎等,。皮膚念珠菌病一般取材部位選擇領(lǐng)圈樣脫屑的新鮮皮損。一般選擇KOH法和真菌熒光染色法進(jìn)行直接鏡檢制片,。 表5. 皮膚念珠菌病的顯微鏡下特征 圖4.念珠菌顯微鏡下形態(tài) 馬拉色菌感染(Malassezia infections) 馬拉色菌是常駐于人體皮膚的嗜脂性酵母,,臨床上主要引起花斑糠疹(俗稱“花斑癬”或“汗斑”)和馬拉色菌毛囊炎(曾稱“糠秕孢子菌毛囊炎 ”),也與脂溢性皮炎,、特應(yīng)性皮炎,、皮膚垢著病和融合性網(wǎng)狀乳頭瘤病等密切相關(guān),偶可引起甲感染,、系統(tǒng)性感染等,。馬拉色菌屬目前已發(fā)現(xiàn)14個(gè)種,其中球形馬拉色菌,、合軸馬拉色菌,、糠秕馬拉色菌和限制馬拉色菌是中國人群的優(yōu)勢(shì)菌。 花斑糠疹和馬拉色菌毛囊炎的診斷主要根據(jù)臨床表現(xiàn),,結(jié)合真菌檢查陽性即可確診,。其他馬拉色菌相關(guān)性疾病的診斷需結(jié)合臨床表現(xiàn)的嚴(yán)重程度及皮損區(qū)馬拉色菌的定植量來綜合判斷。 炎癥型,、色沉型或色減型花斑糠疹的皮損均可選擇表面覆蓋細(xì)薄鱗屑的部分,。可用無菌取樣刀刮取鱗屑,,也可用透明膠帶粘貼于皮損撕下,。馬拉色菌毛囊炎應(yīng)選擇毛囊性紅色小丘疹,避免選取膿皰性丘疹,,用鑷子將毛囊角栓小心擠出后壓片,,角栓較厚的標(biāo)本可在酒精燈火焰微加溫使角質(zhì)溶解后檢查。一般選擇KOH法和真菌熒光染色法進(jìn)行直接鏡檢制片,,此外,,還可選擇派克墨水氫氧化鉀法或沙黃染色法。 表6. 馬拉色菌感染的顯微鏡下特征 備注:熒光染色法顯微鏡下菌絲和孢子呈亮綠色或藍(lán)色熒光染色,,背景反差大,,較KOH法更為清晰易辨。 圖5.花斑癬菌顯微鏡下形態(tài) 圖6.糠秕孢子菌顯微鏡下形態(tài) 參考文獻(xiàn) 1.席麗艷,魯長明.常見真菌感染性疾病直接鏡檢圖譜[M].廣州:廣東科技出版社,2020. 2.盧洪洲,錢學(xué)琴,徐和平.醫(yī)學(xué)真菌檢驗(yàn)與圖解[M].上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,2017. 3.王端禮.醫(yī)學(xué)真菌學(xué)-實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)指南[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2005. 作者:林妙芬(云浮市慢性病防治中心) 編輯:一棵樹 考職稱就用基檢通題庫,! |
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